赫偉麗 苑曉晨 趙 帆 徐光福 張愛(ài)軍

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院,北京,100700; 2 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院&北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院微循環(huán)研究所,北京,100005)

2010年乙肝報(bào)告發(fā)病率顯著下降,其后在2013年再次明顯下降[1],說(shuō)明隨著我國(guó)的乙肝防治工作加強(qiáng),整體發(fā)病例數(shù)在降低。但根據(jù)2006年全國(guó)乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查推算,我國(guó)仍有慢性HBV感染者約9 300萬(wàn)人[2]。我國(guó)肝硬化患者中,由HBV感染引起的比例為60%[3]。而乙肝病毒相關(guān)肝硬化患者的中位生存期為10～12年。一旦進(jìn)展為失代償,患者常出現(xiàn)因門(mén)靜脈高壓導(dǎo)致的食管胃底靜脈曲張破裂出血、腹水、脾功能亢進(jìn)、肝性腦病、肝腎綜合征等并發(fā)癥,死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。代償期和失代償期肝硬化患者的5年生存率分別為84%和14%[4]。對(duì)于乙肝肝硬化患者,抗病毒治療不能徹底清除病毒[5-6],病毒復(fù)制只是誘因,與肝硬化不是直接的因果關(guān)系。有的患者已經(jīng)抗病毒數(shù)年但病情仍在進(jìn)展,加之患者體質(zhì)各有差異,即使DNA復(fù)制陰性者仍可發(fā)展至失代償期。所以,抗病毒藥物的問(wèn)世及使用,雖然取得了巨大的進(jìn)步,穩(wěn)定了患者的病情,使之發(fā)展進(jìn)程變慢了,但對(duì)部分患者來(lái)說(shuō),仍然未能徹底改變其門(mén)脈高壓癥及并發(fā)癥發(fā)生的結(jié)局。因此,如何控制肝硬化的發(fā)展,改善生命質(zhì)量,延長(zhǎng)壽命仍是目前亟待解決的世界性難題。國(guó)內(nèi)外基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),只要條件合適,肝硬化完全可以逆轉(zhuǎn)[7-10]。近年來(lái),大批國(guó)內(nèi)學(xué)者及機(jī)構(gòu)致力于中醫(yī)藥防治乙肝肝硬化的工作,并取得了一定進(jìn)展,但因其具體作用機(jī)制未明,目前仍難以被大多數(shù)專家學(xué)者所接受,已成為中醫(yī)藥國(guó)際化發(fā)展的瓶頸。因此,如何將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的最新研究技術(shù)與傳統(tǒng)中醫(yī)理論相結(jié)合,實(shí)現(xiàn)中醫(yī)辨證的客觀化和科學(xué)化仍然是我們面臨的主要課題。

本研究的“益氣解毒通絡(luò)顆?！笔俏以盒旃飧＝淌诮Y(jié)合多年的臨床實(shí)踐創(chuàng)立的,從以往的臨床研究中已證實(shí)其在治療乙肝肝硬化中,具有減輕癥狀、體征,降酶、改善肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)及肝臟超聲等作用[11]。本研究是在益氣解毒通絡(luò)方使用前后,觀察患者血液中表達(dá)的促血管生成的關(guān)鍵因子VEGF和PDGF-AB的動(dòng)態(tài)變化,以幫助我們進(jìn)一步揭示中醫(yī)藥療效的本質(zhì),探討益氣解毒通絡(luò)方治療乙肝肝硬化好轉(zhuǎn)的分子機(jī)制,完善該方治療乙肝肝硬化的理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6月至2017年10月采用簡(jiǎn)單隨機(jī)化分組方法,隨機(jī)選擇符合入排標(biāo)準(zhǔn)的,在北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院體檢中心體檢健康者15例,肝炎門(mén)診就診的乙肝肝硬化患者50例,其中脫落8例,有效病例42例,乙肝肝硬化患者均已規(guī)范使用抗病毒藥恩替卡韋分散片治療3個(gè)月以上,且HBV-DNA在檢測(cè)下限內(nèi)。在經(jīng)過(guò)一系列檢查項(xiàng)目后,符合研究標(biāo)準(zhǔn)的健康者及患者簽署知情同意,均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)(倫理審批號(hào):ECPJ-BDY-2015-27)。然后對(duì)健康者及患者進(jìn)行血樣采集。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化系統(tǒng)疾病專業(yè)委員會(huì)第五屆學(xué)術(shù)交流會(huì)(1993.11)制定的《肝硬化臨床診斷、中醫(yī)辨證和療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》,經(jīng)整理擬定診斷標(biāo)準(zhǔn)如下:主癥:肝病面容;脅肋刺痛;脅下痞塊;舌質(zhì)暗紅或紫暗或紅,舌體胖大,邊有齒痕,舌苔薄黃或黃或黃膩;脈弦細(xì)數(shù)或弦滑數(shù),或脈小、沉、弱。次癥:脘腹脹滿;納差;神疲乏力;赤絲紅縷;肝掌;腹部脹大;腹壁青筋暴露;吐血或便血。

