李京

腫瘤是當(dāng)前威脅人類生命安全最為常見的疾病類型之一, 目前臨床研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程與新生血管存在密切關(guān)聯(lián), 因此, 及早阻斷腫瘤部位及周邊區(qū)域新生血管的形成在抗腫瘤治療過程中具有重大應(yīng)用前景, 也是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)問題［1］。目前, 采取微泡聯(lián)合超聲空化技術(shù)在兔腫瘤試驗(yàn)中取得了一定成效［2,3］。為進(jìn)一步明確微泡增強(qiáng)的超聲空化阻斷腫瘤微循環(huán)的病理過程, 本研究對(duì)10只兔VX2轉(zhuǎn)移瘤模型實(shí)施了耳緣注射微泡及超聲輻照處理, 將其病理變化過程實(shí)施總結(jié)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 選取2016年1月～2017年12月若干健康新西蘭白兔, 10只VX2荷瘤兔作為研究對(duì)象。均由當(dāng)?shù)貏?dòng)物研究所提供。

1.2 建模及分組 先對(duì)存在VX2荷瘤兔肌內(nèi)注射0.15 ml/kg速眠新Ⅱ(湖北貓爾沃生物醫(yī)藥有限公司)麻醉處理, 使VX2荷瘤兔在試驗(yàn)臺(tái)上俯臥, 使荷瘤部位充分暴露, 脫毛消毒處理, 無菌環(huán)境下將VX2腫物取出, 去除中央壞死部分及周邊結(jié)締組織, 將病灶處理成1 mm3大小備用。取健康新西蘭白兔, 肌內(nèi)注射0.15 ml/kg速眠新Ⅱ麻醉, 脫毛、消毒處理, 在劍突下行3 cm切口, 開腹, 牽引出肝左葉, 將肝葉刺破,建立竇道, 將備用腫瘤塊(1～2塊)置于竇道內(nèi), 壓迫止血后,還納處理, 縫合切口, 形成模型兔。在模型建立14 d后, 使用GE LOGIQ P6彩色超聲診斷儀探查模型兔肝臟腫瘤狀況,探頭頻率為5～9 HMz, 了解腫瘤回聲、中心壞死狀況、腫瘤血供狀況。取無中心壞死區(qū)、腫瘤直徑1 cm左右、血供豐富模型兔進(jìn)行研究, 共20只。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為常規(guī)組與微泡組, 各10只。常規(guī)組雌性5只, 雄性5只, 體質(zhì)量跨度2～2.5 kg, 平均體質(zhì)量2.28 kg(s=1.03)；微泡組雌性5只,雄性5只, 體質(zhì)量跨度2～2.5 kg, 平均體質(zhì)量2.26 kg(s=1.11)。兩組模型兔一般資料比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.3 治療方法

1.3.1 常規(guī)組 實(shí)施耳緣注射生理鹽水及超聲輻照, 對(duì)模型兔麻醉處理, 左肝區(qū)部位脫毛、開腹處理, 暴露病灶, 耳緣注射5 ml生理鹽水(哈藥集團(tuán)制藥六廠, 國(guó)藥準(zhǔn)字 H32020857),并采取的CZ-960型脈沖式超聲空化治療儀(廣州晉康醫(yī)療科技有限公司)實(shí)施超聲輻照, 探頭直徑2.5 cm, 發(fā)射頻率1 kHz, 占空比0.5%。輻照10 min。

1.3.2 微泡組 實(shí)施耳緣注射微泡及超聲輻照, 模型兔,麻醉、脫毛、開腹、超聲輻照處理方式與常規(guī)組相同, 另實(shí)施耳緣注射微泡(BraccoImagingB.V., 注冊(cè)證號(hào)H20080059)0.2 ml/kg+生理鹽水5 ml。

