白艷艷，王利云，薛琳玨，薛久洲，韓 斌，劉健鵬，陳裕華，胡明明

（1.榆林市動物疫病預(yù)防控制中心，陜西榆林 719000；2.榆林市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，陜西榆林 719000；3.廣州市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440；4.山西省動物疫病預(yù)防控制中心，山西太原 030027）

H7亞型流感病毒屬正黏病毒科甲型流感病毒屬，為有囊膜的單股負鏈RNA病毒，其中的H7N9流感病毒除了可感染人和禽外，還可感染豬、馬、水貂和海洋哺乳動物[1-3]。2017年以前，H7N9流感病毒對家禽表現(xiàn)為低致病性，不會導(dǎo)致家禽出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。2017年1月中旬，國家禽流感參考實驗室從廣東省活禽市場樣品中分離到H7N9變異毒株。該變異株對雞呈現(xiàn)高致病性，可引起雞大量發(fā)病和死亡。2017年5月，陜西省榆林市榆陽區(qū)一養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的蛋雞暴發(fā)H7N9流感疫情，導(dǎo)致2.2萬只蛋雞發(fā)病死亡。

為了解榆林市規(guī)模雞場H7亞型流感的血清學(xué)流行率、分布情況和傳播風(fēng)險因素，2017年4—5月，通過血清學(xué)檢測和問卷調(diào)查，對某縣134個規(guī)模場開展了研究，以期為榆林市的H7亞型流感防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 目標群及抽樣策略

本研究以某縣267個存欄量≥500羽的規(guī)模雞場為目標群。

采用兩階段隨機抽樣方法：第一階段，采用估計流行率方法，計算抽樣雞場數(shù)。應(yīng)用WinEpi軟件，按照95%置信水平，50%的預(yù)期流行率和6%的可接受誤差抽樣，計算出從267個規(guī)模場中，需抽取134個場。第二階段，采用發(fā)現(xiàn)疫病方法，計算雞場內(nèi)樣品的抽樣數(shù)量。按照95%置信水平，10%的預(yù)期流行率，計算出每場需抽取30份。

1.2 采樣與檢測

抽取雞全血制備血清，采用H7亞型流感血凝抑制試驗進行檢測；血凝抑制價≥4 log2，判定為血清學(xué)陽性。

1.3 病例定義

血清學(xué)陽性場：2017年4—5月，采用H7亞型流感血凝抑制試驗，至少檢出1份血清學(xué)陽性樣品的場。

血清學(xué)陰性場：2017年4—5月，采用H7亞型流感血凝抑制試驗，未檢出血清學(xué)陽性樣品的場。

1.4 風(fēng)險因素調(diào)查

設(shè)計調(diào)查問卷，對所有采樣的規(guī)模場進行調(diào)查。調(diào)查內(nèi)容包括：飼養(yǎng)雞品種、周圍環(huán)境、養(yǎng)殖模式、管理模式、防疫情況、通風(fēng)方式，以及與其他動物混養(yǎng)情況、可能的傳播途徑等。

1.5 數(shù)據(jù)分析

對檢測結(jié)果用Excel進行匯總和描述性分析，用ArcGis10.2 軟件繪制該縣監(jiān)測場的空間分布圖。用IBM SPSS22 統(tǒng)計軟件進行單因素分析，保留P＜0.05 的風(fēng)險因素；用Pearson相關(guān)性分析，選擇相關(guān)系數(shù)小于0.4 的因素；然后用EpiInfoTM7 對保留的風(fēng)險因素進行多因素Logistic 回歸分析，得到回歸模型；對建立的Logistic模型制作ROC曲線，評估模型擬合度。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模雞場場群流行率

該縣轄有21個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，共有267個規(guī)模場（≥500羽），養(yǎng)殖199.675萬羽雞（表1）。此次研究實際調(diào)查了144個規(guī)模場，采集4 771份樣品進行血清學(xué)檢測，共檢出91份陽性樣品、20個陽性場，規(guī)模雞場的表觀流行率（HPA）為13.89%（95%CI：8.69%～20.63%）。

表1 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖情況統(tǒng)計

2.2 監(jiān)測場空間分布

利用ArcGIS10.2對監(jiān)測場制作空間分布圖（圖1）。由圖1可知，陽性場主要集中在該縣養(yǎng)殖量大的NJL鎮(zhèn)和YH鎮(zhèn)，尤其是集中在以NJL鎮(zhèn)為中心的區(qū)域。

