劉靜雯，梁暉輝，盧富華，李瑞蘭，黨儀泉，向增旭

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院，南京 210095)

如今鐵皮石斛的人工種植方法有許多[14]，而植物組織培養(yǎng)中傳統(tǒng)的鐵皮石斛莖段繁殖速度慢，增殖系數(shù)低，不能滿足大量的工廠化育苗要求，因此育苗成為解決當(dāng)前鐵皮石斛工廠化生產(chǎn)的一個(gè)迫切問題。本研究在實(shí)驗(yàn)室前期鐵皮石斛倍性研究的基礎(chǔ)上，對(duì)鐵皮石斛組培快繁技術(shù)的方法展開進(jìn)一步的研究，探究鐵皮石斛同源四倍體的快繁途徑。通過誘導(dǎo)原球莖的發(fā)生、增殖、分化，建立一種與傳統(tǒng)莖段、分株繁殖不同的繁殖方法，探尋鐵皮石斛同源四倍體種質(zhì)保存、大規(guī)模擴(kuò)繁和生產(chǎn)推廣應(yīng)用的新技術(shù)，從而找出一種更快速、高效的方法用于開發(fā)鐵皮石斛的優(yōu)良品種，為鐵皮石斛同源四倍體植株的種苗工廠化生產(chǎn)奠定新的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料是經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所向增旭教授鑒定的鐵皮石斛植株，鐵皮石斛同源四倍體為實(shí)驗(yàn)室前期研究的同源四倍體株系。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1鐵皮石斛同源四倍體純合性鑒定隨機(jī)選取鐵皮石斛同源四倍體株系‘花自-2’的無(wú)菌試管苗，轉(zhuǎn)入無(wú)激素的MS培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)，20 d后再轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)。通過觀察試管苗葉片大小、葉色、株高、莖粗等表觀特征，初步判斷四倍體。氣孔鑒定：于超凈工作臺(tái)中選取‘花自-2’材料及對(duì)照株(CK)相同生長(zhǎng)部位的葉片，用攝子撕取葉片下表皮臨時(shí)裝片，在顯微鏡下鏡檢拍照，隨機(jī)選取10個(gè)視野進(jìn)行氣孔計(jì)數(shù)，觀察每個(gè)視野氣孔大小及氣孔密度。染色體鑒定：早上9：00～11：00取幼苗根尖(0.5～1 cm)，在冰水混合物中預(yù)處理24 h，于4 ℃冰箱中卡諾固定液(乙醇∶冰醋酸=3∶1)固定24 h，在60 ℃ 1 mol/L HCl中解離5 min，卡寶品紅染色10 min，然后制片、鏡檢。流式細(xì)胞儀分析：稱取0.5 g組培苗葉片，用濾紙吸干水分后置于干凈培養(yǎng)皿中，加入2 mL預(yù)冷的組織解離液[80 mmol/L KCl, 20 mmol/L NaCl, 15 mmol/L Tris-HCl, 20 mmol/L Na2EDTA, 0.1%(V/V) TritonX-100, 2.0%(V/V) PVP-K30, pH 7.5]，用刀片一次性快速切碎葉片，過濾后于4 ℃ 2 000 r/min離心5 min，漂洗2～3次，加入2 mL DAPI染液室溫下反應(yīng)1 h后即可上樣測(cè)定。

1.2.2原球莖的誘導(dǎo)及生根鑒定以同源四倍體幼嫩莖段為試驗(yàn)材料，以MS為基本培養(yǎng)基，選用5種激素組合對(duì)鐵皮石斛原球莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，把切好的莖段接種在供試培養(yǎng)基上(表1)，用鑷子輕輕按壓使莖段與培養(yǎng)基充分接觸，以便更好地吸取養(yǎng)分。每瓶接種4個(gè)莖段，每個(gè)處理重復(fù)10次。接種后定期觀察莖段誘導(dǎo)原球莖過程，統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)出原球莖的莖段個(gè)數(shù)及誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖所需時(shí)間，探究不同濃度激素配比對(duì)原球莖誘導(dǎo)率的影響，篩選原球莖誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基。

