亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        振蕩提取-高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定藻類中6種形態(tài)砷化合物

        2018-11-29 05:52:20周志豪黃振華周朝生陸榮茂曾國權(quán)陳星星
        山東化工 2018年21期
        關(guān)鍵詞:實驗

        周志豪,黃振華,周朝生,陸榮茂,曾國權(quán),陳星星

        (浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所 浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護重點實驗室,浙江 溫州 325005)

        砷是一種普遍存在于藻類中主要的有害重金屬元素之一,其毒性不僅與元素總量有關(guān),還與其存在的化學(xué)形態(tài)密切相關(guān)[1]。As的化學(xué)形態(tài)包括高毒性的As(Ⅲ)、As(Ⅴ),低毒性的甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)和基本無毒的三甲基砷酸(TMA)、砷甜菜堿(AsB)、砷膽堿(AsC)和砷糖(AsS)。目前,對砷的形態(tài)分析主要集中在中藥材、香菇,而藻類中As的相關(guān)研究主要集中在對其總量的測定,對于其形態(tài)分析研究較少。為對藻類樣品中As的不同形態(tài)進行有效的分離測定,合適的分離手段和檢測方法必不可少。HPLC具有分離高沸點、難揮發(fā)性的物質(zhì)的優(yōu)點,而且能設(shè)置不同分離程序;電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)具有靈敏度高、動態(tài)范圍寬、干擾少、可連續(xù)測定等優(yōu)點。因此,采用HPLC與ICP-MS聯(lián)用技術(shù)建立同時快速檢測藻類各形態(tài)As的分析方法,旨在為藻類中As的形態(tài)分析及其安全性評價提供參考[2-4]。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        2016年9月~2016年12月間,在浙江蒼南、洞頭、平陽、瑞安、舟山六橫蒼洞、三門、臨海、溫嶺采集了6個羊棲菜、9個海帶、19個紫菜, 這3個品種共34個藻類樣品。

        AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA、AsⅤ(含量分別為(28.0±1.1)、(38.8±1.1)、(75.7±1.2)、(52.9±1.8)、(25.1±0.8)、(17.5±0.4)μg ·g-1)國家計量科學(xué)研究院;磷酸二氫銨(優(yōu)級純);雙氧水(優(yōu)級純);硝酸(優(yōu)級純)

        1.2 儀器與設(shè)備

        采用安捷倫7900電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)測定As;采用安捷倫1260HPLC和7900電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)聯(lián)用測定砷的形態(tài);ETHOS UP密閉微波消解儀(意大利Milestone公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 HPLC-ICP-MS條件

        HPLC條件:Hamilton PRPX-100陰離子交換柱(250 mm×4.1 mm,10 μm);流動相A:水,流動相B:25 mmol/L磷酸二氫銨溶液(以氨水調(diào)節(jié)pH值至8.0);梯度洗脫程序:0~15min,100%A~100%B,15~20min,100%B~100%A;20~25min,100%A;流速1.0 mL/min;進樣量50 μL。

        1.3.2 樣品前處理

        用采樣點海水清洗去除海藻表面附著物。4 ℃下運回實驗室。超純水沖洗數(shù)次,60 ℃烘干至恒重。磨碎,過60目篩于-20 ℃,密封避光保存待測[1,5]。分析過程以國家生物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW10023(紫菜)進行質(zhì)量控制。

        1.3.3 總砷含量的測定

        準(zhǔn)確稱取藻類樣品1.000 g(精確到0.0001 g)于微波消解管中,加入6 mL優(yōu)級純硝酸,2 mL優(yōu)級純過氧化氫,采用微波消解儀消化至溶液澄清透明,消解程序見表1。消解程序結(jié)束后,待其冷卻,取出消解管,于160 ℃趕酸至近干,用體積分?jǐn)?shù)2 %硝酸定容至10 mL,過0.22μm濾膜,同時做樣品空白,配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液,用ICP-MS儀檢測樣品中總砷的含量。

