鹽酸左旋咪唑?qū)γ庖吖δ艿拖滦∈竺庖吖δ艿挠绊?/h1>
2018-12-14 12:30:52林燕飛高芳芳
食品與藥品 2018年6期
林燕飛，張 琴，高芳芳*
（1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510000；2. 西安碑林藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710048；3. 延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000）
近年我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)逐年增加，化療仍是目前治療惡性腫瘤的主要手段。化療會(huì)導(dǎo)致絕大多數(shù)患者免疫功能受損，誘發(fā)嚴(yán)重感染等并發(fā)癥[1-2]。所以開(kāi)發(fā)免疫功能增強(qiáng)藥物具有重要意義。鹽酸左旋咪唑除了常作為驅(qū)蟲(chóng)藥使用外，還具有免疫調(diào)節(jié)作用，可有效改善患者免疫功能[3-4]。本研究采用經(jīng)典化療藥物環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠模型，觀察不同劑量鹽酸左旋咪唑?qū)δＰ托∈竺庖吖δ艿挠绊懀F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1 材料
1.1 儀器
UV-8000型雙光束觸屏紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器公司）；CTK132C型離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)儀器公司）；ME1002TE型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 藥品與試劑
注射用環(huán)磷酰胺（德國(guó)Baxter Oncology GmbH，批號(hào)：20170325）；胸腺肽腸溶片（黑龍江迪龍制藥，批號(hào)：20170314）；鹽酸左旋咪唑（山東仁和堂藥業(yè)，批號(hào)：20170216）；二硝基氯苯、丙酮（國(guó)藥集團(tuán)）；血清IgG酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（上海生工）。
1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)條件
昆明種小鼠，雄性，體重15～20 g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（合格證號(hào)：SCXK京2011-0012），購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后再用于實(shí)驗(yàn)；維持動(dòng)物房溫度22～25 ℃，濕度55%～65%，12 h/12 h光暗周期，自由飲食。
2 方法
2.1 動(dòng)物分組、造模與給藥
昆明種小鼠隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，胸腺肽10 mg/kg對(duì)照組，鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg 3個(gè)劑量組，每組15只。各給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物溶液10 ml/kg，每天1次，連續(xù)15 d?？瞻捉M和模型組給予等容積的生理鹽水。從給藥的第5天開(kāi)始，除空白組外，其余5組均皮下注射環(huán)磷酰胺 40 mg/kg，每隔3 d注射1次，以制備免疫功能低下小鼠模型。
2.1.1 血清IgG含量測(cè)定及胸腺和脾臟指數(shù)計(jì)算 末次給藥后24 h，球后靜脈采血，3000 r/min離心15 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定血清IgG含量。然后頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠，稱量胸腺和脾臟濕質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)。胸腺指數(shù)=胸腺濕重/體質(zhì)量，脾臟指數(shù)=脾臟濕重/體質(zhì)量。
2.1.2 單核巨噬細(xì)胞吞噬能力檢測(cè) 采用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬能力，具體操作如下：末次給藥后24 h，按0.1 ml/10 g的量注射印度墨汁，分別于注射后2，12 min時(shí)取眼眶血20 μl，加入0.1%碳酸鈉溶液20 μl，搖勻后靜置10 min，測(cè)定680 nm處的光密度（OD）值。頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠，稱量體質(zhì)量、肝脾質(zhì)量。吞噬指數(shù)（K）=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1），吞噬系數(shù)（α）=K×1/3×體質(zhì)量/肝脾質(zhì)量。
2.2 二硝基氯苯所致遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
分組、造模與給藥方法同2.1。末次給藥后24 h，小鼠頸部去毛，次日于去毛處涂抹50%二硝基氯苯丙酮溶液2 ml。次日，腹部皮膚再次涂抹50%二硝基氯苯丙酮溶液2 ml，激發(fā)。次日，尾靜脈注射1%伊文士藍(lán)，30 min后頸椎脫臼法處死，剝離腹部藍(lán)色皮膚，剪碎，用4 ml丙酮和生理鹽水（1:1）混合溶液浸泡24 h，離心取上清，測(cè)定610 nm處的OD值。
2.3 雞紅細(xì)胞血清溶血素實(shí)驗(yàn)
分組、造模與給藥方法同2.1項(xiàng)。從給藥的第5天開(kāi)始，除空白組外，其余5組均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml。末次給藥后24 h，取股動(dòng)脈血，3000 r/min離心15 min，分離血清。生理鹽水稀釋100倍后，取稀釋血清1 ml與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml混合，再加入10%豚鼠血清0.5 ml。37 ℃孵育30 min，0 ℃終止反應(yīng)，離心取上清，測(cè)定540 nm處的OD值。
