李俊　程業(yè)飛　蘇越

摘要：選取54周齡海蘭褐蛋雞270只，隨機(jī)分為3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組分別飼喂添加5.0 mg/kg阿樸酯+2.5 mg/kg斑蝥黃、5.0 mg/kg阿樸酯+5.0 mg/kg斑蝥黃的試驗(yàn)日糧。結(jié)果表明，與對照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組蛋雞肝臟丙二醛含量顯著下降（P<0.05）；試驗(yàn)處理均顯著提高蛋黃羅氏比色扇值、紅度和黃度值、色素斑蝥黃和葉黃素含量，顯著降低其亮度值（P<0.05）。阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合可改善蛋黃顏色和色素沉積，且5.0 mg/kg阿樸酯+2.5 mg/kg斑蝥黃復(fù)合可提高蛋雞肝臟抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：蛋雞；阿樸酯；斑蝥黃；抗氧化性能；蛋品質(zhì)；蛋黃色素

中圖分類號：S831.9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（2018）18-0088-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.18.022 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Effects of Aposter Combined with Canthaxanthin on Antioxidant Function， Egg Quality and Yolk Pigment Deposition in Laying Hens

LI Jun1，CHENG Ye-fei1，SU Yue1，TAO Zheng-guo2，ZHOU Di3，ZHOU Yan-min1，WEN Chao1

（1.College of Animal Science and Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China；2.Guangzhou Leader Bio-technology Co.，Ltd.，Guangzhou 510663，China；3.Zhejiang Medicine Co.，Ltd.，Xinchang Pharmaceutical Factory，Shaoxing 312500，Zhejiang，China）

Abstract： A total of 270 54-wk-old Hy-Line Brown laying hens were allocated into 3 treatments with 6 replicates of 15 hens each. Hens in the control group were fed a basal diet， and hens in the test Ⅰ and Ⅱ were given the basal diet supplemented with 5.0 mg/kg apoester combined with either 2.5 or 5.0 mg/kg canthaxanthin， respectively. The results suggested that compared with the control group， hens in test Ⅰ exerted a decrease in malondialdehyde accumulation in the liver（P<0.05）. Treatments increased values of Roche colorimetric fan， redness， and yellowness， and contents of canthaxanthin and lutein， but reduced lightness value in the egg yolk（P<0.05）. The supplementation of apoester combined with canthaxanthin could improve color and pigment accumulation in the egg yolk， and combination of 2.5 mg/kg canthaxanthin with 5.0 mg/kg apoester could enhance antioxidant capacity in the liver of laying hens.

Key words： laying hen； apoester； canthaxanthin； antioxidant capacity； egg quality； yolk pigment

蛋黃顏色是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)，影響消費(fèi)者的滿意度，消費(fèi)者通常更喜歡從金黃色到橙色的蛋黃顏色[1]。蛋雞自身并不能合成色素，蛋黃顏色是由飼料中的著色類胡蘿卜素決定的。由于小麥具有易儲存、季節(jié)性價格優(yōu)勢等優(yōu)點(diǎn)，在盛產(chǎn)小麥的歐洲國家及中國小麥產(chǎn)區(qū)的蛋雞場會采用小麥型日糧[2]。然而，飼喂小麥型日糧會導(dǎo)致蛋雞蛋黃顏色變淺，蛋品質(zhì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到消費(fèi)者的要求。故常在小麥型蛋雞日糧中添加少量的飼用色素來改善禽蛋色澤。國內(nèi)外關(guān)于日糧中添加各種色素對蛋雞蛋黃著色的影響研究較多，在蛋黃色素沉積中，將黃色和紅色類胡蘿卜素結(jié)合起來更有效更經(jīng)濟(jì)[3]。有關(guān)日糧中單獨(dú)添加阿樸酯和斑蝥黃對蛋雞的影響已有報(bào)道，但阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋雞的影響研究較少[4]。

因此，本試驗(yàn)通過在小麥型基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的阿樸酯（5.0 mg/kg）和斑蝥黃（2.5和5.0 mg/kg）復(fù)配，研究其對蛋雞抗氧化性能、蛋品質(zhì)和蛋黃中色素沉積的影響，為色素在蛋雞日糧中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取54周齡海蘭褐蛋雞270只，隨機(jī)分為3組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只（3只每籠）。對照組飼喂小麥-豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組飼喂基礎(chǔ)日糧中添加不同配比色素的試驗(yàn)日糧（色素種類和添加量見表1，添加量以有效成分計(jì)）。斑蝥黃（10%）由浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠提供，阿樸酯（10%）由廣州立達(dá)爾生物科技股份有限公司提供。試驗(yàn)預(yù)試期為7 d，正式期為36 d?；A(chǔ)日糧配方見表2。