        1.3.4 提取方式的選擇

        設(shè)計了機械振蕩裝置,并研究了不同的振蕩頻率、振蕩時間(180~360min)對6種形態(tài)砷化物的提取。

        1.3.5 藻類樣品中6種形態(tài)砷化合物的提取

        準(zhǔn)確稱取2.0000 g(精確到0.0001 g)藻類樣品于50 mL離心管中,加入30 mL 0.3 mol/L乙酸溶液提取,將藻類樣品混合均勻后進行振蕩提取,10000 r/min離心10min,收集上清液,將沉淀重復(fù)提取2次,合并上清液,將上清液于1 0000 r/min離心10min后過0.22 μm濾膜,40 ℃條件下濃縮至近干,用超純水定容至10 mL,過0.22 μm濾膜進行HPLC-ICP-MS分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 色譜條件優(yōu)化

        樣品中的AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA、AsⅤ等砷形態(tài)化合物,會由于溶液中的不同的pH值而呈現(xiàn)不同的電性,從而影響其在柱子上的保留時間,本實驗采用了Hamilton PRPX-100(250 mm×4.1 mm,10 μm)陰離子交換柱對不同形態(tài)的As進行分離實驗。選取了碳酸銨溶液、磷酸鹽緩沖液及磷酸二氫銨溶液3種流動相進行分離。結(jié)果表明,AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA、AsⅤ這6種形態(tài)砷在磷酸二氫銨溶液作用下,分離時間較短,峰形較佳;而在流動相磷酸鹽緩沖液和碳酸銨溶液作用下,6種砷形態(tài)化合物并不能完全分離,AsC和AsB無法分開。另外實驗還考察了磷酸二氫銨濃度對6種形態(tài)砷保留時間的影響,分別采用15、20、25、30和35 mmol/L,5種不同濃度的磷酸二氫銨溶液,對6種形態(tài)As的混標(biāo)溶液進行梯度洗脫,結(jié)果如圖1所示。由圖1可知,當(dāng)磷酸二氫銨濃度增大時,各形態(tài)As的保留時間表現(xiàn)各不相同,AsⅤ的保留時間快速的減少,DMA、MMA的保留時間緩慢的減少,AsC、AsB、AsⅢ的保留時間并沒有太大變化,這表明磷酸二氫銨濃度增大時,對不同形態(tài)的砷洗脫能力并不完全相同;當(dāng)磷酸二氫銨濃度達到25 mmol/L時,20min內(nèi)6種形態(tài)的As達到基線分離,峰形較佳,已能完全滿足測試要求,當(dāng)度大于25 mmol/L時部分形態(tài)As的色譜峰開始出現(xiàn)重疊,而且流動相濃度過大,易在柱子內(nèi)沉積堵塞,因此本實驗采用25 mmol/L磷酸二氫銨為流動相[7]。

        pH值對不同形態(tài)As的分離有較大的影響,實驗考察了pH值對其保留時間的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn):pH值在5.0~10.0范圍時,6種形態(tài)的As可以較好地分離開,由于pH值增大有利于縮短分離時間,因此為了保證分離度的同時縮短分析時間,本實驗選擇pH值8.0。

        圖1 磷酸二氫銨濃度對6種形態(tài)As的色譜保留時間的影響

        圖2 磷酸二氫銨pH值對6種形態(tài)As的色譜峰保留時間的影響

        2.2 提取劑的優(yōu)化

        對于多形態(tài)砷提取劑相關(guān)報道,常見的提取溶劑有水、低濃度酸、甲醇水等體系。本實驗比較了不同提取溶劑的萃取效率,在實驗中,發(fā)現(xiàn)采用甲醇/水(體積比1∶1)振蕩提取時,各形態(tài)As的總提取效率有時會高達130%。這可能是因為甲醇溶劑提高了As的離子化效率,從而增強了As的信號值。另外采用甲醇溶劑會使得實際樣品的提取液與標(biāo)準(zhǔn)溶液pH值存在差異,也就使得保留時間產(chǎn)生偏移,但是乙酸作為提取劑可以有效地避免這一現(xiàn)象。

