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動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的慢性炎癥[1]，雖然炎癥反應(yīng)可能由多種機(jī)制所觸發(fā)，但主要是由于腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)等促炎因子與脂聯(lián)素(adiponectin，APN)、一氧化氮(NO)等抗炎因子的失衡所致。MCP-1作為誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化作用的重要因子，與動(dòng)脈硬化進(jìn)展過(guò)程密切相關(guān)，APN可減少血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)MCP-1等炎癥因子的表達(dá)，從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。本研究觀察在動(dòng)脈硬化進(jìn)展過(guò)程中脂餐負(fù)荷前后MCP-1、APN水平的變化情況，探討脂餐負(fù)荷在不同階段對(duì)炎癥因子和動(dòng)脈硬化的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 選取健康雄性新西蘭大白兔10只，體重2.4 kg～3.0 kg，購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。膽固醇購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司。MCP-1、APN檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海西塘生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 10只大白兔單籠喂養(yǎng)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后給予高脂(1%膽固醇+10%蛋黃+89%基礎(chǔ)飼料)飲食共12周，分別于初始、第4周、第8周、第12周禁水、禁食8 h后給予脂餐負(fù)荷(2%膽固醇+20%蛋黃+78%基礎(chǔ)飼料)。

1.3 MCP-1與APN檢測(cè) 于實(shí)驗(yàn)初始、第4周、第8周、第12周給予脂餐負(fù)荷，經(jīng)耳緣靜脈分別采集空腹、脂餐負(fù)荷后第2小時(shí)、第4小時(shí)、第6小時(shí)、第8小時(shí)血樣，每次采血約3 mL，靜置后經(jīng)離心機(jī)離心，分離血清置于抗凝管中，冰凍于-80 ℃冰箱中儲(chǔ)存。待血樣全部收集完畢后用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)血清中MCP-1、APN濃度，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書操作。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)終止時(shí)，10只新西蘭大白兔均出現(xiàn)了腹主動(dòng)脈粥樣硬化。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，脂餐負(fù)荷前后MCP-1及APN變化情況詳見(jiàn)表1、表2。

表1 動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中脂餐負(fù)荷前后MCP-1水平變化(±s) nmol/L

表2 動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中脂餐負(fù)荷前后APN水平變化(±s) nmol/L

3 討 論

眾所周知，動(dòng)脈粥樣硬化是由多種因素經(jīng)過(guò)復(fù)雜的相互作用而形成的炎癥性疾病。MCP-1是CC亞族中一種重要的趨化因子，能夠與CCR2結(jié)合[2]，使單核細(xì)胞向受損的內(nèi)皮細(xì)胞聚集、黏附，進(jìn)而遷入內(nèi)皮下活化形成巨噬細(xì)胞，然后不斷在粥樣斑塊中聚集形成泡沫細(xì)胞，從而發(fā)揮促動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的作用[3-4]。MCP-1對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化晚期平滑肌細(xì)胞的增生、遷移形成平滑肌肌源細(xì)胞的過(guò)程也有一定的影響。目前已有研究證明動(dòng)脈粥樣硬化的血管組織中平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞均存在MCP-1 mRNA表達(dá)[5]。Hoogeveeen等[6]研究發(fā)現(xiàn)血漿中MCP-1的表達(dá)會(huì)隨著動(dòng)脈粥樣硬化程度的加重而增加。本研究中，隨著高脂飲食喂養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，動(dòng)脈硬化逐漸加重，MCP-1含量呈升高趨勢(shì)，第12周時(shí)含量最高，這一結(jié)果與上述研究成果相似。脂餐負(fù)荷后，第4周MCP-1含量總體呈升高趨勢(shì)，餐后2 h、4 h、6 h、8 h均比初始升高，餐后8 h含量最高，可能由于脂餐負(fù)荷后炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞增生，合成和釋放MCP-1增多所致。

APN是由脂肪細(xì)胞表達(dá)和分泌的一種特異性蛋白質(zhì)，它可以通過(guò)抑制泡沫細(xì)胞的形成[7]，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖與遷移，以及抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥從而發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。目前有學(xué)者認(rèn)為通過(guò)監(jiān)測(cè)血漿APN水平，可早期篩查動(dòng)脈粥樣硬化高危人群以及早期防治動(dòng)脈粥樣硬化，但尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。陳燕銘等[8]通過(guò)檢測(cè)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化病人血清APN濃度，發(fā)現(xiàn)隨著動(dòng)脈粥樣硬化程度的加重APN濃度逐漸降低，同時(shí)可以抑制血管細(xì)胞黏附因子(VCAM-1)、MCP-1等在動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)。本研究顯示，在動(dòng)脈粥弱硬化進(jìn)展過(guò)程中，APN含量呈逐漸下降趨勢(shì)，第12周含量最低，MCP-1含量呈逐漸升高趨勢(shì)，表明APN與動(dòng)脈粥樣硬化程度呈負(fù)相關(guān)。脂餐負(fù)荷后，APN含量呈下降趨勢(shì)，餐后6 h含量最低，同時(shí)MCP-1水平升高，提示脂餐負(fù)荷后炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，可能與MCP-1表達(dá)增加，APN被抑制有關(guān)，此后APN開始升高，可能與活化的巨噬細(xì)胞去活化有關(guān)。MCP-1脂餐負(fù)荷后4 h、6 h總體變化較小，而APN水平呈下降趨勢(shì)，提示動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展過(guò)程中，脂餐負(fù)荷后機(jī)體抑制巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞形成能力以及抑制平滑肌細(xì)胞增殖作用減弱，MCP-1與APN水平逐漸失衡。總之，在不斷給予高脂飲食的過(guò)程中炎癥反應(yīng)在不斷加重。

關(guān)于本次對(duì)脂餐負(fù)荷前后MCP-1、APN的變化規(guī)律及機(jī)制的研究，由于樣本數(shù)量有限，尚需進(jìn)一步深入研究。