1.2 飼養(yǎng)管理

蛋雞采用三層階梯式籠養(yǎng)，飼養(yǎng)期間自由采食、自由飲水，按蛋雞的常規(guī)飼養(yǎng)管理規(guī)范調(diào)節(jié)環(huán)境條件、接種疫苗、給藥等工作。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 鮮蛋品質(zhì) 于正式試驗(yàn)第5、12、18、36 d，從各組每個重復(fù)中隨機(jī)選3個雞蛋，用比色扇測定蛋黃顏色，用CR-10型色差儀測定蛋黃顏色（亮度、紅度、黃度），使用EMT-5200型多功能蛋品測定儀檢測蛋白高度和哈夫單位。

1.3.2 色素含量 于正式試驗(yàn)第5、12、18、36 d，從各組每個重復(fù)中隨機(jī)選取1個雞蛋來測定蛋黃中的葉黃素和斑蝥黃含量。蛋黃中的葉黃素和斑蝥黃含量的測定參考GB/T 21517-2008。

1）葉黃素和斑蝥黃標(biāo)品的測定。稱取試樣0.050 0 g于50 mL棕色容量瓶中，加入15 mL提取劑，超聲振蕩2 min；加入15 mL正己烷，手搖15 s，用10%無水硫酸鈉水溶液定容至刻度，搖蕩1 min，避光靜置15 min；吸取上層溶液約1 mL，用0.45 μm濾膜過濾后待測。用公式X=（A474 nm×625）/（236×G）來計(jì)算葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品含量（mg/kg），其中G=試樣重（kg），625為稀釋倍數(shù)，下同。

稱取試樣0.020 0 g于50 mL棕色容量瓶中，加入約1.5 mL 10%的無水硫酸鈉溶液，超聲波清洗儀振蕩5 min；加入15 mL提取劑，超聲振蕩2 min；加入15 mL正己烷，手搖15 s，用10%無水硫酸鈉水溶液定容至刻度，用力搖1 min，避光靜置15 min；吸取上層溶液約1 mL，用0.45 μm濾膜過濾后待測，計(jì)算斑蝥黃標(biāo)準(zhǔn)品含量。

2）蛋黃中葉黃素和斑蝥黃的測定。稱取樣品（蛋黃）2.000 g于100 mL棕色容量瓶中，加入約3 mL 10%的無水硫酸鈉溶液，超聲波清洗儀振蕩5 min；加入30 mL提取劑，再加入2 mL 40%的甲醇溶液，塞上塞子手搖30 s；瓶口裝冷凝管，并開冷凝水，放入調(diào)好的56 ℃恒溫水浴鍋中，皂化20 min，取出用自來水冷卻至室溫；加入30 mL正己烷，手搖30 s，用10%無水硫酸鈉水溶液定容至刻度，搖蕩1 min，避光靜置2 h；吸取上層溶液約1 mL，用0.45 μm濾膜過濾后待測，計(jì)算蛋黃中的葉黃素和斑蝥黃的含量（mg/kg）。

3）HPLC條件。固定相：正相硅膠柱4.6 mm×250 mm；流動相：正己烷∶丙酮=8∶2（注：色譜純）；柱溫：室溫；流速：1.5 mL/min；檢測波長：446 nm（葉黃素）、470 nm（斑蝥黃）；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3.3 抗氧化性能 于試驗(yàn)第36天，各組每重復(fù)選取1只體重相近的母雞，頸靜脈采血收集于干凈的離心管中。然后立即解剖，收集肝臟于-20 ℃儲存。將采集到的血液以3 500 r/min離心15 min，分離并收集上層血清于-20 ℃保存待測。肝臟用預(yù)冷的無菌生理鹽水以1∶9（m∶V）在冰水浴中勻漿，隨后以4 000 r/min離心10 min，收集上清液置于-20 ℃待相關(guān)指標(biāo)檢測。血清和肝臟中丙二醛（MDA）和還原型谷胱甘肽（GSH）含量、總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）酶活測定均采用試劑盒（購于南京建成生物工程研究所），測定方法均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)用SPSS 20軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著，數(shù)據(jù)用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋雞血清和肝臟抗氧化性能的影響

由表3可知，與對照組相比，5.0 mg/kg阿樸酯和2.5 mg/kg斑蝥黃復(fù)合顯著降低蛋雞肝臟MDA含量（P<0.05），5.0 mg/kg阿樸酯與5.0 mg/kg斑蝥黃復(fù)合使其下降了15.4%，但差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)組對血清全部和肝臟其他抗氧化指標(biāo)均無顯著影響（P>0.05）。

2.2 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋品質(zhì)的影響

由表4知，與對照組相比，兩試驗(yàn)組蛋黃羅氏比色扇值（RCF）極顯著升高（P<0.01），且蛋雞飼養(yǎng)第12和18天時，試驗(yàn)Ⅱ組RCF顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05），隨飼養(yǎng)時間的延長，在飼養(yǎng)第36天時，兩試驗(yàn)組間差異不顯著。從表5可知，兩試驗(yàn)處理均極顯著提高蛋黃紅度和黃度值，極顯著降低其亮度值（P<0.01），且試驗(yàn)組間無明顯差異，但對蛋白高度和哈夫單位無顯著影響。

