何繼軍，靳 野，馬維民，楊亞民，呂 律，鄭海學(xué)，楊 帆，曹偉軍，郭建宏，李彥敏，劉在新，劉湘濤

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730046）

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的一種偶蹄動(dòng)物傳染疾病。因FMD發(fā)病急、傳播迅速、危害大，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。自2008年以來，外來FMDV高頻率、強(qiáng)穿透力傳入我國，給我國養(yǎng)殖業(yè)造成巨大危害。我國緊鄰FMD嚴(yán)重流行的東南亞地區(qū)。近年來隨著對(duì)牛肉等動(dòng)物源性食品需求量的增加，境外動(dòng)物攜帶FMDV進(jìn)入我國的風(fēng)險(xiǎn)日益增加。如何有效阻斷邊境地區(qū)外來FMDV傳入，將很大程度影響我國FMD防控成效，也是值得關(guān)注的重要研究課題之一。

1 威脅地區(qū)和毒株類型

對(duì)我國形成威脅的外來FMDV主要來自東南亞、南亞和西亞-中東等地區(qū)（即OIE劃分的pool1、pool2和pool3）。該3個(gè)區(qū)域是目前全球FMD疫情發(fā)生最為頻繁的地區(qū)，主要流行O型、A型和Asia1型[1]（圖1）。各區(qū)域既有特有的流行毒株，又有跨區(qū)域傳播而來的外來毒株；多毒株混雜流行加劇了病毒變異，導(dǎo)致傳播力強(qiáng)的新毒株不斷出現(xiàn)，并向周圍區(qū)域輻射，頻繁引發(fā)大流行。

圖1 全球口蹄疫流行圈和血清型分布

2 外來威脅流行毒株與傳入路線

2.1 已傳入毒株

源自東南亞毒株：A型東南亞97（A/Sea-97）毒株G1分支和G2分支，分別于2009年和2013年傳入我國；O型緬甸98（O/Mya-98）毒株，于2010年傳入我國[2-3]。

源自南亞的毒株：O型泛亞（O/PanAsia）毒株，早先在1999年前后傳入我國，于2011年再次經(jīng)由東南亞傳入我國。

東南亞-東亞區(qū)域循環(huán)毒株：O/CATHAY毒株，最早確定于1970年，在東南亞-東亞流行和變異，主要危害豬[4]。

目前，上述毒株均在我國流行，對(duì)豬、牛都造成危害。我國現(xiàn)用疫苗對(duì)這些毒株當(dāng)前仍免疫有效，但病毒遠(yuǎn)向疫苗的變異趨勢(shì)不容忽視。

2.2 新近傳入毒株

O型印度2001（O/Ind-2001）毒株[5]，新近由境外傳入我國，2017年在新疆引發(fā)疫情，主要危害牛；2018年上半年，該毒株先后在湖北、安徽、貴州等省份再次發(fā)生疫情。O/Ind-2001毒株起源于南亞次大陸，現(xiàn)有a、b、c、d、e 5個(gè)進(jìn)化分支[6]。2013年起，O/Ind-2001毒株開始跨區(qū)域強(qiáng)勢(shì)傳播[7-8]：先后傳播至沙特阿拉伯（2013年）、阿聯(lián)酋（2014年）、巴林（2015年）等中東國家，以及利比亞（2013年）、突尼斯（2014年）、阿爾及利亞（2014年）、摩洛哥（2014年）等北非國家，后又傳播至老撾（2015年）、越南（2015年）、緬甸（2016年）、泰國（2016年）等東南亞國家以及東北亞的蒙古國（2015年），2017年又先后在我國和韓國引發(fā)疫情。

針對(duì)O/Ind-2001毒株對(duì)我國的威脅，國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室開展了針對(duì)性技術(shù)儲(chǔ)備工作：一是制備含O型FMD抗體的牛、豬免疫血清，并委托世界口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室（WRLFMD）用分離自東南亞（老撾，2015年）的O/Ind-2001病毒進(jìn)行中和試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)我國疫苗對(duì)該毒株的中和性；二是用從我國分離的該毒株病毒（2017年）進(jìn)行中和試驗(yàn)，再次評(píng)價(jià)中和性；三是開展牛免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)（2017年）。結(jié)果表明：（1）我國含O型FMD的疫苗對(duì)O/Ind-2001毒株具有較高的中和滴度，推斷具有免疫保護(hù)性；（2）我國含O/MYA98抗原疫苗可有效保護(hù)O/Ind-2001毒株對(duì)牛的攻擊，攻毒保護(hù)率均高于OIE標(biāo)準(zhǔn)。

