潘建生,江濤,陳一杰,劉朝輝

解放軍第一八〇醫(yī)院普通外科,福建 泉州3620000

胃惡性腫瘤在全球高發(fā),近年來(lái)中國(guó)胃癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì),嚴(yán)重威脅中國(guó)公眾的生命健康.惡性腫瘤存在自我增殖、血管新生、組織遷徙、無(wú)限復(fù)制和逃避凋亡等特征,目前胃癌基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)集中在癌基因和抑癌基因表達(dá)的失調(diào)和腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子等[1].生長(zhǎng)停滯DNA損傷可誘導(dǎo)蛋白α(growth arrest and DNA damage inducible protein alpha,GADD45α)在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期監(jiān)測(cè)點(diǎn)、細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)、維持基因組穩(wěn)定等方面中扮演重要角色;趨化因子是由腫瘤細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞分泌的一類重要細(xì)胞因子,其與受體結(jié)合后影響腫瘤細(xì)胞遷移、血管再生、成纖維細(xì)胞間質(zhì)合成等,也可以結(jié)合腫瘤細(xì)胞上相關(guān)特異性受體而直接造成腫瘤細(xì)胞的增殖或者凋亡,從而調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2-3].本研究探討了GADD45α、趨化因子CXCL14蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系,以期為臨床提供依據(jù)和指導(dǎo),現(xiàn)報(bào)道如下.

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年8月至2016年12月解放軍第一八〇醫(yī)院術(shù)后胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本.納入標(biāo)準(zhǔn):①胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參考人民衛(wèi)生出版社《外科學(xué)》[4]中的標(biāo)準(zhǔn);②胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本均來(lái)源于手術(shù)后,經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)證實(shí);③患者獲取標(biāo)本前未實(shí)施放化療;④患者臨床資料完整.排除標(biāo)準(zhǔn):①轉(zhuǎn)移性胃癌;②放化療史;③未經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)證實(shí);④臨床資料缺失.共納入胃癌組織標(biāo)本60例(胃癌組)及對(duì)應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本60例(對(duì)照組).60例患者中,男35例,女25例;年齡39～77歲,平均(53.3±8.6)歲;TNM分期:Ⅰ期10例,Ⅱ期24例,Ⅲ期20例,Ⅳ期6例;浸潤(rùn)深度:T1期18例,T2期20例,T3期18例,T4期4例;分化程度:高分化12例,中分化21例,低分化27例;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例.

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

對(duì)所切取標(biāo)本采用10%中性福爾馬林溶液進(jìn)行固定,石蠟包埋,4 μm連續(xù)切片制作5片,其中4片黏附在載玻片上進(jìn)行免疫組化染色,免疫組化染色采用SP法,1片使用HE染色法,對(duì)患者GADD45α蛋白和CXCL14蛋白表達(dá)情況進(jìn)行判定.

1.3 檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

GADD45α蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞核,CXCL14蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì),呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá).①根據(jù)著色強(qiáng)度評(píng)分:無(wú)色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,褐色、黑色為3分;②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分:陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≤10%為1分,11%～50%為2分,51%～75%為3分,>75%為4分.兩種積分相乘總分<3分為陰性,≥3分為陽(yáng)性.

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)-計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析.計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 GADD45 α、CXCL14蛋白表達(dá)情況的比較

胃癌組標(biāo)本的GADD45α、CXCL14蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.67%、78.33%,均明顯高于對(duì)照組標(biāo)本的30.00%、36.67%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.839、21.313,P<0.01).(表1)

表1 兩組患者GADD45α 、CXCL14蛋白表達(dá)情況的比較[n(%)]

2.2 胃癌組織中GADD45 α、CXCL14蛋白表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系

TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織的GADD45α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.374、4.022,P<0.05);不同腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度的胃癌組織中GADD45α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).低分化、浸潤(rùn)深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的胃癌組織的CXCL14蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于高中分化、浸潤(rùn)深度為T1+T2、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的胃癌組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.881、6.000、5.279,P<0.05);是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中CXCL14蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).(表2)

表2 不同臨床特征胃癌組織中GADD45α 、CXCL14蛋白表達(dá)情況(n=60)

