石沁 歐陽紅梅 宋建新

摘 要：目的 探討CLL患者骨髓中INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10及IL-1β水平的變化及意義。方法 選取我院初診CLL患者66例為病例組，根據(jù)Binet分期分為BinetA期29例，BinetB期21例，BinetC期16例；選取同期來我院健康體檢者30例為對(duì)照組，另取38例治療中的CLL患者為治療組。應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析各組患者骨髓INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β表達(dá)，觀察在CLL患者不同時(shí)期的表達(dá)差異。結(jié)果 IFN-γ、IL-2表達(dá)在CLL各組中均低于對(duì)照組（P<0.05），而BinetC期患者表達(dá)低于BinetB期（P<0.05），BinetB期低于BinetA期（P<0.05），與Binet分期呈負(fù)相關(guān)。INF-γ、IL-2在CLL治療后雖高于BinetA期，但P>0.05，而低于對(duì)照組（P<0.05）。IL-4、IL-10、IL-1β表達(dá)高于對(duì)照組（P<0.05），BinetB期高于BinetA期（P<0.05），BinetC期高于BinetB期（P<0.05），與Binet分期呈正相關(guān)。治療后IL-4、IL-10、IL-Iβ與BinetA期比較有所降低，但P>0.05，與對(duì)照組比較仍高于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 CLL患者骨髓微環(huán)境細(xì)胞因子表達(dá)紊亂，Th1類細(xì)胞因子INF-γ、IL-2隨著CLL Binet分期的進(jìn)展逐漸減低，IL-4、IL-10、IL-1β則逐漸增高，與CLL的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

關(guān)鍵詞：慢性淋巴細(xì)胞白血??；骨髓；細(xì)胞因子

中圖分類號(hào)：R733.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.047

文章編號(hào)：1006-1959（2018）17-0149-03

Abstract：Objective To investigate the changes and significance of INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10 and IL-1β in marrow of CLL patients.Methods 66 patients with newly diagnosed CLL in our hospital were selected as the case group.According to Binet stage，there were 29 cases of BinetA stage，21 cases of BinetB stage and 16 cases of BinetC stage.30 cases of healthy physical examination in our hospital were selected as control group.The CLL patients in the treatment group were the treatment group.Another 38 patients with CLL under treatment were treated.The expressions of INF-γ，IL-2，IL-4，IL-10 and IL-1β in marrow of each group were analyzed by flow cytometry，and the expression differences in different periods of CLL patients were observed.Results The expressions of IFN-γ and IL-2 in CLL group were lower than those in control group（P<0.05），while those in BinetC stage were lower than BinetB stage（P<0.05），and BinetB stage was lower than BinetA stage（P<0.05），negatively correlated with Binet staging.INF-γ and IL-2 were higher than the BinetA phase after CLL treatment，but P>0.05，which was lower than the control group（P<0.05）.The expressions of IL-4， IL-10 and IL-1β were higher than those of the control group（P<0.05），the BinetB phase was higher than the BinetA phase（P<0.05）， the BinetC phase was higher than the BinetB phase（P<0.05），positively correlated with Binet staging.After treatment，IL-4，IL-10，IL-Iβ and BinetA phase were decreased，but P>0.05，which was still higher than the control group（P<0.05）.Conclusion The expression of cytokines in bone marrow microenvironment of patients with CLL is disordered.The cytokines of Th1 type cytokines INF-γ and IL-2 decrease with the progression of CLL Binet stage，and IL-4，IL-10 and IL-1β gradually increase，and CLL occurrence and development are related.

Key words：Chronic lymphocytic leukemia；Marrow；Cytokines

慢性淋巴細(xì)胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是以成熟B淋巴細(xì)胞克隆性增殖且腫瘤細(xì)胞凋亡受阻、生存期延長為特征的異質(zhì)性惡性疾病[1]。目前認(rèn)為CLL的發(fā)病機(jī)制與免疫異常有關(guān)，免疫功能紊亂在其發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用[2]。細(xì)胞因子是一類小分子分泌蛋白，也是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在維持骨髓微環(huán)境乃至全身免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。本文應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CLL不同分期及治療后骨髓微環(huán)境中INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10及IL-1β水平的變化，探討腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞因子在CLL發(fā)生、發(fā)展中的意義。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月～2018年4月臨滄市云縣人民醫(yī)院血液科門診及住院收治的CLL患者66例為病例組，本研究征得所有受試者知情同意。其中男39例，女27例，年齡49～84歲，平均年齡（67.53±15.48）歲。根據(jù)Binet分期將患者分為BinetA期29例，BinetB期21例，BinetC期16例。選取同期來我院健康體檢者30例為對(duì)照組，其中男18例，女12例，年齡48～76歲，平均年齡（61.51±12.64）歲。另取隨訪過程中38例符合中國慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷與治療指南（2011版）[3]的患者予以治療，作為治療組。各組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2主要試劑與儀器 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β試劑盒購自BD公司。流式細(xì)胞儀為Beckman Coulter公司FC500。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 常規(guī)骨髓穿刺，抽取骨髓液2.0 ml EDTA抗凝，3000 r/min離心30 min，收集上清，-80 ℃凍存待測(cè)。