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，所有計(jì)量數(shù)據(jù)用（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組內(nèi)比較采用LSD-t分析。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 結(jié)果
3.1 各組小鼠血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及單核巨噬細(xì)胞吞噬能力比較
與空白組比較，模型組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，胸腺肽組及鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值均明顯提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組組間血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 各組小鼠血清IgG含量及胸腺和脾臟指數(shù)比較（±s，n=15）
表1 各組小鼠血清IgG含量及胸腺和脾臟指數(shù)比較（±s，n=15）
注：*P＜0.05 vs 空白組；#P＜0.05 vs 模型組；ΔP＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑15 mg/kg組；?P＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑5 mg/kg組
組別 劑量/mg·kg-1 IgG/μg·ml-1 胸腺指數(shù)/g·kg-1 脾臟指數(shù)/g·kg-1 K值 α值空白組 – 2.21±0.09 3.45±1.03 5.77±1.33 0.061±0.032 6.143±1.109模型組 10 1.44±0.13* 1.31±0.94* 2.14±0.98* 0.021±0.009* 4.431±0.563*胸腺肽組 10 2.00±0.10# 2.90±0.95# 4.87±1.21# 0.049±0.020# 5.976±0.994#1.68±0.08#Δ 2.17±0.84#Δ 3.89±1.15#Δ 0.030±0.014#Δ 4.447±0.067#Δ 10 1.84±0.12#Δ 2.78±0.91#Δ? 4.32±1.27#Δ? 0.041±0.017#Δ? 5.107±0.908#Δ?15 2.10±0.09# 3.12±1.00# 5.12±1.30# 0.052±0.024# 6.009±1.001#5鹽酸左旋咪唑組
3.2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值比較
與空白組比較，模型組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，胸腺肽組及鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均明顯提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組組間遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。
4 討論
免疫功能受損是惡性腫瘤化療的常見(jiàn)不良反應(yīng)之一，臨床主要表現(xiàn)為食欲減退、身體疲乏、精神萎靡，檢查可發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞和血小板水平降低，巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞活性降低等[5-6]。免疫功能受損可能加速癌細(xì)胞擴(kuò)散或引起嚴(yán)重感染等發(fā)生，不利于患者的治療。所以開(kāi)發(fā)免疫功能增強(qiáng)藥物具有重要意義。本研究采用經(jīng)典化療藥物環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠模型，觀察不同劑量鹽酸左旋咪唑?qū)δＰ托∈竺庖吖δ艿挠绊憽＝Y(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)、K值和α值、遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均顯著降低。這也證實(shí)了化療藥物環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致小鼠免疫功能低下。
表2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素比較（±s，n=15）
表2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素比較（±s，n=15）
注：*P＜0.05 vs 空白組；#P＜0.05 vs 模型組；ΔP＜0.05 vs鹽酸左旋咪唑15 mg/kg組；?P＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑5 mg/kg組
5 0.400±0.117#Δ 0.431±0.120#Δ 10 0.487±0.139#Δ? 0.519±0.149#Δ?15 0.521±0.154# 0.599±0.165#/mg·kg-1遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)OD值組別 劑量 血清溶血素OD值空白組 – 0.534±0.167 0.614±0.171模型組 10 0.209±0.087* 0.223±0.094*胸腺肽組 10 0.508±0.146# 0.547±0.143#鹽酸左旋咪唑組
血清IgG 是血清主要的抗體成分，約占血清Ig總量的75%，具有抗菌、抗病毒作用[7]。由于IgG結(jié)合補(bǔ)體、增強(qiáng)免疫細(xì)胞吞噬功能等發(fā)面的作用優(yōu)于其他免疫球蛋白，所以血清IgG含量是反映體液免疫的重要指標(biāo)[8]。胸腺、脾臟是機(jī)體主要免疫器官，是免疫反應(yīng)的主要場(chǎng)所，所以測(cè)定胸腺和脾臟指數(shù)能反映免疫功能[9]。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及低、中、高劑量組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)均明顯提高，且低、中、高劑量組上述各指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可提高環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫功能低下，且其效果呈劑量依賴性。