        2.3 提取方式的選擇

        振蕩提取裝置是實驗室自我設(shè)計的裝置,如圖3所示。

        13a1:提取管;13b:提取管配件;13a2提取管密封蓋;12a:第一夾頭;12b:第二夾頭;12c:懸置部圖3 振蕩提取裝置

        經(jīng)過實驗測試,發(fā)現(xiàn)振蕩頻率在200 r/min;時間設(shè)置在200min,對藻類中砷的提取較完全。

        2.4 方法線性范圍與檢出限

        分別配制1、2、5、10、20、50 μg/L的系列砷形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在優(yōu)化的HPLC條件下進行分析,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,如表1所示,6種形態(tài)的砷化合物的相關(guān)系數(shù)R2均大于0.9980。在優(yōu)化的HPLC工作條件下,采用逐級稀釋法以3倍信噪比測定檢出限,AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA和AsⅤ的檢出限分別為0.26、0.27、0.0.34、0.29、0.24、0.31 μg/L。

        表1 6種砷化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限及精密度

        2.5 方法的精密度

        為考察方法的精密度,選擇50 μg/L的6種砷形態(tài)的混合標(biāo)樣連續(xù)測定6次,按優(yōu)化的實驗條件進行分析,以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差評價其重復(fù)性,如表1所示,6種形態(tài)砷化合物的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%~3.9%,均小于5%。

        2.6 加標(biāo)回收率

        選擇藻類樣品進行研究,選擇提取效果最好的0.3 mol/L乙酸溶液進行振蕩提取,分別向其中加入低、中、高3種濃度的6種砷形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按優(yōu)化的實驗條件進行測定,如表所示。AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA和AsⅤ的加標(biāo)回收率分別為92.5%~96.35%、94.2%~98.2%、89.1%~93.1%、85.1%~90.1%、92.1%~98.3%、88.1%~93.4%。

        2.7 樣品測定

        AsC為砷膽堿、AsB為砷甜菜堿、AsⅢ為三價砷、DMA為二甲基砷、MMA為一甲基砷、AsⅤ為五價砷

        圖4 藻類樣品的HPLC-ICP-MS色譜圖

        樣品經(jīng)過0.3 mol·L-1乙酸溶液振蕩提取,如圖1所示,發(fā)現(xiàn)羊棲菜砷的種類較多,在砷甜菜堿和五價砷之間有三個未知峰;其次是海帶,除了一個三價峰以外,也有三個未知峰;紫菜中砷的種類較少,一個三價峰和一個未知峰,從圖中還可以發(fā)現(xiàn)紫菜中有機砷占總砷比例比羊棲菜和海帶都要大。

        3 討論

        本研究發(fā)現(xiàn)在優(yōu)化色譜條件時,AsC、AsB和 As(Ⅲ)并沒有隨著我們對流動相濃度改變,出峰時間而發(fā)生變化,因為在梯度洗脫程序:0~20min,100%A~100%B,而最晚出峰的As(Ⅲ)也僅2.6min,因此流動相溶液大部分為水溶液,而水溶液中,As(Ⅲ)、As(V)、DMA和MMA是以陰離子形式存在,而AsB和AsC是以陽離子形式存在[6]。因此,對于陰離子交換柱,在以磷酸二氫銨為流動相條件下,As(Ⅲ)、As(V)、DMA、MMA和色譜柱固定相上的離子交換劑基團相互作用,二甲基砷以HA和A-各占一半的形式存在,因此在陰離子色譜柱上有一定保留;一甲基砷完全以HA-的形式存在,因此在陰離子色譜柱上保留強于二甲基,而As(V)部分已經(jīng)以HA2-的形式存在,是這幾種離子中保留最強的,按照作用力的大小,As(Ⅲ)、DMA、MMA和As(V)依次被洗脫出來[8]。而AsC和AsB無法與離子交換劑的交換中心發(fā)生交換,只能隨著流動相先流出,因此當(dāng)As(Ⅲ)、As(V)、DMA、MMA、AsC和AsB同時存在時,總是AsC和AsB最先出峰[7-9]。