1.2.1.1 辨病要求 1)具備主癥中三項(xiàng)者,即屬本病;2)具備主癥二項(xiàng)及次癥二項(xiàng)以上者,即屬本病。

1.2.1.2 辨證標(biāo)準(zhǔn) 毒損肝絡(luò),氣虛絡(luò)閉型:肝病面容,脅肋刺痛,脅下痞塊,脘腹脹滿,納差,神疲乏力;肝掌,赤絲紅縷,腹部脹大,腹壁青筋暴露,舌質(zhì)暗紅或紫暗或紅,或見(jiàn)瘀斑,舌下脈絡(luò)迂曲,舌體胖大,邊有齒痕,舌苔薄黃或黃或黃膩,脈弦、細(xì)、滑或數(shù),或數(shù)脈并見(jiàn),沉取無(wú)力。

1.2.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)西安會(huì)議(2000.9)聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局制定的《中藥新藥治療病毒性肝炎的臨床研究指導(dǎo)原則》(2002.5,第1版)、梁擴(kuò)寰等主編的《肝臟病學(xué)》(2006.1,第2版)以及中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病分會(huì)發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》(2010.12),經(jīng)整理擬定診斷標(biāo)準(zhǔn)如下:1)癥狀:既往具有慢性病毒性乙型肝炎病史,或急性乙型肝炎病程遷延史超過(guò)半年,目前有較明顯癥狀如神疲乏力,飲食減少、腹脹、右上腹部疼痛、上消化道出血史等;2)體征:可有肝病面容、肝脾捫痛,可有肝脾腫大,腹水癥或腹部移動(dòng)性濁音,腹壁與臍周靜脈曲張,可有肝掌,蜘蛛痣等;3)肝功能:可有血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高,或谷草轉(zhuǎn)氨酶升高,血清白蛋白降低,白球蛋白比值異常,或血清總膽紅素升高;4)乙肝表面抗原陽(yáng)性,乙肝e抗原或e抗體陽(yáng)性,乙肝核心抗體陽(yáng)性;5)超聲檢查:超聲提示肝表面包膜欠光滑、凹凸不平或呈鋸齒狀,肝內(nèi)回聲明顯增多增強(qiáng),可見(jiàn)斑片狀、網(wǎng)狀、索狀或結(jié)節(jié)狀的強(qiáng)回聲光團(tuán),門(mén)靜脈主干內(nèi)徑>1.4 cm、脾靜脈>1.0 cm;6)CT檢查:少數(shù)肝硬化表現(xiàn)為全肝萎縮;更多的表現(xiàn)為尾葉、左葉外側(cè)段增大,右葉發(fā)生萎縮,部分也表現(xiàn)右葉增大,左葉萎縮或尾葉萎縮,結(jié)果出現(xiàn)肝各葉大小比例失調(diào)。肝輪廓邊緣顯示凹凸不平,肝門(mén)、肝裂增寬以及脾大、腹水、胃底和食管靜脈曲張等門(mén)脈高壓征象;7)病理診斷:炎性反應(yīng)活動(dòng)度、纖維化程度符合S4G4者。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 健康對(duì)照組:1)同期健康體檢者15例;2)年齡30～70歲;3)來(lái)自于本院體檢中心,既往無(wú)疾病史的健康者;4)被充分告知此次研究的研究性質(zhì)、研究目的、研究可能帶來(lái)的利益及傷害后主動(dòng)愿意參與本實(shí)驗(yàn)研究并簽署知情同意書(shū)。