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禽類接觸史是人感染禽流感病毒的重要因素。2013年以來，我國先后出現(xiàn)人感染H5N1、H7N9、H10N8、H5N6、H7N4等禽流感病例[1-5]。據(jù)統(tǒng)計有80%～90%以上的人禽流感確診病例發(fā)現(xiàn)存在禽類接觸史[6-7]。因此，通過對活禽市場、規(guī)?；B(yǎng)殖場、屠宰場等高危場所的環(huán)境監(jiān)測，本文旨在對2010-2017年陜西省開展禽類相關外環(huán)境標本監(jiān)測數(shù)據(jù)進行分析，了解外環(huán)境中禽流感病毒的污染狀況，評估人群潛在風險。

1 材料與方法

1.1材料來源 在11個地市每年各隨機抽取縣區(qū)作為禽流感監(jiān)測點，每次采集禽類糞便、禽類飲水、禽籠具表面擦拭、禽宰殺或擺放肉案板表面擦拭、清洗禽類的污水等環(huán)境標本。自2011年1月至2017年12月，累計采集各類標本6 426份。

1.2樣本運輸與檢測 采集各地市標本后置于4 ℃冰包內(nèi)暫存，于24 h內(nèi)送至當?shù)亓鞲芯W(wǎng)絡實驗室。標本使用QIAgen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit 提取試劑或西安天隆公司核酸提取試劑盒提取病毒RNA。實時熒光定量檢測試劑盒由江蘇碩世或上海之江生產(chǎn)，嚴格按照說明書進行操作和結(jié)果判定。所有樣本先進行甲型流感病毒(FluA)核酸檢測，F(xiàn)luA陽性標本進一步進行H5、H7、H9亞型分型檢測。為了對檢測結(jié)果進行質(zhì)量控制，每年由國家或省級流感參比中心組織對參與監(jiān)測的流感網(wǎng)絡實驗室進行考核質(zhì)控，結(jié)果均為全優(yōu)。

1.3統(tǒng)計分析采用Excel2016軟件建立數(shù)據(jù)庫，應用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析，多組間率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1檢測基本情況 2011年1月至2017年12月，陜西省11個監(jiān)測地區(qū)共采集活禽市場外環(huán)境標本6 426份，檢出FluA陽性標本489份，陽性率為7.61%。其中2017和2012年AIV禽流感病毒陽性率相對較高，分別為10.54%和8.56%，不同年份病毒陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=56.852，P<0.001)。489份FluA陽性標本中，H9亞型占74.85%，H5亞型占15.34%，A型未分型占4.70%，H7亞型占3.89%，混合型占0.82%，見表1。

表1 陜西省2011-2017年外環(huán)境標本禽流感病毒核酸檢測結(jié)果Tab.1 Results of the samples in external environment in Shaanxi Province, 2011-2017

2.2不同地區(qū)禽流感病毒核酸檢測情況 2011-2017年陜西省11個監(jiān)測地市的活禽市場外環(huán)境中均檢出FluA陽性標本，陽性率較高的地區(qū)分別為榆林市(30.40%)、渭南(24.59%)；其次為咸陽(10.64%)、延安(10.05%)、安康(6.34%)、西安(5.65%)，而漢中(2.64%)、寶雞(1.29%)、楊凌(1.60%)、銅川(0.90%)和商洛(0.23%)均處于較低水平。各地市FluA病毒陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=624.216，P<0.001)，見表2。

2.3不同類型監(jiān)測場所禽流感病毒核酸檢測情況

在檢測的4種類型的監(jiān)測場所中，城鄉(xiāng)活禽市場的FluA陽性率最高，為22.92%；其次為家禽屠宰加工廠(14.67%)，家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(戶)和其他類型的監(jiān)測場所(含家禽散養(yǎng)戶集中的地區(qū)和野生候鳥棲息地)陽性檢出率分別為0.94%和0.39%。各類型監(jiān)測場所的標本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=851.51，P<0.001)見表3。

表2 陜西省2011-2017年不同地區(qū)禽流感病毒核酸檢測結(jié)果Tab.2 Results of the samples in external environment in Shaanxi Province, 2011-2017

表3 陜西省2011-2017年不同類型監(jiān)測場所禽流感病毒核酸檢測結(jié)果Tab.3 Results of the samples in external environment in different monitoring points, Shaanxi Province, 2011-2017

2.4不同類型標本禽流感病毒核酸檢測情況 在檢測的6種類型環(huán)境標本中，宰殺或肉板擦拭標本陽性率最高，為37.78%；其次為清洗禽類污水(20.97%)；禽類飲水標本(5.75%)、籠具表面擦試標本(5.98%)和糞便標本(5.11%)，其他類型標本的陽性率最低，為4.42%。各類型標本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=382.313，P<0.001)見表4。

2.5不同季度禽流感病毒核酸檢測情況 4個季度均在外環(huán)境中檢測出FluA陽性標本，其中第一季度的陽性率最高，為11.08%，其次為第二季度(8.60%)。各季度標本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=54.18，P<0.001)。不同季度檢出的亞型存在差異，第一、四季度病毒構成以H9亞型為主，第二季度3種亞型均可檢出，見表5。

3 討 論

陜西省自2004年報道一起禽間H5N1禽流感事件后[8-9]，鮮有關于禽間流感流行情況的報告，特別是在外環(huán)境中的禽間流感病毒病原學分布情況以往鮮有報道。近年來，由H5N1、H7N9、H10N8、H5N6、H7N4等亞型禽流感病毒均能造成人的感染和死亡時有報告[1-5]。本文對陜西省11個市區(qū)外環(huán)境開展禽流感病原學監(jiān)測，探索甲型禽流感病毒在不同外環(huán)境下的污染特點，為陜西當?shù)厝烁腥厩萘鞲幸咔榈念A測預警提供依據(jù)。