        萃取溶劑的選擇。在研究樣品提取溶劑時,剛開始考慮甲醇水作為提取溶劑,但我們發(fā)現(xiàn)甲醇水比例較難把握,較少對樣品提取效率不高,多了甲醇具有弱變形性質(zhì),反而降低了提取效率,這可能是甲醇含量多了,提取出樣品中有機物質(zhì),從而干擾了測定的精確性,并且要甲醇的增敏效應(yīng),必然在前處理中增加相應(yīng)的操作步驟,給實驗操作者帶來一定勞動強度。其二,甲醇屬于無色易揮發(fā)的液體,具有一定的毒性,對實驗操作者身體健康有潛在的危害。其三,乙酸在作為提取溶劑時,與標(biāo)準(zhǔn)溶液在pH值上保持了一致,避免了樣品峰的偏移,并且能有效的提取樣品中的多形態(tài)砷[10-11]。

        4 結(jié)論

        建立了AsC、AsB、AsⅢ、DMA、MMA和AsⅤ6種形態(tài)As的HPLC-ICP-MS方法。6種不同形態(tài)的As的HPLC-ICP-MS方法。6種不同形態(tài)的As在20min內(nèi)實現(xiàn)了基線分離。藻類中的As含量較低,且大部分以低毒的砷糖形式存在。振蕩溶劑提取能同時將有機As和無機As提取出來,較客觀地反映樣品中As的形態(tài)分布。對于藻類樣品中As的安全性評價而言,其形態(tài)分析比總量檢測更為合理。本方法準(zhǔn)確、可靠,可為藻類中As的形態(tài)分析及安全性評價提供參考。

        猜你喜歡
        實驗
        我做了一項小實驗
        記住“三個字”,寫好小實驗
        我做了一項小實驗
        我做了一項小實驗
        記一次有趣的實驗
        有趣的實驗
        小主人報(2022年4期)2022-08-09 08:52:06
        微型實驗里看“燃燒”
        做個怪怪長實驗
        NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實驗的改進
        實踐十號上的19項實驗
        太空探索(2016年5期)2016-07-12 15:17:55
        日韩内射美女人妻一区二区三区| 日本第一影院一区二区| 亚洲一区二区女搞男| 国产精品视频露脸| 欧美一级在线全免费| 日本高清视频在线一区二区三区| 日本一二三四高清在线| 久久久久久无码av成人影院| 日韩无码视频淫乱| 视频精品熟女一区二区三区| 日本一本一道久久香蕉男人的天堂 | 精东天美麻豆果冻传媒mv| 爱我久久国产精品| 亚洲av乱码一区二区三区观影| 美女用丝袜脚玩我下面| 成人午夜性a级毛片免费| 久久久伊人影院| 成人免费播放片高清在线观看| 国产精品国产三级第一集| av无码天堂一区二区三区| 亚洲黄色在线看| 日韩精品一区二区亚洲专区 | 国产一区二区三区十八区| av中文字幕潮喷人妻系列| 亚洲 欧美 唯美 国产 伦 综合| 女同性恋亚洲一区二区| 丝袜美腿国产一区精品| 欧美人和黑人牲交网站上线| 乱中年女人伦av三区| 亚洲av推荐网站在线观看| 久久久久亚洲av成人网人人软件| 亚洲av日韩av无码av| 日韩精品一区二区三区中文9| 日本系列中文字幕99| 中文亚洲欧美日韩无线码| 9久久精品视香蕉蕉| 亚洲av网一区二区三区成人| 亚洲人成影院在线无码按摩店 | 国产后入清纯学生妹| 精品人妻伦九区久久AAA片69| 男受被做哭激烈娇喘gv视频|