1.4 觀察指標(biāo) 比較兩組模型兔超聲造影峰值狀況及病理學(xué)檢查結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 超聲造影峰值狀況 治療前, 兩組超聲造影峰值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后, 兩組超聲造影峰值明顯低于治療前, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且微泡組超聲造影峰值明顯低于常規(guī)組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組模型兔超聲造影峰值狀況比較( ±s)

表1 兩組模型兔超聲造影峰值狀況比較( ±s)

注：與常規(guī)組治療后比較, aP＜0.05

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2.2 病理學(xué)檢查結(jié)果 實(shí)施大體解剖后, 肉眼觀測(cè)：微泡組超聲輻照面腫瘤組織呈現(xiàn)出血點(diǎn), 周邊組織呈現(xiàn)暗紅色；單純組無明顯變化。光鏡檢測(cè)顯示：微泡組腫瘤組織大面積出血, 血管內(nèi)皮損傷, 紅細(xì)胞外滲, 腫瘤細(xì)胞腫脹, 染色質(zhì)向邊緣聚集, 細(xì)胞質(zhì)透亮, 周邊肝竇明顯擴(kuò)張；單純組腫瘤組織呈現(xiàn)局灶性出血, 血管內(nèi)皮無明顯缺損, 腫瘤細(xì)胞及周邊細(xì)胞無明顯變化, 周邊肝竇輕微擴(kuò)張。電鏡觀測(cè)：微泡組血管內(nèi)皮嚴(yán)重破損, 呈現(xiàn)基膜中斷狀況, 紅細(xì)胞大量外滲, 線粒體明顯腫脹或呈現(xiàn)固縮損傷；常規(guī)組血管內(nèi)皮無明顯破損,無基膜中斷狀況, 線粒體正常。

3 討論

目前, 抗腫瘤治療是臨床治療腫瘤疾病的主要方式, 隨著臨床對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制的研究逐漸深入, 越來越多研究證實(shí)新生血管形成在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用, 因此,抗腫瘤新生血管形成成為臨床治療腫瘤疾病的新途徑［4］。以往多采取藥物治療抑制并殺死腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞, 進(jìn)而阻斷腫瘤血供及營(yíng)養(yǎng)供給, 阻斷腫瘤微循環(huán)來促進(jìn)腫瘤凋亡。但藥物治療用藥不良反應(yīng)較多, 且易產(chǎn)生耐藥性［5,6］。

超聲空化是通過超聲引起液體中微小氣泡(空化核)產(chǎn)生振動(dòng)、生長(zhǎng)、聚集聲場(chǎng)能量、急劇崩潰內(nèi)爆的技術(shù), 其可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞損傷, 阻斷腫瘤微循環(huán)［7］。實(shí)施微泡聯(lián)合超聲空化治療時(shí), 微泡本身可補(bǔ)充外源性空化核, 便于提升局部微泡濃度, 產(chǎn)生更大的爆破能量［8-10］。本研究結(jié)果顯示, 治療后, 兩組超聲造影峰值明顯低于治療前, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且微泡組超聲造影峰值明顯低于常規(guī)組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；微泡組呈現(xiàn)大面積片狀充盈缺損,常規(guī)組多為點(diǎn)狀充盈缺損。說明微泡組對(duì)腫瘤細(xì)胞血供及微循環(huán)阻斷效果更明顯, 療效顯著。病理學(xué)結(jié)果顯示, 兩組均出現(xiàn)腫瘤組織出血、血管內(nèi)皮損傷狀況, 但微泡組損傷更嚴(yán)重, 可出現(xiàn)腫瘤組織大面積出血、血管內(nèi)皮缺損、紅細(xì)胞外滲、線粒體異常等狀況, 說明實(shí)施微泡增強(qiáng)的超聲空化治療對(duì)病灶部位損傷更大, 可加重血管損傷、出血, 進(jìn)而阻斷腫瘤細(xì)胞血供及循壞。

綜上所述, 微泡增強(qiáng)的超聲空化不僅可直接降低腫瘤細(xì)胞血液灌注, 還可通過引起血管損傷進(jìn)一步阻斷腫瘤血供及微循環(huán)。