2.3 持續(xù)傳入風(fēng)險(xiǎn)毒株

O/PanAsia-2、A/Iran-05和 Asia1/Sindh-08等 毒株常年流行于中東-西亞地區(qū)的阿富汗、伊朗、巴基斯坦、土耳其等國。其多來自于南亞，傳播至中東-西亞后形成變異株[9-13]。近年來我國連續(xù)開展邊境地區(qū)監(jiān)測(cè)，未發(fā)現(xiàn)這些毒株傳入。該類毒株有3個(gè)共同特點(diǎn)。

2.3.1 流行區(qū)域相對(duì)集中 病毒主要“定居”于中東-西亞地區(qū)，傳播力強(qiáng)，具有形成大范圍流行的潛力。當(dāng)前其主要流行國家的防疫能力普遍較差，這給病毒的流行和變異提供了較大空間。如2011年O/PanAsia-2毒株由該區(qū)域傳播至歐洲的保加利亞，引發(fā)疫情，引起全球關(guān)注[14]。

2.3.2 全球口蹄疫疫苗庫經(jīng)典毒株對(duì)其免疫保護(hù)性較差 WRLFMD等實(shí)驗(yàn)室提供的試驗(yàn)結(jié)果表明，用田間分離株培育的疫苗株對(duì)當(dāng)?shù)亓餍卸镜拿庖咂ヅ湫云毡楹糜诮?jīng)典疫苗毒株（如O Manisa、A22、Asia1 Shamir等）[12]。這一結(jié)果使得該區(qū)域用于防疫的疫苗株層出不窮，多達(dá)20余株。為了統(tǒng)一免疫，WRLFMD等實(shí)驗(yàn)室建議使用高PD50的經(jīng)典株疫苗（至少≥6 PD50），以彌補(bǔ)毒株差異。

2.3.3 毒株變異頻度高 據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，O/PanAsia-2毒株已有TER-08等8個(gè)亞系，其中ANT-10為優(yōu)勢(shì)流行毒。A/Iran-05 毒株已有AFG-07等15個(gè)亞系，其中FAR-11和SIS-13為優(yōu)勢(shì)流行毒。相比之下，Asia1/Sindh-08毒株變異不大，流行區(qū)域趨于縮小，如2017年僅在阿富汗和巴基斯坦引發(fā)疫情。

2.4 新威脅毒株

2016年以來，又有2個(gè)外來流行毒株需要重點(diǎn)關(guān)注。

2.4.1 A/G-VII（G18）毒株 該毒株長(zhǎng)期在印度次大陸地區(qū)流行，從2015年起，突然在沙特阿拉伯、土耳其、伊朗和阿曼

尼亞等國連續(xù)引發(fā)疫情，表現(xiàn)出強(qiáng)勁的傳播力[15-16]。有關(guān)實(shí)驗(yàn)室用11株國際/區(qū)域疫苗庫A型疫苗株與之匹配，發(fā)現(xiàn)其r值均低于0.30的可保護(hù)范圍，動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)的保護(hù)率也僅有56%（9/16）[17]。該毒的傳播路線與O/Ind-2001毒株的十分相似，傳入東南亞和東北亞的風(fēng)險(xiǎn)很高。

2.4.2 Asia1型G VIII群毒株 2017年初，緬甸發(fā)生Asia1型FMD疫情，WRLFMD確認(rèn)疫情毒株是Asia1型G VIII群。該毒株2005—2012年主要流行于印度。此外，印度周邊的孟加拉國、巴林也有該毒株流行的報(bào)道。緬甸2017毒株與孟加拉國2013毒株、印度2012毒株的同源性為97%[18]。該毒株在緬甸引發(fā)疫情后，未見后續(xù)報(bào)道，推測(cè)其擴(kuò)散的可能性較低。但由于我國2018年7月以后實(shí)施了Asia1型口蹄疫免疫退出政策，其危害不可忽視。