在超凈工作臺(tái)上，將增殖的原球莖分割成團(tuán)塊轉(zhuǎn)入供試生根培養(yǎng)基中，選用生長(zhǎng)素NAA、基本培養(yǎng)基和香蕉汁為3個(gè)試驗(yàn)因素，激素NAA濃度設(shè)0、0.5 和1.0 mg/L 3個(gè)水平，基本培養(yǎng)基設(shè)置1/2 MS、MS和1/4 MS 3個(gè)水平，香蕉汁設(shè)計(jì)5%、10%、15% 3個(gè)水平。本試驗(yàn)不考慮因素間的交互作用，各因素隨機(jī)排列，采用L9(33)正交表，進(jìn)行3因素3水平(表2)正交試驗(yàn)，共9個(gè)處理。每個(gè)培養(yǎng)基放入5團(tuán)原球莖，每組試驗(yàn)設(shè)10個(gè)重復(fù)，生根周期設(shè)定時(shí)長(zhǎng)為6周，試驗(yàn)結(jié)果以每株苗平均生根數(shù)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)。將由四倍體莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生的原球莖放入最佳生根培養(yǎng)基中生根，同時(shí)把新生的根進(jìn)行預(yù)處理，進(jìn)行根尖染色體鑒定工作。

1.2.3原球莖的增殖將由嫩莖誘導(dǎo)形成的原球莖接種在供試原球莖增殖培養(yǎng)基上。根據(jù)天然復(fù)合物馬鈴薯的添加可以促進(jìn)增殖與發(fā)育[15]，因此選用MS+15%馬鈴薯提取液為基本培養(yǎng)基。選用NAA、6-BA、KT為3個(gè)試驗(yàn)因素，KT設(shè)0、0.2和0.5 mg/L 3個(gè)水平，6-BA設(shè)0.2、0.5 和1.0 mg/L 3個(gè)水平，NAA設(shè)0.2、0.5 和1.0 mg/L 3個(gè)水平。本試驗(yàn)采用3因素3水平正交試驗(yàn)(表3)，共9個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)5次，每瓶接入5團(tuán)原球莖。在超凈工作臺(tái)上，選取長(zhǎng)勢(shì)均勻一致的原球莖，按壓接種至供試培養(yǎng)基，每5 d觀察原球莖增殖狀況，生長(zhǎng)狀況及分化程度。

表1 備選原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基

表2 生根培養(yǎng)基選擇正交試驗(yàn)表

1.2.4原球莖的分化將由莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生的增殖充分成熟的較大原球莖塊切割成直徑5～8 mm左右的小塊，放入培養(yǎng)基中，探究6-BA與NAA不同激素水平對(duì)原球莖分化影響的試驗(yàn)(表4)，在無(wú)菌條件下進(jìn)行分化培養(yǎng)，50 d后統(tǒng)計(jì)不同培養(yǎng)基的原球莖分化率，確定原球莖分化的最適激素組合濃度。

在激素確定的基礎(chǔ)上，往培養(yǎng)基中添加不同濃度的香蕉汁和馬鈴薯提取液探究外源有機(jī)物對(duì)原球莖分化的影響，從而選擇適宜原球莖分化的最佳有機(jī)物，以此確定原球莖最佳分化培養(yǎng)基。

前列腺位于盆腔深部，位置低、空間小，是機(jī)器人在泌尿外科的主要應(yīng)用方向之一。與傳統(tǒng)腹腔鏡手術(shù)相比，機(jī)器人前列腺癌根治術(shù)可明顯降低術(shù)中出血、縮短導(dǎo)尿管留置時(shí)間，同時(shí)減少圍手術(shù)期并發(fā)癥[6]。由于機(jī)器人手術(shù)開展時(shí)間短、經(jīng)驗(yàn)積累尚不豐富，如何快速培養(yǎng)年輕醫(yī)師，使之迅速掌握機(jī)器人手術(shù)技巧，已成為目前亟待解決的問題。