2.3 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋黃中的色素含量影響

由表6可知，與對照組相比，不同劑量斑蝥黃和阿樸酯復(fù)合顯著提高蛋雞蛋黃中斑蝥黃沉積和第5、12天雞蛋中葉黃素沉積，且試驗(yàn)Ⅱ組斑蝥黃含量在第5天后顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組（P<0.05）。

3 討論

3.1 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋雞抗氧化能力的影響

脂質(zhì)過氧化是自由基攻擊不飽和脂肪酸的結(jié)果，MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量可直接用以反映機(jī)體氧化損傷程度[5]。體外試驗(yàn)證明斑蝥黃可以有效清除自由基[6，7]。張偉[8]研究發(fā)現(xiàn)，添加斑蝥黃可提高肉種雞血清、肝臟、脾臟和卵巢的抗氧化酶活，降低MDA含量。本研究中日糧中添加5.0 mg/kg阿樸酯和2.5 mg/kg斑蝥黃顯著降低蛋雞肝臟MDA含量，這與上述報(bào)道一致。本研究中提高的肝臟抗氧化能力可能與斑蝥黃可提高生物膜維生素E水平來降低脂質(zhì)過氧化程度有關(guān)[9]。

3.2 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)包括蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋形指數(shù)等。飼料中的著色物質(zhì)主要是葉黃素類物質(zhì)，蛋黃著色度取決于飼料中葉黃素的有效供給量和葉黃素在雞體中的沉積總量[10]。斑蝥黃和阿樸酯都屬于類胡蘿卜素，所以具有大多數(shù)類胡蘿卜素所具有的生物學(xué)功能，對家禽的腳脛、喙、皮膚和皮下脂肪的著色有明顯的作用[11，12]。研究指出，日糧中添加斑蝥黃可以顯著提高蛋雞蛋黃RCF值[13-15]。Hughes[16]研究發(fā)現(xiàn)，添加不同劑量的阿樸酯可以線性地提高蛋雞蛋黃的RCF值。梁遠(yuǎn)東等[4]在玉米型基礎(chǔ)日糧中添加阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合可以顯著改善蛋雞蛋黃RCF值。本試驗(yàn)同時也證明小麥-豆粕型基礎(chǔ)日糧中添加阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合可明顯提高蛋雞蛋黃RCF值。

蛋黃色素沉積可分為2個明顯的階段，黃色類胡蘿卜素對第一個黃色浸潤階段較為重要，紅色類胡蘿卜素對第二個階段即著色階段影響更大，將紅色和黃色類胡蘿卜素結(jié)合使用效果比較好[3]。黃小春等[17]在玉米型日糧中添加不同劑量的葉黃素可顯著降低蛋雞蛋黃亮度值，并提高紅度值，但對黃度值無影響。此外，李士平[18]研究報(bào)道，小麥型基礎(chǔ)日糧中添加紅辣椒提取物（一種紅色素）后，蛋雞蛋黃紅度值顯著提高，亮度值顯著降低，黃度值有所升高但不顯著。本研究結(jié)果表明，小麥型基礎(chǔ)日糧中添加阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合顯著提高了蛋雞蛋黃紅度和黃度值，顯著降低其亮度值，這與上述報(bào)道相一致。此外，Umar等[19]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，斑蝥黃和阿樸酯復(fù)合對種蛋的蛋形指數(shù)、哈夫單位等沒有顯著影響，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。蛋黃亮度降低是因?yàn)榈包S顏色變深，蛋黃顏色變深主要是通過斑蝥黃（紅色類胡蘿卜素）和阿樸酯（黃色類胡蘿卜素）增加蛋黃紅度和黃度值體現(xiàn)的。

3.3 阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合對蛋雞蛋黃中的色素含量影響

Karadas等[20]報(bào)道，日糧中添加天然類胡蘿卜素，可以提高蛋黃中葉黃素、玉米黃素、番茄紅素和胡蘿卜素的含量。此外，黃小春等[17]及Leeson等[21]發(fā)現(xiàn)，隨著日糧中葉黃素含量的增加，蛋黃中的葉黃素也增加。本研究結(jié)果表明，添加阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合可顯著提高蛋雞蛋黃中斑蝥黃和葉黃素的含量，這與上述結(jié)果相一致。本試驗(yàn)中提高的蛋黃色素沉積與蛋黃顏色的改善相一致，進(jìn)一步說明了蛋黃顏色的變深是由于色素沉積的結(jié)果。

4 結(jié)論

阿樸酯和斑蝥黃復(fù)合可改善蛋雞蛋品質(zhì)和蛋黃中色素沉積，且低劑量斑蝥黃復(fù)合效果就抗氧化能力看要優(yōu)于高劑量斑蝥黃復(fù)合效果。故從成本角度出發(fā)，小麥-豆粕型蛋雞日糧中宜添加5.0 mg/kg阿樸酯和2.5 mg/kg斑蝥黃。

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