巨噬細(xì)胞是結(jié)締組織中的固有細(xì)胞，能吞噬和殺滅外界的病原微生物，也能處理自身?yè)p傷和衰老的細(xì)胞，能有效殺滅腫瘤細(xì)胞，其活性直接影響機(jī)體免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱程度[10-11]。所以增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力可有效提高免疫功能。本研究采用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬能力，將印度墨汁自尾靜脈注射，經(jīng)血液循環(huán)帶至脾臟等處，根據(jù)血液中碳粒濃度計(jì)算K值和α值。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組以及低、中、高劑量組K值和α值均明顯提高，且低、中、高劑量組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可呈劑量依賴性提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力。
遲發(fā)型超敏反應(yīng)是T細(xì)胞依賴性反應(yīng)，其機(jī)制是已經(jīng)致敏的機(jī)體（本研究使用50%二硝基氯苯丙酮溶液），再次在抗原的攻擊下可出現(xiàn)遲發(fā)型炎癥反應(yīng)，并通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值判斷遲發(fā)型炎癥反應(yīng)的程度[12-13]。免疫溶血實(shí)驗(yàn)的主要機(jī)制是，雞紅細(xì)胞致敏小鼠血清中存在IgM，所以致敏小鼠血清再次與雞紅細(xì)胞在體外孵育，并在補(bǔ)體（本研究使用豚鼠血清）的參與下發(fā)生溶血反應(yīng)，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定溶血程度可反映抗體溶血素的水平[14-15]。本研究的結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及低、中、高劑量組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均明顯提高，且低、中、高劑量組上述各指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可呈劑量依賴性提高小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能。
綜上，鹽酸左旋咪唑呈劑量依賴性提高環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫功能低下，提示其或可治療腫瘤化療或其他疾病導(dǎo)致的免疫功能低下，尚需做進(jìn)一步研究，全面評(píng)價(jià)。
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（1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510000；2. 西安碑林藥業(yè)股份有限公司，陜西 西安 710048；3. 延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 延安 716000）
近年我國(guó)惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)逐年增加，化療仍是目前治療惡性腫瘤的主要手段。化療會(huì)導(dǎo)致絕大多數(shù)患者免疫功能受損，誘發(fā)嚴(yán)重感染等并發(fā)癥[1-2]。所以開(kāi)發(fā)免疫功能增強(qiáng)藥物具有重要意義。鹽酸左旋咪唑除了常作為驅(qū)蟲(chóng)藥使用外，還具有免疫調(diào)節(jié)作用，可有效改善患者免疫功能[3-4]。本研究采用經(jīng)典化療藥物環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠模型，觀察不同劑量鹽酸左旋咪唑?qū)δＰ托∈竺庖吖δ艿挠绊懀F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1 材料
1.1 儀器
UV-8000型雙光束觸屏紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器公司）；CTK132C型離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)儀器公司）；ME1002TE型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 藥品與試劑
注射用環(huán)磷酰胺（德國(guó)Baxter Oncology GmbH，批號(hào)：20170325）；胸腺肽腸溶片（黑龍江迪龍制藥，批號(hào)：20170314）；鹽酸左旋咪唑（山東仁和堂藥業(yè)，批號(hào)：20170216）；二硝基氯苯、丙酮（國(guó)藥集團(tuán)）；血清IgG酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（上海生工）。
1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)條件
昆明種小鼠，雄性，體重15～20 g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（合格證號(hào)：SCXK京2011-0012），購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后再用于實(shí)驗(yàn)；維持動(dòng)物房溫度22～25 ℃，濕度55%～65%，12 h/12 h光暗周期，自由飲食。
2 方法
2.1 動(dòng)物分組、造模與給藥