2.5 傳入路線

綜合上述分析，外來FMDV傳入我國的路線可推斷為3條（圖2）：一是由東南亞經(jīng)我國西南邊境地區(qū)傳入，這是近年最為活躍的傳入路線；二是由南亞次大陸經(jīng)我國西藏傳入，但經(jīng)多年觀測(cè)證明這條路線并不通暢；三是由中亞傳入我國新疆，或由中亞繞行哈薩克斯坦、土庫曼斯坦、吉爾吉斯斯坦等國家，以及蒙古、俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)，從北方傳入我國，這條路線未來因哈薩克斯坦和俄羅斯無疫區(qū)的建立而有所阻隔。

圖2 外來口蹄疫主要流行毒株及可能傳入的路線

3 防控策略

我國邊境線長(zhǎng)超過20 000 km，與14個(gè)國家陸路相通，與6個(gè)國家隔海相望。周邊國家FMD疫情不斷，對(duì)我國威脅極大。近年來，東南亞FMD疫情傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)最高。據(jù)東南亞-中國口蹄疫控制行動(dòng)委員會(huì)（SEACFMD）有關(guān)信息，每年從東南亞非法進(jìn)入我國的牛逾百萬頭，其FMD感染率為5%～10%。在此形勢(shì)下，我國除要嚴(yán)厲打擊走私行為外，需要針對(duì)境外高風(fēng)險(xiǎn)流行毒株，建立“跟蹤毒株-邊境監(jiān)測(cè)-疫苗評(píng)價(jià)-技術(shù)儲(chǔ)備”四位一體的應(yīng)對(duì)措施。

3.1 跟蹤毒株

加強(qiáng)國際交流與合作，充分利用SEACFMD、東亞口蹄疫防控協(xié)調(diào)委員、OIE/FAO 參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)等信息交流平臺(tái)，確定和跟蹤高危外來毒株的流行和傳播動(dòng)向，開展風(fēng)險(xiǎn)分析，及時(shí)預(yù)警。

3.2 邊境監(jiān)測(cè)

完善監(jiān)測(cè)體系，持續(xù)開展高風(fēng)險(xiǎn)邊境地區(qū)監(jiān)測(cè)。充分發(fā)揮國家動(dòng)物疫情測(cè)報(bào)站和邊境動(dòng)物疫情監(jiān)測(cè)站（“兩站”）作用，加強(qiáng)“兩站”在規(guī)范采樣和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)等方面的培訓(xùn)，提高早期發(fā)現(xiàn)病原的能力。

3.3 疫苗評(píng)價(jià)

在境外毒株傳入我國之前，利用OIE參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)，委托開展我國疫苗免疫血清對(duì)境外毒株的中和試驗(yàn)，進(jìn)行疫苗評(píng)價(jià)，及時(shí)指導(dǎo)針對(duì)性疫苗技術(shù)的儲(chǔ)備。從2015年起，計(jì)劃在2～3年內(nèi)，通過與WRLFMD合作，完成我國疫苗免疫血清對(duì)當(dāng)前有威脅毒株的中和試驗(yàn)，以期獲得疫苗匹配性數(shù)據(jù)。目前已完成4株境外毒株（1個(gè)O型、1個(gè)A型、2個(gè)Asia1型）的中和試驗(yàn)。

3.4 技術(shù)儲(chǔ)備

針對(duì)我國疫苗抗原匹配性不好的境外流行毒，提前儲(chǔ)備疫苗毒株。利用反向遺傳技術(shù)平臺(tái)，在前期已獲得對(duì)豬和牛均無致病性，且不形成血毒癥、不排毒的抗原高產(chǎn)疫苗種毒的基礎(chǔ)上，植入上述威脅毒株的抗原序列，構(gòu)建針對(duì)性疫苗毒株，建立抗原儲(chǔ)備庫，從而在確保所構(gòu)建疫苗種毒生物安全基礎(chǔ)上，提升疫苗的抗原譜、保護(hù)效力和免疫持續(xù)期。目前，國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建了針對(duì)新傳入和尚未傳入我國的O/Ind2001、A/G VII、O/PanAsia-2、A/Iran-05和 Asia1/Sindh-08等 5個(gè) 境外流行毒株的無致病性、速效和長(zhǎng)效疫苗種毒候選株，在制備免疫血清后，已委托WRL-FMD開展中和性評(píng)價(jià)。