3 討論

胃癌屬于中國(guó)常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤,目前發(fā)病機(jī)制尚不清楚,胃癌的發(fā)生與其他惡性腫瘤一樣,涉及多個(gè)基因的突變,是DNA損傷的結(jié)果.胃黏膜的生理位置決定了其容易受到多種因素的損傷,這可能是胃癌高發(fā)的原因,許多因素均可以引起胃黏膜及腺體細(xì)胞DNA的損傷,如電離輻射、吸煙、飲酒、環(huán)境污染、基因毒性劑等[3-4].正常的人體細(xì)胞內(nèi)存在十分有效的DNA修復(fù)系統(tǒng),可以修復(fù)DNA損傷,維持基因組的穩(wěn)定和細(xì)胞的正常功能.一旦修復(fù)系統(tǒng)功能出現(xiàn)障礙,DNA損傷就會(huì)持續(xù)存在,錯(cuò)誤信息積累會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞更容易惡變[5].目前研究發(fā)現(xiàn)DNA修復(fù)有多種方式,這些修復(fù)方式在不同層面上起到互補(bǔ)的作用,共同完成修復(fù)任務(wù).分析胃癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中DNA損傷修復(fù)基因的表達(dá)情況可能有助于了解胃癌的發(fā)病機(jī)制[6].近年來(lái)有學(xué)者報(bào)道DNA損傷可以使細(xì)胞遺傳性狀發(fā)生改變,從而使細(xì)胞各種生命活動(dòng)的調(diào)控機(jī)制發(fā)生紊亂,這種紊亂不斷堆積的結(jié)局是基因突變、抑癌基因失活、原癌基因激活,所以認(rèn)為這是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的重要原因,正常情況下DNA受損時(shí)細(xì)胞通過(guò)多種DNA修復(fù)途徑對(duì)抗損傷的發(fā)生,保持了基因組的穩(wěn)定性和完整性,遏制惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[7-8].在人體內(nèi)有多種基因修復(fù)方式和途徑,它們能對(duì)不同形式的DNA損傷傳遞相應(yīng)的修復(fù)信號(hào),從而啟動(dòng)對(duì)應(yīng)的修復(fù)途徑[9],本研究即通過(guò)觀察GADD45α、CXCL14蛋白這兩個(gè)DNA修復(fù)相關(guān)因子在胃癌患者中的表達(dá)情況,以期尋求胃癌患者治療的新途徑.

GADD45基因?yàn)樯L(zhǎng)抑制及DNA損傷誘導(dǎo)基因,最初從紫外線照射的細(xì)胞中分離得到,是對(duì)細(xì)胞增殖呈負(fù)性調(diào)控的應(yīng)激反應(yīng)基因家族,GADD45基因在細(xì)胞周期監(jiān)測(cè)、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸關(guān)系密切[10].GADD45α蛋白屬于該基因家族的一種,是生長(zhǎng)抑制及DNA損傷誘導(dǎo)蛋白質(zhì)基因家族的成員,也是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的抑癌基因p53的下游靶基因,其表達(dá)下調(diào)是腫瘤細(xì)胞逃脫程序性死亡的必要條件,通過(guò)抑制其活性能夠抵消抑制核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化所引發(fā)的細(xì)胞凋亡[11-12].趨化因子是一類趨化細(xì)胞定向移動(dòng)的小分子分泌蛋白,根據(jù)氨基端最初的兩個(gè)半胱氨酸的位置可以分為4類,這些趨化因子可以引起淋巴細(xì)胞的定向遷移,在胚胎發(fā)育、血管生成、炎癥、腫瘤、艾滋病等機(jī)體多種生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用.研究證實(shí),趨化因子及其受體網(wǎng)絡(luò)參與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移,腫瘤組織中復(fù)雜的趨化因子體系影響著腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、血管形成以及白細(xì)胞的浸潤(rùn)等過(guò)程[13].CXCL14蛋白能夠趨化單核細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和自然殺傷(natural killer,NK)細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞[14];同時(shí)CXCL14也可通過(guò)減少血管平滑肌細(xì)胞趨化性及降低腫瘤微脈管系統(tǒng)形成從而抑制腫瘤血管形成[15].本研究顯示,胃癌組標(biāo)本的GADD45α、CXCL14蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.67%、78.33%,均明顯高于對(duì)照組標(biāo)本,說(shuō)明GADD45α、CXCL14蛋白在胃癌患者體內(nèi)呈高表達(dá).TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織的GADD45α蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織;低分化、浸潤(rùn)深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的胃癌組織的CXCL14蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于高中分化、浸潤(rùn)深度為T1+T2、TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的胃癌組織.本研究?jī)?yōu)勢(shì)在從分子水平對(duì)胃癌患者體內(nèi)GADD45α、CXCL14蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了分析,提示了胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程復(fù)雜,與多種分子參與調(diào)解并影響表達(dá)水平有關(guān),通過(guò)對(duì)兩種蛋白表達(dá)情況的檢測(cè)有助于胃癌的早期診斷及其預(yù)后的早期預(yù)測(cè),以兩者為靶點(diǎn)的治療可能是胃癌治療的新途徑.但是本研究納入患者數(shù)量有限,而且對(duì)胃癌細(xì)胞學(xué)和基因?qū)W的研究還需要進(jìn)一步證實(shí).

綜上所述,胃癌組織中GADD45α、CXCL14蛋白表達(dá)上調(diào),并且與臨床特征具有一定的關(guān)系.