昆明種小鼠隨機(jī)分為6組：空白組，模型組，胸腺肽10 mg/kg對(duì)照組，鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg 3個(gè)劑量組，每組15只。各給藥組灌胃給予相應(yīng)的藥物溶液10 ml/kg，每天1次，連續(xù)15 d?？瞻捉M和模型組給予等容積的生理鹽水。從給藥的第5天開(kāi)始，除空白組外，其余5組均皮下注射環(huán)磷酰胺 40 mg/kg，每隔3 d注射1次，以制備免疫功能低下小鼠模型。
2.1.1 血清IgG含量測(cè)定及胸腺和脾臟指數(shù)計(jì)算 末次給藥后24 h，球后靜脈采血，3000 r/min離心15 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定血清IgG含量。然后頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠，稱量胸腺和脾臟濕質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)。胸腺指數(shù)=胸腺濕重/體質(zhì)量，脾臟指數(shù)=脾臟濕重/體質(zhì)量。
2.1.2 單核巨噬細(xì)胞吞噬能力檢測(cè) 采用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬能力，具體操作如下：末次給藥后24 h，按0.1 ml/10 g的量注射印度墨汁，分別于注射后2，12 min時(shí)取眼眶血20 μl，加入0.1%碳酸鈉溶液20 μl，搖勻后靜置10 min，測(cè)定680 nm處的光密度（OD）值。頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠，稱量體質(zhì)量、肝脾質(zhì)量。吞噬指數(shù)（K）=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1），吞噬系數(shù)（α）=K×1/3×體質(zhì)量/肝脾質(zhì)量。
2.2 二硝基氯苯所致遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
分組、造模與給藥方法同2.1。末次給藥后24 h，小鼠頸部去毛，次日于去毛處涂抹50%二硝基氯苯丙酮溶液2 ml。次日，腹部皮膚再次涂抹50%二硝基氯苯丙酮溶液2 ml，激發(fā)。次日，尾靜脈注射1%伊文士藍(lán)，30 min后頸椎脫臼法處死，剝離腹部藍(lán)色皮膚，剪碎，用4 ml丙酮和生理鹽水（1:1）混合溶液浸泡24 h，離心取上清，測(cè)定610 nm處的OD值。
2.3 雞紅細(xì)胞血清溶血素實(shí)驗(yàn)
分組、造模與給藥方法同2.1項(xiàng)。從給藥的第5天開(kāi)始，除空白組外，其余5組均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml。末次給藥后24 h，取股動(dòng)脈血，3000 r/min離心15 min，分離血清。生理鹽水稀釋100倍后，取稀釋血清1 ml與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml混合，再加入10%豚鼠血清0.5 ml。37 ℃孵育30 min，0 ℃終止反應(yīng)，離心取上清，測(cè)定540 nm處的OD值。
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，所有計(jì)量數(shù)據(jù)用（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組內(nèi)比較采用LSD-t分析。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 結(jié)果
3.1 各組小鼠血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及單核巨噬細(xì)胞吞噬能力比較
與空白組比較，模型組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，胸腺肽組及鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值均明顯提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組組間血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)及K值和α值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 各組小鼠血清IgG含量及胸腺和脾臟指數(shù)比較（±s，n=15）
表1 各組小鼠血清IgG含量及胸腺和脾臟指數(shù)比較（±s，n=15）
注：*P＜0.05 vs 空白組；#P＜0.05 vs 模型組；ΔP＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑15 mg/kg組；?P＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑5 mg/kg組
組別 劑量/mg·kg-1 IgG/μg·ml-1 胸腺指數(shù)/g·kg-1 脾臟指數(shù)/g·kg-1 K值 α值空白組 – 2.21±0.09 3.45±1.03 5.77±1.33 0.061±0.032 6.143±1.109模型組 10 1.44±0.13* 1.31±0.94* 2.14±0.98* 0.021±0.009* 4.431±0.563*胸腺肽組 10 2.00±0.10# 2.90±0.95# 4.87±1.21# 0.049±0.020# 5.976±0.994#1.68±0.08#Δ 2.17±0.84#Δ 3.89±1.15#Δ 0.030±0.014#Δ 4.447±0.067#Δ 10 1.84±0.12#Δ 2.78±0.91#Δ? 4.32±1.27#Δ? 0.041±0.017#Δ? 5.107±0.908#Δ?15 2.10±0.09# 3.12±1.00# 5.12±1.30# 0.052±0.024# 6.009±1.001#5鹽酸左旋咪唑組
3.2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值比較
與空白組比較，模型組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，胸腺肽組及鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均明顯提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鹽酸左旋咪唑5，10，15 mg/kg組組間遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。