表3 原球莖增殖配方正交試驗(yàn)表

表4 不同激素水平對(duì)原球莖分化的影響

1.3 幼苗的轉(zhuǎn)接壯苗、練苗與移栽

將原球莖分化的幼苗選擇合適的培養(yǎng)基，進(jìn)一步轉(zhuǎn)接壯苗，待幼苗長(zhǎng)到適宜程度時(shí)，進(jìn)行鐵皮石斛同源四倍體的煉苗，選擇不同煉苗時(shí)長(zhǎng)，進(jìn)行培養(yǎng)缽移栽試驗(yàn)，記錄生長(zhǎng)環(huán)境的溫度和澆水狀況，依據(jù)移栽后鐵皮石斛同源四倍體植株的的長(zhǎng)勢(shì)，確定最佳的練苗時(shí)長(zhǎng)、移栽時(shí)間和生長(zhǎng)環(huán)境。

2 結(jié)果與分析

2.1 鐵皮石斛‘花自-2’倍性鑒定結(jié)果

通過采用形態(tài)鑒別、氣孔解剖、根尖染色體計(jì)數(shù)及流式細(xì)胞儀分析相結(jié)合的方法，確定了‘花自-2’株系為純合的同源四倍體。在形態(tài)方面，四倍體株系與對(duì)照株系相比整體表現(xiàn)矮壯(圖1)；相同倍鏡下氣孔變大，密度與二倍體相比有所降低，在物鏡×40視野下氣孔的密度降低近1倍(圖2)；‘花自-2’染色體數(shù)為76條，而對(duì)照組株系根尖染色體數(shù)為38條，‘花自-2’染色體數(shù)目加倍(圖3)；經(jīng)流式細(xì)胞儀分析，對(duì)照株系DNA相對(duì)含量在100處出現(xiàn)峰值，‘花自-2’株系在200處出現(xiàn)峰值(圖4)，也標(biāo)明‘花自-2’為純合的同源四倍體。綜合以上4種方法，確定了實(shí)驗(yàn)室前期誘導(dǎo)的鐵皮石斛‘花自-2’為純合的同源四倍體。

2.2 鐵皮石斛同源四倍體原球莖的誘導(dǎo)

由表5的試驗(yàn)結(jié)果分析可知：以同源四倍體幼嫩莖段為試驗(yàn)材料，MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基時(shí)，添加不同濃度的6-BA、NAA、KT、IBA、2, 4-D等5種激素相互組合對(duì)莖段進(jìn)行誘導(dǎo)處理，其誘導(dǎo)情況都明顯高于不添加任何激素的對(duì)照組。5種激素組合中以添加1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L KT + 0.0 mg/L IBA+0.0 mg/L 2, 4-D等5種激素濃度的組合培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛同源四倍體原球莖的誘導(dǎo)最好，幼嫩莖段誘導(dǎo)原球莖的誘導(dǎo)成功率最佳，平均誘導(dǎo)率達(dá)到76.66%。

左.對(duì)照組(CK)；右.‘花自-2’圖1 鐵皮石斛生根苗形態(tài)Left. CK；Right. ‘Huazi-2’Fig.1 Rooting seedling form of D. of ficinale Kimura et Migo

‘花自-2’(上)與對(duì)照CK(下) 物鏡×10(左)、物鏡×40(右)圖2 鐵皮石斛葉片氣孔圖‘Huazi-2’ (upper) and CK (lower), objective lens×10 (left) and objective lens×40 (right)Fig.2 Leaf stomata of D. of ficinale Kimura et Migo

左.對(duì)照組(CK)；右.‘花自-2’圖3 鐵皮石斛根尖染色體圖Left. CK；Right. ‘Huazi-2’Fig.3 Root tip chromosome of D. of ficinale Kimura et Migo

