倪文娟 張冬霞 劉學(xué)文 卓立霞 云雁 馮于 馬莉芳

腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是機(jī)體內(nèi)重要的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng), Ang-Ⅱ作為該系統(tǒng)重要的效應(yīng)分子, 其與兩個(gè)受體分子血管緊張素Ⅰ型(AT1R)受體和2型受體(AT2R)相互作用產(chǎn)生生物學(xué)作用［1］。研究發(fā)現(xiàn)Ang-Ⅱ能促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞生長［2］。相關(guān)研究表明, RAS與腫瘤有密切關(guān)系, 在乳腺癌、胰腺癌等腫瘤中均存在ATIR過表達(dá), 而ATIR拮抗劑治療能抑制腫瘤的生長［3］；AL患者的骨髓伴著血管新生情況,這預(yù)示著AL患者具體發(fā)病過程中血管新生充當(dāng)重要角色,且作用不容小覷, 其會(huì)受到很多種類細(xì)胞因子所調(diào)控、影響,其中Ang-Ⅱ、受體Tie-2都會(huì)對(duì)新生的腫瘤血管起到調(diào)節(jié)作用, 比如穩(wěn)定、成熟、重建。本研究將證實(shí)Ang-Ⅱ在AL患者中的表達(dá)及重要意義, 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2015年1月～2017年12月收治的60例AL患者作為觀察組, 包括30例AML初發(fā)未治患者和30例ALL初發(fā)未治患者；另選取同期60例缺鐵性貧血患者作為對(duì)照組。觀察組患者男37例, 女23例, 年齡最大72歲, 最小6歲,中位年齡36歲；所有患者均得到臨床特點(diǎn)與形態(tài)學(xué)和細(xì)胞化學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)證實(shí), 骨髓液中病理細(xì)胞≥80%, 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照AML WHO分型(2001)/FAB分類法和WHO對(duì)ALL分型的修訂(2001), 且均排除合并心、肝、腎功能異常者, 感染、其他惡性腫瘤、自身免疫性疾病者。對(duì)照組患者男28例, 女32例, 年齡最大 50歲, 最小年齡18歲, 中位年齡35歲；排除腫瘤、肝腎疾病、免疫系統(tǒng)疾病、糖尿病、心血管疾病、其他血液系統(tǒng)類的疾病。兩組患者性別、年齡等一般資料比較一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較(n,

表1 兩組患者一般資料比較(n,

注：兩組比較, P＞0.05；1mm Hg=0.133 kPa

項(xiàng)目 對(duì)照組(n=60) 觀察組(n=60)性別(男/女) 28/32 37/23年齡(歲) 35.30±7.01 36.63±6.87體重(kg) 67.02±8.85 66.38±10.60體質(zhì)量指數(shù)(kg/m2) 24.64±2.90 24.27±3.07收縮壓(mm Hg) 127.58±7.93 128.63±8.37舒張壓(mm Hg) 80.32±4.90 81.16±6.64身高(m) 1.65±0.07 1.65±0.08

1.2 方法 采用ELISA測定兩組患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量。選取髂后上棘為穿刺點(diǎn), 抽吸0.2、4 ml骨髓液2管,0.2 ml用于制片7張, 送檢細(xì)胞形態(tài)學(xué)及細(xì)胞化學(xué)染色檢查, 4 ml用5%乙二胺四乙酸(EDTA)干粉管抗凝, 室溫靜置30 min, 2000 r/min離心10 min分離骨髓液和細(xì)胞, 骨髓液用ELISA(試劑盒購自美國R＆D System公司)檢測骨髓液Ang-Ⅱ含量情況, 一定要嚴(yán)格依據(jù)試劑盒上的說明書正確規(guī)范的操作, 對(duì)450 nm吸光度(A)數(shù)值科學(xué)的測定, 同時(shí)依據(jù)ELISA實(shí)驗(yàn)最后得出的標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)A值以及濃度, 選擇“CurveExpert 1.3”實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的規(guī)整繪制, 最后依照血清樣本所得OD值依次將Ang-Ⅱ具體濃度計(jì)算出來。所有AL患者均采用國家標(biāo)準(zhǔn)方案化療進(jìn)行治療。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量。觀察AL患者的治療效果, 參考文獻(xiàn)［4］分為緩解、未緩解及死亡。比較化療后緩解患者和化療后未緩解患者的Ang-Ⅱ含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SBPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較 AML初發(fā)未治患者骨髓中Ang-Ⅱ含量(24.70±5.02)ng/ml明顯高于ALL初發(fā)未治患者的(15.34±3.26)ng/ml及缺鐵性貧血患者的(6.54±3.54)ng/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；ALL初發(fā)未治患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量(15.34±3.26)ng/ml明顯高于缺鐵性貧血患者的(6.54±3.54)ng/ml, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (p＜0.01)。見表 2。