表4 陜西省2011-2017年不同標本類型禽流感病毒核酸檢測結(jié)果Tab.4 Results of the different sample types, Shaanxi Province, 2011-2017

表5 陜西省2011-2017年不同標本類型禽流感病毒核酸檢測結(jié)果Tab.5 Avian influenza virus in external environment in different seasons, Shaanxi Province, 2011-2017

季度檢測數(shù)(份)陽性數(shù)(%)不同亞型檢出數(shù)(份)H5H7H9混合A型未分型第一季度1525169(11.08)17014615第二季度1826157(8.60)271992019第三季度137362(4.52)1904300第四季度1702101(5.93)1208234合計6426489(7.61)7519363428

研究結(jié)果顯示，陜西省外環(huán)境FluA總體陽性率為7.61%，遠低于甘肅(20.97%)[10]和浙江(32.54%)[11]，與貴陽(8.99%)[12]基本持平?？傮w陽性率可以說明禽流感病毒的流行水平，但并不能由此推斷出人感染禽流感流行趨勢，還應關注監(jiān)測場所和病原學。

由于80%～90%以上確診的人感染禽流感病例有活禽市場暴露史[6-7]。而陜西省內(nèi)活禽市場FluA總體陽性率(22.92%)亦明顯高于其他監(jiān)測場所，結(jié)果與廣東(24.23%)[13]，湖北(19.1%)[14]基本持平,低于江西(50.44%)[15]但高于寧夏(6.60%)[16]水平。根據(jù)Kile JC的報道[6]，在2013年3月至2017年8月的五波H7N9疫情中，陜西省共報告H7N9病例7例，廣東258例，湖北31例，江西52例，寧夏未報告。因此，禽流感病毒病原流行特點至關重要。

2011-2014年陜西省以H5亞型禽流感病毒為主，2015年以后以H9亞型為主。這與中國大陸整體流行情況主要為H9/H5轉(zhuǎn)換模式基本一致[17]，但轉(zhuǎn)換時間稍微推后。在外環(huán)境陽性標本中，H5/H7/H9亞型混合陽性標本所占比例很低，這可能與陜西省野生禽類、禽流感貿(mào)易或養(yǎng)殖業(yè)不發(fā)達，宿主動物相對較少有關；也與監(jiān)測體系不夠健全、監(jiān)測力度不夠大有關。2017年初陜西省調(diào)整禽流感監(jiān)測方案，針對外環(huán)境加大監(jiān)測力度，之后FluA檢出數(shù)明顯增加。

從監(jiān)測結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，11個監(jiān)測市區(qū)的活禽市場FluA陽性檢出率差異很大，陽性率最高達30.4%，最低僅0.23%，提示陜西省各地區(qū)活禽市場禽流感病毒污染嚴重度差異很大。延安和榆林兩市H5亞型檢出較多，其中同一監(jiān)測點(家禽屠宰加工廠)在2011年[18]、2013年和2014年先后4批次檢出H5亞型，鑒于當?shù)責o活禽養(yǎng)殖業(yè)，外地輸入禽類多次污染可能性極大；榆林市同一監(jiān)測點(活禽市場)曾于2012年7月至13年2月檢出H5亞型樣本35份、H5+H9混合型3份，考慮該市場曾被污染，但不排除采樣點清理不及時或不充分導致反復檢出陽性可能。榆林H7亞型系17年某養(yǎng)殖場活禽死亡時檢出[19]。除去上述兩市H5和H7檢出情況，陜西其他地市整體污染狀況較低。

不同種類的外環(huán)境標本監(jiān)測結(jié)果提示：宰殺或肉板擦拭標本和清洗禽類污水的陽性率明顯高于其他類型標本的陽性率。與甘肅、湖北[10,14]等地的研究結(jié)果基本一致，這可能與工人加工處理禽類時使用同一案板有關，也與案板不清洗或清洗不徹底有關；禽類污水如家禽脫毛機、污水渠、禽廢棄物垃圾桶等容易污染又難以清洗的地方容易檢出。因此在對涉禽場所進行清洗消毒時，充分清洗、徹底消毒活禽市場是關鍵。第一、四季度外環(huán)境FluA陽性率高于第二、三季度，呈現(xiàn)季節(jié)性差異，提示冬春季節(jié)為活禽流通旺季，應結(jié)合病原學情況做好防控。

綜上所述，2011-2017年陜西省活禽市場外環(huán)境普遍存在禽流感病毒污染，建議持續(xù)開展禽流感病毒病原學監(jiān)測，特別是針對活禽市場和規(guī)?；B(yǎng)殖場重點監(jiān)測，對增加監(jiān)測點數(shù)量并對采樣點案板和污水等標本類型增加采樣。這對及時掌握禽流感病毒的流行趨勢及變異情況，有效評估其流行風險，為人禽流感疫情的防控和預警提供科學依據(jù)。同時，依據(jù)監(jiān)測結(jié)果，建議省內(nèi)加強對活禽市場清掃和消毒力度，強化相關從業(yè)人員的防范意識，有條件的地區(qū)盡量統(tǒng)購統(tǒng)銷，定點宰殺，集中上市，避免禽流感病毒污染。

(致謝：感謝陜西省各市禽流感監(jiān)測工作中辛勤付出的同事們！)

收稿日期：2018-05-07編輯：王曉歡