乙肝肝硬化患者:任何一名參加本次研究的患者需滿足以下全部入選標(biāo)準(zhǔn):1)患者被充分告知此次研究的研究性質(zhì)、研究目的、研究可能帶來(lái)的利益及傷害后主動(dòng)愿意參與本實(shí)驗(yàn)研究并簽署知情同意書(shū);2)年齡30～70歲,患者需要滿足方案當(dāng)中的中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn),被研究醫(yī)生明確診斷為乙肝誘導(dǎo)的肝硬化,乙肝肝硬化患者均已規(guī)范使用抗病毒藥恩替卡韋分散片治療3個(gè)月以上,且HBV-DNA在檢測(cè)下限內(nèi);3)所有病史可以被記載和追溯的;4)近6個(gè)月來(lái)未接受過(guò)中醫(yī)藥治療。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)患者不能夠在診斷依據(jù)內(nèi)被明確判斷為乙肝誘導(dǎo)肝硬化的;2)合并有心腦血管、肺、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病或腫瘤及精神異?；颊?由其他疾病用藥后出現(xiàn)不良影響的患者,如正使用激素治療的患者;3)年齡在30歲以下或70歲以上者,妊娠或哺乳期婦女,過(guò)敏體質(zhì)及對(duì)本藥過(guò)敏;4)患者有致命的癥狀且難以完成實(shí)驗(yàn)要求(如抽血等)的;5)患者伴有糖尿病、慢性腎臟疾病、心腦血管病、眼底病變等微血管損害的疾病及自身免疫系統(tǒng)疾病;6)患者存在藥物濫用史。

1.5 脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 病例脫落標(biāo)準(zhǔn) 符合納入標(biāo)準(zhǔn)而因某種原因未完成研究的病例,當(dāng)屬脫落病例。包括受試者自行退出和醫(yī)生認(rèn)定受試者退出的病例。1)受試者依從性差。2)發(fā)生嚴(yán)重不良事件、并發(fā)癥和特殊生理變化不宜繼續(xù)接受研究的病例。試驗(yàn)期間,患者一旦出現(xiàn)急性食管-胃底靜脈曲張出血、頑固性腹水、感染等情況,及早合理采取曲張靜脈套扎術(shù)、硬化劑注射等方法止血、控制腹水、抗感染等有效治療措施,待病情穩(wěn)定以后,可繼續(xù)相關(guān)中醫(yī)藥治療,但本病例血樣按脫落處理。本試驗(yàn)方案能確實(shí)保障患者的安全、健康和權(quán)益受到保護(hù),符合倫理學(xué)要求,亦符合試驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性要求。3)受試者自行退出的病例。4)未按研究方案規(guī)定用藥的病例。

1.5.2 病例剔除標(biāo)準(zhǔn) 不符合納入標(biāo)準(zhǔn)而被誤納入的病例和雖符合納入標(biāo)準(zhǔn)而納入后未曾服藥的病例,需予剔除。