表2 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較(, ng/ml)

表2 AML初發(fā)未治患者、ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較(, ng/ml)

注：與AML初發(fā)未治患者比較, ap＜0.01；與ALL初發(fā)未治患者比較, bp＜0.01

類型 例數(shù) Ang-ⅡAML初發(fā)未治患者 30 24.70±5.02 ALL初發(fā)未治患者 30 15.34±3.26a缺鐵性貧血患者 60 6.54±3.54ab

2.2 AL患者的治療效果及化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較 AL患者中化療后緩解患者44例, 化療后未緩解患者10例, 早期因感染、出血等原因死亡患者6例?；熀缶徑饣颊吖撬枰褐蠥ng-Ⅱ含量(11.70±5.02)ng/ml低于化療后未緩解患者的(28.30±3.12)ng/ml, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。見表3。

表3 化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較( ng/ml)

表3 化療后緩解患者和化療后未緩解患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量比較( ng/ml)

注：與化療后未緩解患者比較, ap＜0.01

類型 例數(shù) Ang-Ⅱ化療后緩解患者 44 11.70±5.02a化療后未緩解患者 10 28.30±3.12

3 討論

血管新生指的是基于原有血管能夠有序且高度形成新血管的一個(gè)過程。多次進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)：如果白血病患者的骨髓微血管在密度上呈現(xiàn)出增加情況, 說明白血病的產(chǎn)生是和血管出現(xiàn)新生有直接關(guān)系, 其會(huì)受到很多種細(xì)胞因子控制與調(diào)節(jié), Ang-Ⅱ通過與特異的Ang-Ⅱ受體結(jié)合, 在腫瘤血管新生中具有調(diào)節(jié)血管穩(wěn)定、成熟和重建的作用。研究證實(shí)［4］,Ang-Ⅱ受體1型表達(dá)于大鼠骨髓基質(zhì)的CD34+以及造血系統(tǒng)中時(shí), Ang-Ⅱ是能夠經(jīng)對(duì)CD34+細(xì)胞表面上的AT1R進(jìn)行激活方式, 對(duì)造血干細(xì)胞到達(dá)紅系祖細(xì)胞、髓系祖細(xì)胞進(jìn)行增殖乃至分化過程達(dá)到調(diào)節(jié)目的。Hou等［5］研究過程中發(fā)現(xiàn)Ang-Ⅱ在AL骨髓單個(gè)核細(xì)胞表面呈現(xiàn)出高表達(dá)情況。Loges［6］用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法檢測了90例AML初發(fā)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的Ang-ⅡmRNA表達(dá)水平, 發(fā)現(xiàn)高表達(dá)Ang-ⅡmRNA組預(yù)后好；Schliemann等［7］進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn), 初期治療的AML患者呈現(xiàn)血清高表達(dá)Ang-Ⅱ情況, 且存在很短的生存期以及預(yù)后差不足, 屬于AML產(chǎn)生的獨(dú)立因素、影響預(yù)后結(jié)局；Lee等［8］選擇ELISA測定方法, 針對(duì)AML患者(n=52)在化療前的骨髓水平、血管生成臨床有關(guān)分子給予檢測, 最終結(jié)果呈現(xiàn)出Ang-Ⅱ、Tie-2水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出正常群體的對(duì)照組水平。本研究結(jié)果顯示, AML初發(fā)未治患者骨髓中Ang-Ⅱ含量明顯高于ALL初發(fā)未治患者及缺鐵性貧血患者, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；ALL初發(fā)未治患者骨髓液中Ang-Ⅱ含量明顯高于缺鐵性貧血患者, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。AL患者化療后緩解患者44例, 化療后未緩解患者10例, 早期因感染、出血等原因死亡患者6例?；熀缶徑饣颊吖撬枰褐蠥ng-Ⅱ含量低于化療后未緩解患者, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。

綜上所述, Ang-Ⅱ是最近幾年才發(fā)現(xiàn)對(duì)血管增生擁有調(diào)節(jié)作用效果, 和白血病細(xì)胞增殖生長、血管生成都存在密切重要聯(lián)系, 其中血清Ang水平能夠反饋出體內(nèi)白血病細(xì)胞實(shí)際總負(fù)荷情況以及病情狀態(tài)等。由于深入研究Ang/Tie基因、有關(guān)蛋白等, 很有可能運(yùn)用基因調(diào)控、特異性抗體等作用于Ang乃至受體來實(shí)現(xiàn), Ang-Ⅱ可能成為診斷及治療白血病的新觀察指標(biāo)。