1.3.2 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β檢測(cè) 按照試劑盒說明書設(shè)計(jì)流式細(xì)胞術(shù)方案，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算所需微球量，混合微球，以1500 r/min離心10 min，棄上清，加入丟棄上清相同量的增強(qiáng)劑混合待用。取試管編號(hào)，每管加入20 μl離心后的骨髓上清液、混合微球50 μl及PE染料50 μl，避光孵育3 h，加入wash buffer液600 ml混勻，1500 r/min離心10 min，棄上清，加入300 μl wash buffer液混勻上機(jī)檢測(cè)，用FCAP分析軟件分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，應(yīng)用Pearson行相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 INF-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-1β在各組CLL中的表達(dá) 與對(duì)照組相比，INF-γ、IL-2在CLL各組中均減低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而BinetC期患者表達(dá)低于BinetB期，BinetB期低于BinetA期（P<0.05）；INF-γ、IL-2在CLL治療后雖高于BinetA期，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IL-1β、IL-4、IL-10在CLL各組表達(dá)高于對(duì)照組（P<0.05），BinetB期高于BinetA期（P<0.05），BinetC期高于BinetB期（P<0.05）；治療后IL-Iβ、IL-4、IL-10與BinetA期比較有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與對(duì)照組比較仍高于對(duì)照組（P<0.05），見表1。

2.2 IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ、IL-1β在CLL各組中的相關(guān)性 在BinetA期、BinetB期、BinetC期中IFN-γ、IL-2與CLL的分期呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.242、-0.304、-0.164、-0.231、-0.179、-0.207，P<0.05），IL-4、IL-10、IL-1β與疾病的分期呈正相關(guān)（r=0.846、0.793、0.629、0.751、0.637、0.892、0.749、0.717、0.673，P<0.05）。

3討論

CLL是具有高度異質(zhì)性的惡性疾病，同為CLL的患者，由于分期不同，其預(yù)后也不盡相同。有研究表明，在CLL微環(huán)境中產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平的變化，細(xì)胞因子的多效性、重疊性作用及平衡關(guān)系，決定著CLL的嚴(yán)重程度[4]。在對(duì)急性白血病和慢性粒細(xì)胞白血病的研究中發(fā)現(xiàn)，患者血清或骨髓微環(huán)境中IL-2、INF-γ水平明顯減低，且與患者病情進(jìn)展及預(yù)后呈負(fù)相關(guān)；Th2類細(xì)胞因子及IL-1β病情進(jìn)展及預(yù)后呈正相關(guān)[5-7]。

本次研究結(jié)果顯示，CLL骨髓Th1類細(xì)胞因子IL-2、INF-γ低于對(duì)照組，隨著CLL疾病Binet分期進(jìn)展，IL-2、INF-γ水平逐漸降低且與Binet分期呈負(fù)相關(guān)，即對(duì)照組>BinetA期>BinetB期>BinetC期；而Th2類細(xì)胞因子IL-4、IL-10及多功能炎性因子IL-1β則高于對(duì)照組，而隨著CLL疾病Binet分期進(jìn)展進(jìn)一步增高且與Binet分期呈正相關(guān)，即對(duì)照組

綜上所述，INF-γ、IL-2隨著CLL Binet分期的進(jìn)展逐漸減低，IL-4、IL-10、IL-1β則逐漸增高，與CLL的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Hojjat-Farsangi M，Jeddi-Tehrani M，Razavi SM，et al.Immunoglobulin heavy chain variable region gene usage and mutational status of the leukemic B cells in Iranian patients with chronic lymphocytic leukemia[J].Cancer Sci，2009，100（12）：2346-2353.

[2]D'Arena G，Simeon V，Auria F，et al.Regulatory T-cells in chronic lymphocytic leukemia：actor or innocent bystander[J].Am J Blood Res，2013，3（1）：52-57.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì).中國慢性淋巴細(xì)胞白血病的診斷與治療指南（2011年版）[J].中華血液學(xué)雜志，2011，32（7）：498-501.

[4]Kiaii S，Kokhaei P，Mozaffari F，et al.T cells from indolent CLL patients apoptosis of leukemic B cells in vitro and have altered gene expression profile[J].Cancer Immunol Immunother，2013，62（1）：51-63.

[5]姜煥好，曾東良，吳春鳳，等.急性白血病患者治療前后血清 INF-γ、VEGF、IL-10及IL-12水平的變化及意義[J].醫(yī)學(xué)綜述，2012，1（2）：299-300.

[6]宋建新，張芹，梅芬，等.慢性粒細(xì)胞白血病患者骨髓部分細(xì)胞因子的表達(dá)及意義[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，12（23）：3255-3257.

[7]宋建新，歐陽紅梅，聞艷，等.慢性粒細(xì)胞白血病骨髓巨噬細(xì)胞表達(dá)與細(xì)胞因子的相關(guān)性[J].廣東醫(yī)學(xué)，2017，3（5）：1-5.

[8]Mainou-Fowler T，Miller S，Proctor SJ，et al.The levels of TNF alpha，IL-4 andIL-10 production by T-cells in B-cell chronic lymphocytic leukaemia（B-CLL）[J].Leuk Res，2001，25（2）：157-163.

[9]Mantovani A，Garlanda C，Allavena P.Molecular path-ways and targets in cancer-related inflammation[J].Ann Med，2010，42（3）：161-170.

收稿日期：2018-6-11；修回日期：2018-6-25

編輯/王海靜