1.6 治療方法 入組患者均已規(guī)范使用抗病毒藥恩替卡韋分散片治療3個(gè)月以上,在繼續(xù)抗病毒藥物治療的前提下,予益氣解毒通絡(luò)顆粒劑(主要由生黃芪、茯苓、陳皮、制香附、苦參、土茯苓、三棱、莪術(shù)、三七、鱉甲等藥物組成,由北京康仁堂藥業(yè)有限公司提供相應(yīng)藥物的免煎顆粒劑，北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院草藥房制備)治療，1包/次，2次/d，開(kāi)水沖服；連續(xù)用藥治療6個(gè)月。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 血樣采集方法 分別采健康者,乙肝肝硬化患者用中藥干預(yù)前、用中藥連續(xù)干預(yù)6個(gè)月后的清晨空腹靜脈血3 mL,靜置30 min后,3 000 r/min離心,10 min分離血清,分裝于Eppendorf管中密封,置-70 ℃保存待用。待標(biāo)本集中后采用酶聯(lián)免疫吸附法成批檢測(cè)VEGF、PDGF-AB含量,避免反復(fù)凍融。

1.7.2 主要儀器 Varioskan Flash多功能酶標(biāo)儀:美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

1.7.3 主要規(guī)格及技術(shù)指標(biāo) 1)板型:熒光、時(shí)間分辨熒光和化學(xué)發(fā)光:6-1536孔板;光吸收:6-384孔板。2)熒光測(cè)量:激發(fā)光波長(zhǎng):200～1 000 nm;發(fā)射光波長(zhǎng):270～840 nm,檢測(cè)靈敏度:<0.4 fmolATP/孔,動(dòng)態(tài)范圍>6個(gè)數(shù)量級(jí)。3)化學(xué)發(fā)光波長(zhǎng)范圍:360～670 nm;掃描波長(zhǎng)范圍:270～840 nm;檢測(cè)靈敏度:<7 amolATP/孔,動(dòng)態(tài)范圍>7個(gè)數(shù)量級(jí)。4)光吸收檢測(cè):波長(zhǎng)范圍:200～1 000 nm;線性測(cè)量:0～4 Abs,(96孔板)at 450 nm,<±2%。

1.7.4 檢測(cè)步驟 1)加樣:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣本孔、空白孔。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔7孔,依次加入100 μL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,空白孔加100 μL稀釋液,余孔加待測(cè)樣本100 μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37 ℃溫育2 h。2)棄去液體,甩干,不用洗滌。3)每孔加檢測(cè)溶液A工作液100 μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37 ℃溫育1 h。4)棄去孔內(nèi)液體,每孔加350 μL洗滌液洗滌,浸泡2 min,甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在試驗(yàn)臺(tái)上鋪幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍打,重復(fù)洗板3次,最后一次洗滌后,要把孔內(nèi)的洗滌液完全甩干。5)每孔加檢測(cè)溶液B工作液100 μL,加上覆膜,37 ℃溫育30 min。6)棄去孔內(nèi)溶液,甩干,洗板5次,方法同步驟4。7)每孔加底物溶液90 μL,加上覆膜,37 ℃避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在25 min內(nèi))。8)每孔加終止溶液50 μL,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色變黃色,終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。如出現(xiàn)顏色不均一,輕晃酶標(biāo)板使溶液混合均勻。9)在確保酶標(biāo)板底無(wú)水滴及孔內(nèi)無(wú)氣泡后,立即用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

1.8 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)乙肝肝硬化患者治療前后癥狀積分、體征積分、超聲積分及肝功能數(shù)值的變化檢驗(yàn)臨床療效;檢測(cè)得出的乙肝肝硬化患者治療前與治療后的血清VEGF和PDGF-AB的濃度與健康者的濃度水平比較,乙肝肝硬化患者治療后的值接近或向健康者的血清濃度值靠攏,說(shuō)明治療有效。

1.9 不良反應(yīng)評(píng)定 一旦發(fā)現(xiàn)患者出現(xiàn)皮疹、發(fā)熱、肝損傷進(jìn)行性加重、腎功能異常、尿常規(guī)異常等情況視為不良反應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 VEGF和PDGF-AB檢測(cè)

