李秀偉,薛新建,王麗欣

石家莊市欒城人民醫(yī)院婦科,石家莊0514300

卵巢癌是一種比較常見的婦科腫瘤,其病死率 居婦科腫瘤首位[1].卵巢癌的臨床表現(xiàn)多樣,且發(fā)病的隱匿性較高,當患者出現(xiàn)特征性癥狀而就診時,卵巢癌已經(jīng)發(fā)展至晚期.因此,早期篩查、及時診斷對改善卵巢癌患者的預后具有十分重要的意義.目前,卵巢癌的發(fā)病機制尚未完全闡明,而且臨床尚缺乏有效的卵巢癌篩查方法[2-3].結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)具有參與介導機體組織的創(chuàng)傷修復、炎癥因子調(diào)節(jié)、血管和組織纖維化生成等作用.近年來,CTGF在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用逐漸得到關注[4-5].血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是Leung等[6]在1989年發(fā)現(xiàn)的一類促進血管內(nèi)皮細胞分裂的蛋白質(zhì),VEGF家族共包括6個部分,主要促進血管和淋巴管的生成.相關研究發(fā)現(xiàn),VEGF參與腫瘤細胞的增殖和腹腔積液的形成等過程,并促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移,但是目前其作用機制尚不能確切闡述[7].本研究通過檢測CTGF和VEGF在卵巢癌組織中的表達水平,探究其對卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響,現(xiàn)報道如下.

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年3月至2017年8月石家莊市欒城人民醫(yī)院收治的行手術(shù)治療的卵巢癌患者的病歷資料,并收集對應的手術(shù)切除的卵巢癌組織石蠟標本.納入標準:①經(jīng)病理診斷確診為卵巢癌;②無內(nèi)科和外科疾病史;③術(shù)前未進行化療.排除標準:①病歷資料不完整;②卵巢癌轉(zhuǎn)移;③合并妊娠或其他婦科疾病;④合并重要器官功能嚴重不全.根據(jù)納入和排除標準,本研究共納入卵巢癌患者42例,年齡為24～76歲,平均年齡為(41.39±6.74)歲;病理類型:漿液性卵巢癌24例,黏液性卵巢癌8例,子宮內(nèi)膜樣腺癌6例,透明細胞癌4例.

1.2 檢測方法

采用免疫組化鏈酶菌抗生素蛋白-過氧化物酶(streptavidin-peroxidase,SP)法對卵巢癌原發(fā)灶進行檢測,將卵巢癌石蠟標本切片,厚度為4 μm,60℃下烤干,常規(guī)脫蠟至水,使用3%H2O2,37℃孵育30 min消除內(nèi)源性過氧化物酶活性,微波爐抗原熱修復.病理標本按檢測項目分為CTGF組和VEGF組.CTGF組滴加兔抗人CTGF多克隆抗體(稀釋度為1∶40),VEGF組滴加兔抗人VEGF多克隆抗體(稀釋度為1∶50),4℃孵育過夜,磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次5 min;滴加二抗工作液,37℃孵育30 min,磷酸鹽緩沖液沖洗3次,每次5 min;二氨基聯(lián)苯胺顯色2～10 min,鏡下觀察顯色情況,蒸餾水終止顯色,蘇木精復染,蒸餾水沖洗,將100%、95%、80%乙醇梯度脫水,二甲苯脫水、透明和封片后,置于顯微鏡下觀察.

1.3 觀察指標及評價標準

觀察卵巢癌患者卵巢癌組織中CTGF和VEGF的表達情況及微血管密度(microvessel density,MVD)、淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD).根據(jù)腫瘤細胞染色強度進行評分:無著色評為0分,淺黃色評為1分,棕黃色評為2分,棕褐色評為3分.根據(jù)陽性細胞所占比例進行評分:陽性細胞所占比例<25%,評為0分;陽性細胞所占比例為25%～50%,評為1分;陽性細胞所占比例為51%～75%,評為2分;陽性細胞所占比例>75%,評為3分.根據(jù)腫瘤細胞染色強度和陽性細胞所占比例評分之和對CTGF和VEGF的表達情況進行判定:0分為陰性表達(-),1～3分為弱陽性表達(+),4～6分為中等陽性表達(++),>6分為強陽性表達(+++).MVD和LVD檢測:在100倍光鏡下觀察卵巢癌組織切片,挑選微血管分布最高密度區(qū)域,然后在200倍光鏡下計數(shù)5個不重復視野中被CD34和podoplanin單抗免疫組化染色后的微血管和淋巴管,取其平均值分別作為MVD和LVD.

