王安波，孫思，楊梅，劉文鋒，汪儉

（黔東南州農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，貴州凱里556000）

四環(huán)素類藥物（tetracyclines，TCs）為廣譜抑菌劑，對革蘭氏陰性菌、陽性菌及螺旋體等均有較強的抑制作用，被大量應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中。若短時間內(nèi)大量攝入TCs，會引起人體急性中毒，若長期攝入TCs殘留超標(biāo)的產(chǎn)品，TCs會在體內(nèi)不斷蓄積，當(dāng)藥物濃度達(dá)到一定量時，人體會慢性中毒或多種器官發(fā)生病變[1]。美國、歐盟及我國均規(guī)定了畜產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物的最大殘留限量為100 μg/kg[2]。常用檢測方法有：GB 21317-2007《動物源性食品中四環(huán)素類獸藥殘留量檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》、農(nóng)業(yè)部1025號公告-12-2008《雞肉、豬肉中四環(huán)素類藥物殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》。

豬肉是我國消費量最大的肉類產(chǎn)品，獸藥殘留是影響其安全性的重要因素之一。造成獸藥殘留超標(biāo)的根本原因是生豬養(yǎng)殖長期以農(nóng)戶散養(yǎng)和小規(guī)模豬場為主，存在技術(shù)落后、安全意識薄弱、用藥不規(guī)范、不遵守休藥期等問題[3]。目前關(guān)于豬肉中TCs殘留的研究著重于開發(fā)檢測方法，且已有的研究僅對研究區(qū)域豬肉中TCs殘留的水平進行描述，缺乏對豬肉中TCs殘留的風(fēng)險進行評估和分析[4]。因此本研究選擇黔東南州4個市縣為研究區(qū)域，隨機采集200份樣品，通過檢測樣本中土霉素、金霉素、四環(huán)素殘留量來評價黔東南州豬肉產(chǎn)品中TCs獸藥的殘留水平及風(fēng)險水平，為正確引導(dǎo)消費和科學(xué)監(jiān)管提供數(shù)據(jù)支撐和科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 材料來源

2017年1月～12月共選擇17個養(yǎng)殖企業(yè)及8個養(yǎng)殖大戶共25個采樣地點進行豬肉的采集，每6個月進行一次取樣監(jiān)測，選擇黔東南州凱里市、黃平縣、三穗縣、臺江縣 4 地作為采樣區(qū)域，（500±1）g，共 200 份。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1 主要試劑

甲醇、乙腈（色譜純）：美國TEDIA公司；檸檬酸、乙二胺四乙酸二鈉、甲酸、磷酸氫二鈉（分析純）：天津市廣成化學(xué)試劑有限公司；實驗室用水為一級水。

1.2.2 儀器

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（H-Class/TQ-S Micro）：美國 Waters公司；百分之一天平（PL2002）：瑞士梅特勒-托利多公司；旋渦混合器（Lab Dancer）：德國IKA公司；高速冷凍離心機（H2050R）：德國Biofuge公司生產(chǎn)；純水/超純水一體機（Option Q15）：上海威立雅水處理技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 樣品的前處理與檢測方法

樣品的前處理按照農(nóng)業(yè)部1025號公告-12-2008《雞肉、豬肉中四環(huán)素類藥物殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》對待測樣品進行萃取和凈化。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀法進行檢測。

2.1.1 儀器條件

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3 2.1×10 mm，1.8 μm，流動相：A為0.1%甲酸水溶液；B 為乙腈，柱溫為20℃，流速為0.3 mL/min。進樣量為2 μL，洗脫梯度見表1。

表1 四環(huán)素類藥物的洗脫梯度Table 1 The gradient elution of tetracyclines

2.1.2 最低檢測限與最低定量限

向空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液確定最低檢出限和最低定量限。性噪比S/N＞3者定為方法檢測限，性噪比S/N＞10者定為方法定量限[5]。

2.1.3 線性關(guān)系的考察

精密吸取10 μg/mL工作儲備液用流動相分別稀釋至 5、10、50、100、200 ng/mL 作為混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

2.1.4 準(zhǔn)確度與精密度

向空白樣品中分別添加 50、100、200 μg/kg 3 個不同濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各濃度進行6個試驗平行，重復(fù)3次，按上述條件進行測定，計算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，以此考察本試驗的精密度與準(zhǔn)確度。

2.1.5 豬肉中3種四環(huán)素類藥物殘留檢測

2017年1月～12月在貴州省黔東南州境內(nèi)4個區(qū)域：17個養(yǎng)殖企業(yè)及8個養(yǎng)殖大戶每6個月進行一次取樣監(jiān)測，選擇黔東南州凱里市、黃平縣、三穗縣、臺江縣4地作為采樣區(qū)域隨機采集的200份豬肉樣品。經(jīng)上述前處理方法后，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測。

2.2 風(fēng)險評估

本文采用食品安全指數(shù)（international foundation for science，IFS）對豬肉中3種四環(huán)素類獸藥的殘留風(fēng)險進行評估，計算公式[4]：IFS=（R×F）/（SI×bw）。式中：IFS為食品安全指數(shù)；R為豬肉樣品中獸藥藥物殘留的濃度（μg/kg）；F 為人們每日豬肉消費量（kg/人×1/d）。根據(jù)中國肉類協(xié)會2015年的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，2014年中國人均豬肉消費量為41.5 kg，因此，本文中F值按0.1 kg/人×1/d 計算（41.5/365=0.114 kg）；SI為各藥物的每日允許攝入量（allowable daily intake，ADI）值，土霉素為3 μg/（kg·d）[6]；bw為人體平均體重kg，本文按60 kg計算。