左.對(duì)照組(CK)；右.‘花自-2’圖4 鐵皮石斛流式細(xì)胞儀分析圖Left. CK；Right. ‘Huazi-2’Fig.4 Flow cytometry analysis of D. of ficinale Kimura et Migo

編號(hào)No.激素濃度Hormone concentration /(mg/L)KTNAA6-BAIBA2, 4-D誘導(dǎo)率Inductivity/%10000012.4321.00.20.50044.5431.00.50.20043.3342.00.20.50047.8652.00.50.20059.9960.50.21.00066.4570.20.51.00076.6680.50.22.00043.3390.20.52.00055.6810001.00.21.035.4611001.00.51.032.3112002.00.22.044.5413002.00.52.042.3314001.00.50.233.4515001.00.20.535.6116002.00.50.234.3717002.00.20.537.88

2.3 原球莖的生根培養(yǎng)及染色體鑒定

將原球莖分開后放入不同的供試生根培養(yǎng)基中，不同生長(zhǎng)素NAA濃度、基本培養(yǎng)基及香蕉汁對(duì)鐵皮石斛原球莖生根率均可產(chǎn)生影響。從表6中可以看出NAA濃度選擇0.5 mg/L時(shí)，鐵皮石斛原球莖的生根率高于其他2組；不添加NAA的培養(yǎng)基鐵皮石斛原球莖的生根速度慢，生根率較低且根尖不明顯；而以1/4 MS、MS為基本培養(yǎng)基生根狀態(tài)均不如以1/2 MS為基本培養(yǎng)基的生根狀態(tài)。香蕉汁的添加量暫時(shí)沒有太大的差別可循。因此最佳生根培養(yǎng)基組合是：NAA濃度選擇0.5 mg/L、1/2 MS培養(yǎng)基、15%香蕉汁，其生根率可達(dá)92.77%。

圓球莖轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基40～50 d后，取顏色亮白，形狀細(xì)長(zhǎng)，且根尖狀態(tài)良好的根，進(jìn)行根尖染色體再鑒定，經(jīng)鑒定原球莖所生根的根尖染色體數(shù)仍為76條，表明誘導(dǎo)的倍性可穩(wěn)定遺傳。

2.4 鐵皮石斛同源四倍體原球莖的增殖與分化

2.4.1原球莖增殖試驗(yàn)表明：在MS +15%馬鈴薯提取液培養(yǎng)基中添加不同種類激素，原球莖增殖系數(shù)均出現(xiàn)不同程度變化。從表7可知：在適宜激素濃度比例下，原球莖增殖未出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象或玻璃化程度較輕，其中原球莖增殖較好的是6號(hào)培養(yǎng)基，增殖系數(shù)遠(yuǎn)比期待數(shù)值要高。含有較高濃度激素的KT培養(yǎng)基，原球莖的長(zhǎng)勢(shì)均不如低濃度的KT培養(yǎng)基與不加KT 的培養(yǎng)基。另外原球莖的增殖系數(shù)在NAA濃度較低的范圍內(nèi)培養(yǎng)效果較好，隨著濃度的增加，原球莖的增值系數(shù)受到限制。在較低濃度范圍內(nèi)原球莖增殖系數(shù)隨著6-BA濃度的增加有所上升，1.0 mg/L 6-BA原球莖增殖程度高。綜上所述：最優(yōu)增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA+15%馬鈴薯提取液。

2.4.2原球莖分化本試驗(yàn)在1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的NAA、6-BA探究對(duì)原球莖分化的影響。從表8的試驗(yàn)結(jié)果中可知：以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的NAA、6-BA對(duì)原球莖的分化影響顯著。如表中所示，不添加激素的7號(hào)培養(yǎng)基，分化率明顯低于含有不同激素水平的培養(yǎng)基；僅添加6-BA的組別(編號(hào)1、2)原球莖分化程度明顯高于其他組，且0.5 mg/L水平下的6-BA對(duì)原球莖分化率高于0.2 mg/L水平；單獨(dú)添加NAA的組別(編號(hào)3、4)分化芽數(shù)低于兩種激素都添加的組別(編號(hào)5、6)和僅添加6-BA的組別(編號(hào)1、2)，且NAA濃度越高，分化率越低。因此，原球莖分化最佳的激素水平為0.5 mg/L 6-BA，其圓球莖分化率達(dá)到85.70%。