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D(A=5.852 71,B=-1.202 28,C=625.650 41,D=0.091 78,r2=0.999 92),說(shuō)明:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度稀釋后,不同濃度下吸光度值計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。見(jiàn)圖1。公式是y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,然后真實(shí)樣本檢測(cè)吸光度后,套公式就可以計(jì)算出樣本中該蛋白質(zhì)的濃度。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.1.2 VEGF檢測(cè)結(jié)果 乙肝肝硬化患者血清VEGF水平治療前較健康者輕度升高,治療后較治療前及健康者均有所下降,但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖2 VEGF濃度比較

2.1.3 PDGF-AB檢測(cè)結(jié)果 乙肝肝硬化患者血清PDGF-AB水平治療前較健康者顯著降低(P<0.001);治療后較治療前有所升高(P<0.05),但仍低于健康者(P<0.05)。見(jiàn)圖3。

圖3 PDGF-AB濃度比較

注：*表示P<0.05;***表示P<0.001

2.2 治療前后臨床療效比較 通過(guò)對(duì)42例有效病例臨床療效經(jīng)分析可知:各項(xiàng)癥狀指標(biāo)積分在治療前后,經(jīng)t檢驗(yàn)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),說(shuō)明益氣解毒通絡(luò)顆?？梢愿纳埔腋胃斡不颊叩呐R床癥狀。見(jiàn)表1。各項(xiàng)體征指標(biāo)積分在治療前后,經(jīng)t檢驗(yàn)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),說(shuō)明益氣解毒通絡(luò)顆粒在改善乙肝肝硬化患者的體征方面有效。見(jiàn)表2。治療前后在肝臟超聲積分結(jié)果方面,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明經(jīng)過(guò)6個(gè)月的治療,肝臟形態(tài)未見(jiàn)顯著改善;谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白數(shù)值在治療前后,經(jīng)t檢驗(yàn)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0010),說(shuō)明益氣解毒通絡(luò)顆粒在改善肝功能方面有效;A/G值經(jīng)t檢驗(yàn)分析,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說(shuō)明益氣解毒通絡(luò)顆粒在短期內(nèi)很難改善肝臟形態(tài)。見(jiàn)表3。

2.3 病例剔除和脫落情況 肝炎門(mén)診就診的乙肝肝硬化患者50例,所有病例經(jīng)審核均符合納入標(biāo)準(zhǔn)無(wú)剔除病例;其中8例脫落,有效病例42例。脫落原因:受試者依從性差,未規(guī)律服藥2例;受試者于試驗(yàn)期間,出現(xiàn)急性食管-胃底靜脈曲張出血2例;出現(xiàn)頑固性腹水1例;因進(jìn)食不潔飲食出現(xiàn)胃腸道感染1例;受試者自行退出試驗(yàn)2例。

2.4 不良反應(yīng)觀察 入組病例患者在試驗(yàn)期間均未出現(xiàn)皮疹、發(fā)熱、肝損傷進(jìn)行性加重、腎功能異常、尿常規(guī)異常等情況。

3 討論

針對(duì)乙肝肝硬化的病機(jī)變化,徐光福教授結(jié)合多年的臨床實(shí)踐,創(chuàng)立了“益氣解毒通絡(luò)方”,該方將益氣、解毒、通絡(luò)合理地組織起來(lái),有所側(cè)重,合理用藥,較大的起到了剝繭捋絲又工專力宏的效果。本研究結(jié)果表明,益氣解毒通絡(luò)顆粒在臨床上可以改善乙肝肝硬化患者的癥狀和體征,降低轉(zhuǎn)氨酶及升高白蛋白(P<0.001),但在改善肝臟形態(tài)方面,短期內(nèi)未見(jiàn)到明確的效果(超聲和A/G結(jié)果P>0.05)。

表1 治療前后癥狀指標(biāo)積分比較分)

表2 治療前后體征指標(biāo)積分比較分)