IFS小于1表示所檢測的四環(huán)素類藥物對人們的健康造成的危害效應(yīng)并不明顯，所檢測的四環(huán)素類藥物殘留對人們健康的風(fēng)險是可以接受的；IFS遠(yuǎn)小于1（IFS＜0.01）表示所檢測獸藥藥物對人們的健康不會造成危害效應(yīng)，安全狀態(tài)可以接受；IFS大于1表示檢測的獸藥藥物對人們健康的風(fēng)險超出了可接受的限度，所檢測的獸藥藥物對人們的健康造成的危害效應(yīng)是明顯的，出現(xiàn)這種情況就應(yīng)該進入風(fēng)險管理程序[3]。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

在選定的色譜條件下，將配制好的5 ng/mL～200 ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進行測定，所得藥物濃度在5 ng/mL～200 ng/mL范圍內(nèi)與其色譜峰面積呈線性關(guān)系，見表2。

表2 四環(huán)素類藥物的回歸方程和相關(guān)系數(shù)Table 2 The regression equations and correlation coefficients of tetracyclines

由表2可知，其線性范圍滿足測定要求，該方法穩(wěn)定、可靠。

3.2 檢測限與定量限

在上述方法操作條件下，根據(jù)2.1.2所述理論測得3種四環(huán)素類在豬肉中的檢出限為2 μg/kg，定量限為8 μg/kg。

3.3 準(zhǔn)確度和精密度

向空白樣品中添加3個不同濃度四環(huán)素類藥物進行回收率試驗，見表3，可以看出3種平均回收率（n=6）為75.6%～86.1%，RSD為2.5%～3.5%。

表3 豬肉中添加四環(huán)素類藥物回收率和精確度Table 3 The recovery results of positive sample

3.4 豬肉中四環(huán)素類藥物殘留現(xiàn)狀

豬肉中獸藥藥物的殘留水平見表4。

表4 黔東南州豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類獸藥的殘留水平Table 4 Residual levels of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

如表4所示，豬肉產(chǎn)品中檢出土霉素4份，檢出率為2.00%，金霉素、四環(huán)素均未檢出。土霉素檢出殘留濃度為 5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均值為 6.84 μg/kg 未超過國家規(guī)定的最高殘留限量（100 μg/kg）。

3.5 豬肉產(chǎn)品中獸藥藥物殘留的風(fēng)險評估

黔東南州豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留的每日膳食暴露量及食品安全指數(shù)如表5所示。

表5 四環(huán)素類藥物的每日膳食暴露量及食品安全指數(shù)Table 5 The daily meal exposure of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

通過應(yīng)用食品安全指數(shù)的計算公式對豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物進行風(fēng)險評估，黔東南州豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物死亡的每日暴露量均值為1.13×10-2μg/kg bw×1/d，最大值為 1.37×10-2μg/kg bw×1/d，最小值為0.91×10-2μg/kg bw×1/d，均低于最大允許攝入量3 μg/kg bw×1/d[6]；黔東南州豬肉中四環(huán)素類藥物殘留的食品安全指數(shù)均值為0.06×10-3，最小值為0.05×10-3，最大值為0.08×10-3，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于1。這表明黔東南州豬肉樣品中四環(huán)素類藥物的殘留對人體的潛在危害水平是可以接受的，不會對人群產(chǎn)生不良作用，相關(guān)部門不必進入風(fēng)險管理程序。

4 討論

隨著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展，抗生素的廣泛的使用和普及為畜牧業(yè)的發(fā)展做出了重要的貢獻(xiàn)。但是四環(huán)素類藥物的濫用所造成的過量殘留問題，對人體健康構(gòu)成極大的威脅。四環(huán)素類藥物的殘留問題已經(jīng)成為了影響畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的最主要因素，亦是社會各界和各級政府關(guān)注的焦點[7]。因此，畜產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留的風(fēng)險評估已成為當(dāng)務(wù)之急。

未檢出四環(huán)素和金霉素，抽檢的四個市縣中均有土霉素檢出：黃平縣2份，三穗縣1份，臺江縣1份。檢出率為2.00%，且所減測出的獸藥殘留濃度范圍為5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均未超過國家規(guī)定的最大殘留限量，與其他地區(qū)相比黔東南州豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物的殘留水平不高[8-9]。

IFS是用來評價食品中某種危害物對消費者健康影響的指數(shù)，通過計算其結(jié)果可以評估食用該食品后對人體安全狀態(tài)的影響，從而指導(dǎo)相關(guān)部門采取相應(yīng)措施，降低風(fēng)險[10]。本研究中，土霉素食品安全指數(shù)均值為 0.06×10-3，最小值為 0.05×10-3，最大值為 0.08×10-3，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于1。表明黔東南州豬肉產(chǎn)品中土霉素殘留對人體的健康不會造成危害，是能夠接受的。

結(jié)果說明，黔東南州內(nèi)豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素類獸藥的殘留問題較小。豬肉中有土霉素藥物殘留的檢出，說明土霉素是黔東南州豬肉產(chǎn)品中四環(huán)素殘留的最主要的獸藥，雖然其殘留濃度沒有超過國家規(guī)定的最大殘留限量，也不會對人體健康造成危害，但仍是影響豬肉產(chǎn)品質(zhì)量安全的隱患因子[11]。因此，仍然需要引起政府足夠的重視，加強對生豬養(yǎng)殖中土霉素的監(jiān)管力度，降低此藥物對黔東南州豬肉產(chǎn)品質(zhì)量安全影響的風(fēng)險水平，確保豬肉產(chǎn)品質(zhì)量安全。