4 討論
免疫功能受損是惡性腫瘤化療的常見(jiàn)不良反應(yīng)之一，臨床主要表現(xiàn)為食欲減退、身體疲乏、精神萎靡，檢查可發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞和血小板水平降低，巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞活性降低等[5-6]。免疫功能受損可能加速癌細(xì)胞擴(kuò)散或引起嚴(yán)重感染等發(fā)生，不利于患者的治療。所以開(kāi)發(fā)免疫功能增強(qiáng)藥物具有重要意義。本研究采用經(jīng)典化療藥物環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫功能低下小鼠模型，觀察不同劑量鹽酸左旋咪唑?qū)δＰ托∈竺庖吖δ艿挠绊憽＝Y(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)、K值和α值、遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均顯著降低。這也證實(shí)了化療藥物環(huán)磷酰胺可導(dǎo)致小鼠免疫功能低下。
表2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素比較（±s，n=15）
表2 各組小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素比較（±s，n=15）
注：*P＜0.05 vs 空白組；#P＜0.05 vs 模型組；ΔP＜0.05 vs鹽酸左旋咪唑15 mg/kg組；?P＜0.05 vs 鹽酸左旋咪唑5 mg/kg組
5 0.400±0.117#Δ 0.431±0.120#Δ 10 0.487±0.139#Δ? 0.519±0.149#Δ?15 0.521±0.154# 0.599±0.165#/mg·kg-1遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)OD值組別 劑量 血清溶血素OD值空白組 – 0.534±0.167 0.614±0.171模型組 10 0.209±0.087* 0.223±0.094*胸腺肽組 10 0.508±0.146# 0.547±0.143#鹽酸左旋咪唑組
血清IgG 是血清主要的抗體成分，約占血清Ig總量的75%，具有抗菌、抗病毒作用[7]。由于IgG結(jié)合補(bǔ)體、增強(qiáng)免疫細(xì)胞吞噬功能等發(fā)面的作用優(yōu)于其他免疫球蛋白，所以血清IgG含量是反映體液免疫的重要指標(biāo)[8]。胸腺、脾臟是機(jī)體主要免疫器官，是免疫反應(yīng)的主要場(chǎng)所，所以測(cè)定胸腺和脾臟指數(shù)能反映免疫功能[9]。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及低、中、高劑量組血清IgG含量、胸腺和脾臟指數(shù)均明顯提高，且低、中、高劑量組上述各指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可提高環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫功能低下，且其效果呈劑量依賴性。
巨噬細(xì)胞是結(jié)締組織中的固有細(xì)胞，能吞噬和殺滅外界的病原微生物，也能處理自身?yè)p傷和衰老的細(xì)胞，能有效殺滅腫瘤細(xì)胞，其活性直接影響機(jī)體免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱程度[10-11]。所以增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬能力可有效提高免疫功能。本研究采用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬能力，將印度墨汁自尾靜脈注射，經(jīng)血液循環(huán)帶至脾臟等處，根據(jù)血液中碳粒濃度計(jì)算K值和α值。本研究結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組以及低、中、高劑量組K值和α值均明顯提高，且低、中、高劑量組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可呈劑量依賴性提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力。
遲發(fā)型超敏反應(yīng)是T細(xì)胞依賴性反應(yīng)，其機(jī)制是已經(jīng)致敏的機(jī)體（本研究使用50%二硝基氯苯丙酮溶液），再次在抗原的攻擊下可出現(xiàn)遲發(fā)型炎癥反應(yīng)，并通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值判斷遲發(fā)型炎癥反應(yīng)的程度[12-13]。免疫溶血實(shí)驗(yàn)的主要機(jī)制是，雞紅細(xì)胞致敏小鼠血清中存在IgM，所以致敏小鼠血清再次與雞紅細(xì)胞在體外孵育，并在補(bǔ)體（本研究使用豚鼠血清）的參與下發(fā)生溶血反應(yīng)，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定溶血程度可反映抗體溶血素的水平[14-15]。本研究的結(jié)果顯示：與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及低、中、高劑量組遲發(fā)型超敏反應(yīng)OD值和血清溶血素OD值均明顯提高，且低、中、高劑量組上述各指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示鹽酸左旋咪唑可呈劑量依賴性提高小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫功能。
綜上，鹽酸左旋咪唑呈劑量依賴性提高環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫功能低下，提示其或可治療腫瘤化療或其他疾病導(dǎo)致的免疫功能低下，尚需做進(jìn)一步研究，全面評(píng)價(jià)。
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