表6 生根培養(yǎng)基試驗(yàn)結(jié)果表

表7 不同組別對(duì)原球莖增殖的影響

注： +、++、+++和++++ 為原球莖增殖程度升序排列：+表示少數(shù)原球莖，增殖差，++表示原球莖增殖一般，+++表示原球莖增殖較好，++++ 表示原球莖增殖極好

Note：The +, ++, +++ and ++++ for protocorm proliferation degree in ascending order: + minority protocorm proliferation, ++ normal protocorm multiplication, +++ better protocorm multiplication, ++++ excellent protocorm proliferation

在1/2MS培養(yǎng)基中加入0.5 mg/L 6-BA的基礎(chǔ)上，加入有機(jī)復(fù)合物馬鈴薯提取液與香蕉提取液來(lái)探究對(duì)原球莖的分化的影響。通過觀察，添加20%馬鈴薯提取液的養(yǎng)基分化明顯，苗長(zhǎng)勢(shì)好于添加20%香蕉提取液與對(duì)照(CK)的培養(yǎng)基。因此選擇20%馬鈴薯提取液作為原球莖分化培養(yǎng)試驗(yàn)的有機(jī)物添加。由此可知：鐵皮石斛原球莖分化最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+20%馬鈴薯提取液。

2.5 幼苗的轉(zhuǎn)接壯苗、練苗與移栽

將幼苗轉(zhuǎn)入合適的培養(yǎng)基進(jìn)一步壯苗，待幼苗長(zhǎng)到適宜程度時(shí)，進(jìn)行鐵皮石斛同源四倍體組培苗的煉苗。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同的煉苗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)鐵皮石斛同源四倍體幼苗的成活率影響不同。根據(jù)試驗(yàn)記錄可知，鐵皮石斛同源四倍體植株的最佳的練苗時(shí)長(zhǎng)為5 d、其移栽成活率最高，成活植株可達(dá)92.30%。

2.6 鐵皮石斛同源四倍體工廠化組培工藝流程

試驗(yàn)前期一直采用莖段快繁鐵皮石斛同源四倍體的途徑來(lái)對(duì)現(xiàn)有的同源四倍體株系進(jìn)行擴(kuò)繁。試驗(yàn)表明：莖段繁殖的增殖系數(shù)低，雖然添加有機(jī)復(fù)合物的培養(yǎng)基可以使增值系數(shù)在一定程度上有所增加，但仍不能滿足工廠化生產(chǎn)需求。而通過原球莖誘導(dǎo)、增殖與分化的途徑來(lái)進(jìn)行增值，其增值系數(shù)大大提高，從而可以逐步滿足工廠化生產(chǎn)的需求。原球莖的誘導(dǎo)、增殖與分化并進(jìn)行完整工藝流程如圖5所示。

表8 不同激素水平對(duì)原球莖分化的影響

圖5 鐵皮石斛同源四倍體組培快繁工藝流程圖Fig.5 D. of ficinale Kimura et Migo homologous tetraploid’s engineering flow sheet

3 討 論

在多倍體誘導(dǎo)研究中，首先觀察外部形態(tài)特征可初步判斷四倍體株系，該方法最為簡(jiǎn)便快捷；其次利用顯微鏡觀察氣孔等顯微結(jié)構(gòu)，可做進(jìn)一步的判斷。顯微結(jié)構(gòu)是利用根尖細(xì)胞染色體數(shù)目來(lái)判斷植株倍性。本試驗(yàn)的方法步驟和韓超等[16]的桉樹壓片過程有所不同，我們用冰水混合物代替了8-羥基喹啉處理，使試驗(yàn)操作更具安全性。然而在染色體鑒定工作中，還存在許多人為控制的因素制約著壓片的成功率，因此，流式細(xì)胞儀的鑒定方法在倍性判斷方面，可以在提高鑒定效率的基礎(chǔ)上，保證倍性鑒定結(jié)果的可靠性，而且以上幾種方法結(jié)合，更加確定了倍性純合的可靠性，本試驗(yàn)研究結(jié)果與王榮邦等[17]的菊花染色體倍性鑒定研究結(jié)果相一致。