圖1 空間分布

2.3 風(fēng)險因素分析

2.3.1 單因素分析 對調(diào)查問卷中收集的 26個風(fēng)險因素進行單因素分析，共篩選到2個有統(tǒng)計學(xué)意義的風(fēng)險因素（P＜0.05），分別是“本場人員到過其他禽場”和“有外來車輛進入本場”（表2）。2.3.2 多因素 Logistic 回歸分析 篩選出單因素分析P＜0.05的2個因素，應(yīng)用SPSS進行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)2個風(fēng)險因素之間相關(guān)系數(shù)＜0.4，沒有相關(guān)性。通過似然比檢驗，發(fā)現(xiàn)“外來車輛進入本場”（X1）、“本場人員到過其他禽場”（X2）這2個因素之間有混雜，但沒有交互作用。擬合方程為：LogP/（1?P）=?2.770+1.523X1+1.216X2，（－ 2LL=99.313）；經(jīng)Hosemer-Lemeshow擬合度檢驗χ2=0.003（df=1，P=0.956＞0.05），說明進入模型的風(fēng)險因素與預(yù)期風(fēng)險因素?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異，模型擬合度較好（表3）。模型的ROC曲線（圖2）下面積為0.714（95%CI：0.585～0.843）。

3 討論

2017年全國共發(fā)生9起禽H7N9高致病性流感疫情，而且疫情分布廣泛[4]。H7N9病毒可通過禽類及其糞便、羽毛、呼吸道分泌物、血液等，經(jīng)呼吸道、接觸等方式傳播[5-6]。由于國內(nèi)試劑盒沒有標注試驗敏感性和特異性，研究者也未查閱到血凝抑制試驗的敏感性和特異性。為了提高檢測敏感性，本研究將病例定義為檢測出1份陽性樣品的場即為陽性場。因為本研究目的是了解規(guī)模雞場血清學(xué)陽性率，所以只要檢出陽性樣品，就將該場認定為陽性場。由于診斷方法特異性低，可能會出現(xiàn)假陽性場。

表2 該縣H7亞型流感傳播風(fēng)險因素單變量分析

表3 該縣H7流感傳播風(fēng)險因素多因素Logistic回歸分析

圖2 回歸模型的ROC曲線

本研究是在2017年4—5月進行的，當(dāng)時全國范圍還未開展H7N9流感疫苗免疫，因此檢測出陽性即為存在病毒感染。本研究將該縣所有267個規(guī)模雞場（≥500羽）作為研究目標群，經(jīng)抽樣檢測發(fā)現(xiàn)，場群表觀流行率為13.89%，但不是所有血清學(xué)陽性場都發(fā)病，所以可以認為該區(qū)域高致病性和低致病性H7亞型流感并存，且主要以低致病性為主，病毒污染面較廣。

本研究檢出的20個陽性場主要集中在養(yǎng)殖量大的NJL鎮(zhèn)和YH鎮(zhèn)，且以NJL鎮(zhèn)為中心。調(diào)查時發(fā)現(xiàn)，NJL鎮(zhèn)的一養(yǎng)殖場曾出現(xiàn)蛋雞異常死亡現(xiàn)象，經(jīng)國家參考實驗室確診，該起疫情為H7N9流感疫情。此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)NJL鎮(zhèn)陽性場最多，有可能和該鎮(zhèn)發(fā)生的這起高致病性H7N9流感疫情有關(guān)。

由于NJL鎮(zhèn)發(fā)生了高致病性H7N9流感疫情，故對NJL鎮(zhèn)所有存欄大于500羽的場戶都進行了監(jiān)測，空間分布包含NJL鎮(zhèn)所有大于500羽的場戶信息，在進行分析風(fēng)險因素統(tǒng)計時，可能會導(dǎo)致本次研究的統(tǒng)計數(shù)據(jù)存在偏倚，但NJL鎮(zhèn)的場陽性率、陽性場分布和風(fēng)險因素更接近真實情況。

4 結(jié)論

本研究通過兩階段隨機抽樣方法，在榆林市某縣抽取144個場進行H7N9流感血清學(xué)檢測和問卷調(diào)查，發(fā)現(xiàn)規(guī)模雞場（≥500羽）表觀流行率（HPA）為13.89%，且血清陽性場分布較為集中，說明該地局部地區(qū)的規(guī)模雞場存在一定程度的H7N9病毒流行；部分陽性場雞群并未表現(xiàn)發(fā)病癥狀，說明該地區(qū)雞場高致病性和低致病性病毒并存。風(fēng)險因素分析發(fā)現(xiàn)，“本場人員到過其他禽場”“有外來車輛進入本場”為主要影響因素，說明控制人員、車輛的流動，對于控制H7N9流感暴發(fā)具有積極意義，建議規(guī)模雞場要嚴格控制人員的場間流動，外來車輛進入本場時要做好消毒。