云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011

腎安膠囊由石椒草、腎茶、黃柏、白茅根、茯苓、白術(shù)、金銀花、黃芪、澤瀉、淡竹葉、燈心草、甘草組成，具有清熱解毒，利尿通淋的功效。用于濕熱蘊(yùn)結(jié)所致淋癥，證見小便不利，淋瀝澀痛，下尿路感染見上述癥候者。腎茶為腎安膠囊中的主要成分，是一種對(duì)腎臟與泌尿系統(tǒng)疾病具有良好功效的熱帶稀有植物，全草有利尿、抗菌、溶石、排石作用。腎茶中的迷迭香酸為其主要活性成份之一[1]，不僅具有抗炎、抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等生物活性[2]，而且能防止草酸草結(jié)石的形成和改善腎功能[3]，還是腎茶中治療慢性腎衰竭的主要成分之一[4]。在本品中起到清熱解毒和改善腎臟功能的重要作用，故應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。本制劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[5]含量測(cè)定只控制了黃柏一味藥，每粒含黃柏以鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于0.16 mg。為了能更加有效控制腎安膠囊的質(zhì)量，因此采用HPLC法對(duì)本制劑中腎茶的主要成分迷迭香酸進(jìn)行了含量測(cè)定方法學(xué)研究，為評(píng)價(jià)腎安膠囊的質(zhì)量提供了更為準(zhǔn)確可靠的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AD液相色譜儀(SPD-20A紫外檢測(cè)器，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，日本島津公司)；萬分之一Sartorius BS224S型電子分析天平(Sartorius公司，美國(guó))；十萬分之一DENVER TB-215D型電子分析天平(DENVER公司，美國(guó))；AS7240A超聲清洗儀(天津奧特賽斯儀器有限公司)。

1.2 材料 迷迭香酸對(duì)照品(批號(hào)：111871-201102，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。腎安膠囊(批號(hào)：120605、120709、130305、130514、130615)、陰性對(duì)照所用的藥材均由云南保元堂藥業(yè)提供。實(shí)驗(yàn)用水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 取迷迭香酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取本品內(nèi)容物混勻，取3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液50 mL，稱定重量；超聲處理10 min冷，再稱定重量，用0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

2.1.2 陰性樣品溶液 按處方比例制備缺腎茶的陰性空白樣品，并按“2.1.2”項(xiàng)下制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱:Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm；進(jìn)樣量：5 μL。在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果其他藥材并不干擾待測(cè)成分的測(cè)定，結(jié)果見圖1。

2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取迷迭香酸對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10、20 μL，按上述色譜條件，測(cè)定迷迭香酸峰面積。分別以迷迭香酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程為：Y=2e+7X-1713.1(r=0.9998)，表明迷迭香酸在11.7914～235.8274 μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。RSD為0.6%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批(批號(hào)為130305)腎安膠囊樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果迷迭香酸的含量為0.4528 mg/g；RSD分別為0.5%，說明測(cè)量方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備一份供試溶液，精密吸取5 μL，分別于0、4、8、12和16 h各測(cè)定1次，結(jié)果5次測(cè)定所得的峰面積值的RSD為0.2%。結(jié)果表明，室溫條件下，供試品溶液中的迷迭香酸在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 分別精密稱取9份已知含量的樣品(批號(hào)為130305)每份約1.5 g，精密稱定。 精密加入每1 mL迷迭香酸對(duì)照品68.08 μg的對(duì)照品溶液分別為三份12 mL，三份10 mL三份8 mL，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算迷迭香酸平均回收率(n=9)為99.54%，RSD為0.3%。表明試驗(yàn)方法準(zhǔn)確度好。結(jié)果見表1。

表1 腎安膠囊迷迭香酸溶劑加樣回收試驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.8 樣品中迷迭香酸含量測(cè)定 分別稱取不同批號(hào)的腎安膠囊，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 腎安膠囊迷迭香酸溶劑含量測(cè)定結(jié)果 (mg/粒，n=2)

3 討論

實(shí)驗(yàn)通過對(duì)提取方法，提取溶劑，提取時(shí)間，檢測(cè)波長(zhǎng)分別進(jìn)行了考察及參照相關(guān)文獻(xiàn)資料中的有迷迭香酸的含量測(cè)定方法[6-9]后進(jìn)行改進(jìn)，最后確定了以0.001 mol/L鹽酸-甲醇(1∶1)混合液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm，流速1 mL·min-1，樣品超聲處理(功率300 W，頻率25 kHz)10 min對(duì)本品迷迭香酸的含量進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果表明，缺腎茶的陰性樣品溶液無干擾，且樣品分離效果好。經(jīng)方法學(xué)考察，本含量測(cè)定方法結(jié)果較好，方法可行。