本試驗(yàn)以鐵皮石斛同源四倍體的幼嫩莖段為外植體成功誘導(dǎo)了原球莖的產(chǎn)生，選擇的莖段以1.5～2.5 cm并帶有1～2個(gè)莖節(jié)為宜，莖段誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖的最佳培養(yǎng)基為MS +1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L KT，誘導(dǎo)率為76.66%，且誘導(dǎo)出的原球莖緊密度適中，長(zhǎng)勢(shì)好，色深綠;與朱慶豎等[18]鐵皮石斛的原球莖誘導(dǎo)的最適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 2, 4-D有相同也有不同。

進(jìn)行鐵皮石斛同源四倍體的倍性再鑒定，證明了誘導(dǎo)的倍性可穩(wěn)定遺傳。研究發(fā)現(xiàn)在原球莖的誘導(dǎo)過程中由莖段萌生的原球莖在特定激素濃度下存在分化成苗的趨勢(shì)，而在原球莖增殖試驗(yàn)中也存在部分原球莖分化的現(xiàn)象，由此而來(lái)，在整個(gè)試驗(yàn)過程中，增殖的同時(shí)會(huì)伴有分化現(xiàn)象。在原球莖的增殖過程中，發(fā)現(xiàn)有出苗不整齊的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致原球莖發(fā)育成苗的不同步化。所以在試驗(yàn)過程中，必須探究出一種最適宜的培養(yǎng)條件使原球莖以均勻的速度同步生長(zhǎng)，來(lái)更好地滿足工廠化育苗的需求。這種條件不僅與內(nèi)源狀態(tài)有關(guān)，還可能與室溫、光照等息息相關(guān)。

本試驗(yàn)探究了不同添加激素種類與濃度、有機(jī)物的種類與濃度對(duì)原球莖的增殖與分化的影響，以四倍體鐵皮石斛的幼嫩莖段作為外植體進(jìn)行原球莖的誘導(dǎo)，可以通過原球莖的增殖與分化最終獲得大量的植株，加快了鐵皮石斛的繁殖效率。MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+15%馬鈴薯提取液為原球莖最適宜的增殖培養(yǎng)基；最佳的原球莖分化的配方為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+20%馬鈴薯提取液，與朱慶豎等[18]研究的原球莖分化最適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT，陳瀟倩[15]的1/2 MS+0.2 mg/L 6-BA+20%馬鈴薯提取液, 有些不同。試驗(yàn)中證明了添加馬鈴薯提取液、香蕉汁能有效地促進(jìn)鐵皮石斛原球莖的分化，這與楊柳平等[19]研究得出的添加香蕉汁會(huì)抑制圓球莖的分化結(jié)果不同，而與方中明等[20]香蕉能促進(jìn)原球莖的分化研究結(jié)果相同。

試驗(yàn)也進(jìn)行了莖段擴(kuò)繁培養(yǎng)基的篩選，結(jié)果表明，莖段擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+15%香蕉汁，但莖段擴(kuò)繁增殖系數(shù)低，不能滿足大規(guī)模種苗工廠化生產(chǎn)的需要；以幼嫩莖段為外植體誘導(dǎo)鐵皮石斛同源四倍體原球莖，通過原球莖增殖、分化及生根培養(yǎng)，建立了比莖段繁殖效率更高的鐵皮石斛同源四倍體高頻快繁技術(shù)體系，為鐵皮石斛同源四倍體種質(zhì)的生產(chǎn)推廣提供了技術(shù)支撐。