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分-析.符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差()表示,組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗;使用多元逐步Logistic回歸分析卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素.以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義.

2 結(jié)果

2.1 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢組織中CTGF、VEGF的表達情況

不同腹膜轉(zhuǎn)移情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度卵巢癌患者卵巢癌組織中CTGF陽性表達率比較,差異均有統(tǒng)計學意義(χ2=4.367,P=0.037;χ2=8.575,P=0.003;χ2=9.231,P=0.010);但不同年齡、病理類型、病理分期、臨床分期卵巢癌患者卵巢癌組織中CTGF陽性表達率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05).不同病理分期、臨床分期、腹膜轉(zhuǎn)移情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度卵巢癌患者卵巢癌組織中VEGF陽性表達率比較,差異均有統(tǒng)計學意 義(χ2=7.762,P=0.021;χ2=6.675,P=0.010;χ2=4.049,P=0.044;χ2=5.151,P=0.023;χ2=7.779,P=0.020);但不同年齡、病理類型卵巢癌患者卵巢癌組織中VEGF陽性表達率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05).(表1)

2.2 卵巢癌組織中CTGF、VEGF表達與MVD和LVD的關系

根據(jù)卵巢癌組織中CTGF和VEGF的表達情況將患者分為CTGF陽性組(n=35)、CTGF陰性組(n=7)、VEGF陽性組(n=37)和VEGF陰性組(n=5).CTGF陽性組患者的MVD明顯高于CTGF陰性組,VEGF陽性組患者的MVD明顯高于VEGF陰性組,差異均有統(tǒng)計學意義(t=4.130,P<0.01;t=4.446,P<0.01);CTGF陽性組患者的LVD高于CTGF陰性組,VEGF陽性組患者的LVD高于VEGF陰性組,但差異均無統(tǒng)計學意義(t=0.992,P=0.327;t=1.728,P=0.092).(表2)

表1 不同臨床特征卵巢癌患者卵巢癌組織中CTGF、VEGF的表達情況(n=42)

表2 不同組別卵巢癌患者的MVD、LVD(±s)

表2 不同組別卵巢癌患者的MVD、LVD(±s)

組別CTGF陽性組(n=35)CTGF陰性組(n=7)VEGF陽性組(n=37)VEGF陰性組(n=5)MVD 37.03±10.34 20.49±4.22 39.62±9.84 19.74±3.01 LVD 10.97±7.06 8.25±3.17 11.88±5.03 7.85±3.45

2.3 卵巢癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移影響因素的多因素分析

以是否發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移為因變量,以VEGF、CTGF表達水平為自變量,行多元逐步Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:VEGF陽性表達是卵巢癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(P<0.05),其中VEGF陽性表達患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的危險性是VEGF陰性表達患者的3.71倍.(表3)

2.4 卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素分析

以是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為因變量,以VEGF、CTGF表達水平為自變量,行多元逐步Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:CTGF陽性表達和VEGF陽性表達均是卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(P<0.05),其中CTGF陽性表達的卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險性是CTGF陰性表達患者的1.91倍,VEGF陽性表達患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險性是VEGF陰性表達患者的7.34倍.(表4)

表3 42例卵巢癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移影響因素的多因素Logistic回歸分析

表4 42例卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素的多因素Logistic回歸分析

3 討論

卵巢癌的發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)腫瘤第3位,病死率居于女性生殖系統(tǒng)腫瘤首位[10].由于發(fā)病隱匿、早期無特異性臨床癥狀及缺乏有效的篩查方法,多數(shù)卵巢癌患者確診時往往已經(jīng)發(fā)展到臨床晚期,出現(xiàn)腹膜轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.CTGF是多效能生物蛋白分子,能夠促進細胞增殖、細胞黏附、細胞纖維化及血管生成.相關研究表明,CTGF參與了腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移等病理過程,是腫瘤血管形成的一種重要的促進因素,但是CTGF在腫瘤生長、轉(zhuǎn)移過程中的作用機制非常復雜,其在不同組織、不同環(huán)境中發(fā)揮的作用也不相同,甚至會出現(xiàn)相反的作用[11-12].VEGF是特異的內(nèi)皮細胞有絲分裂素,可以與內(nèi)皮細胞特異性受體結(jié)合促進細胞的分裂增殖、促進血管生成生長及提高血管的通透性,在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用,是導致惡性腹腔積液形成的重要原因[13-14].既往研究表明,VEGF是卵巢癌診斷以及預后評價的重要指標,能夠促進卵巢癌細胞的增殖,通過提高血管通透性等作用促進卵巢癌細胞的轉(zhuǎn)移[15].卵巢癌在生長過程中,會出現(xiàn)大量的新生血管和淋巴管,促使腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移[16].因此,CTGF與VEGF的表達可能對卵巢癌的早期檢測、預后評價及預估轉(zhuǎn)移風險具有一定價值.

本研究通過對42例卵巢癌患者進行研究,其中發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移29例,發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例,共檢出CTGF陽性35例,VEGF陽性37例.卵巢癌組織中CTGF陽性表達與卵巢癌患者的腹膜轉(zhuǎn)移情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和分化程度有關,但與卵巢癌患者的年齡、病理類型、病理分期、臨床分期無關.卵巢癌組織中VEGF陽性表達與卵巢癌患者的病理分期、臨床分期、腹膜轉(zhuǎn)移情況、淋巴轉(zhuǎn)移情況和分化程度有關,但與卵巢癌患者的年齡、病理類型無關,本研究結(jié)果與既往研究結(jié)果基本相符[17].同時,本研究結(jié)果還顯示,CTGF陽性組患者的MVD明顯高于CTGF陰性組,VEGF陽性組患者的MVD明顯高于VEGF陰性組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01);CTGF陽性組患者的LVD高于CTGF陰性組,VEGF陽性組患者的LVD高于CTGF陰性組,但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),表明CTGF與VEGF與卵巢癌組織的血管生成有關,從而影響卵巢癌患者的腹膜轉(zhuǎn)移情況,與張宗瑧等[18]和Moran-Jones等[19]研究結(jié)果基本相符.本研究進一步通過Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),VEGF陽性表達是卵巢癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(P<0.05),CTGF陽性表達和VEGF陽性表達均是卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素(P<0.05),CTGF陽性表達的卵巢癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險性是CTGF陰性表達患者的1.91倍,VEGF陽性表達患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險性是VEGF陰性表達患者的3.71倍與7.34倍,說明VEGF具有促進卵巢癌發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用,CTGF和VEGF均具有促進卵巢癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用,推測兩者均可以作為預測卵巢癌發(fā)生發(fā)展的獨立預測因子.但是在陳秀瑋等[20]研究中,CTGF在正常卵巢組織中表達水平高于卵巢癌組織,更高的CTGF表達水平預示著更長的生存時間,在卵巢癌患者中起保護作用,且CTGF與VEGF的表達呈負相關,與本研究不符,分析導致此種顯現(xiàn)的原因可能與本研究樣本量較小有關.

綜上所述,卵巢癌組織中CTGF和VEGF的陽性表達率均較高,且與卵巢癌患者的腹膜轉(zhuǎn)移情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度等臨床特征有關,因此推測CTGF、VEGF能夠促進卵巢癌組織微血管和淋巴管的生成,促進卵巢癌患者發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移.但仍需要更加深入的研究以明確CTGF、VEGF在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用機制,為臨床卵巢癌診療做出指導.