表3 治療前后肝臟超聲積分和肝功能結(jié)果比較

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)激活的一個(gè)主要的促血管生成因子。VEGF可誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá),降解毛細(xì)血管基底膜從而有利于內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和趨化;VEGF通過(guò)與其受體VEGFR-2結(jié)合,以蛋白激酶C途徑(不依賴于Ras)激活細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)通路促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[12]。VEGF是肝臟病理性血管生成的重要啟動(dòng)因子之一,抑制應(yīng)力纖維帶形成[13],在與血管外基質(zhì)降解和SEC形態(tài)學(xué)改變相關(guān)的血管生成早期階段發(fā)揮關(guān)鍵作用。而且J Siedlecki等的研究亦認(rèn)為長(zhǎng)期抑制VEGF的生成有助于減少親纖維性細(xì)胞的形成,有利于改善組織器官的纖維化進(jìn)展[13]。血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)由二硫鍵連接的同源二聚體或異源二聚體組成,其受體(PDGF-βR)屬受體酪氨酸激酶家族。PDGF受體結(jié)合配體后,胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域酪氨酸殘基自身磷酸化將信號(hào)傳入胞內(nèi),進(jìn)而激活下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)。PDGF是一有效的血管生成趨化因子,對(duì)周細(xì)胞募集有促進(jìn)作用。在肝臟血管生成中,SEC分泌的PDGF能夠誘導(dǎo)并募集表達(dá)其受體的肝星狀細(xì)胞至新生血管周?chē)?使其穩(wěn)定成熟從而轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂姓９δ艿难躘14]。PDGF是由A,B2種單體構(gòu)成的二聚體結(jié)構(gòu),可以形成PDGF-AA,PDGF-AB,PDGF-BB 3種形式,在人類(lèi)血小板來(lái)源的PDGF中,約85%～90%為AB型[15-16]。在對(duì)腫瘤患者癌細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)癌組織中VEGF和PDGF存在高表達(dá),可用于腫瘤的預(yù)后評(píng)估和療效的監(jiān)測(cè)[17];在對(duì)腫瘤的抗血管生成治療中發(fā)現(xiàn),單一抑制VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的長(zhǎng)期療效不佳,且易產(chǎn)生腫瘤耐藥,而在阻斷VGEF和促進(jìn)PDGF分泌后療效明顯改善[18-19]。因此以抑制病理性血管生成來(lái)抗肝硬化的有效治療也應(yīng)是多途徑和多靶標(biāo)的;血管生成對(duì)于肝組織的損傷恢復(fù)也是必需的,因此需要在拮抗病理性血管生成的同時(shí)應(yīng)能夠控制正常功能的血管再生程度,以延緩肝硬化的進(jìn)展甚至促進(jìn)肝臟形態(tài)的好轉(zhuǎn)。

而本研究中,肝臟病理性血管生成的重要啟動(dòng)因子之一的血清VEGF水平:乙肝肝硬化患者用中藥治療前較健康者輕度升高,治療后較治療前及健康者均有所下降,雖然組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但從濃度值來(lái)看益氣解毒通絡(luò)顆粒在抑制病理性血管生成方面有一定的作用;能夠誘導(dǎo)并募集表達(dá)其受體的肝星狀細(xì)胞至新生血管周?chē)?使其穩(wěn)定成熟從而轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂姓９δ苎艿难錚DGF-AB水平:乙肝肝硬化患者治療前較健康者顯著降低(P<0.001),雖然中藥干預(yù)后仍低于健康者(P<0.05),但中藥干預(yù)后較干預(yù)前有所升高(P<0.05),說(shuō)明益氣解毒通絡(luò)顆粒有促進(jìn)肝臟的正常功能血管生成的作用。

由上我們可以得出,益氣解毒通絡(luò)顆粒能夠治療乙肝肝硬化,其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制血清VEGF濃度和促進(jìn)PDGF-AB濃度的升高,從而在拮抗病理性血管生成的同時(shí),能夠控制正常功能的血管再生程度,以延緩肝硬化的進(jìn)展甚至促進(jìn)肝臟形態(tài)的好轉(zhuǎn),具體作用環(huán)節(jié)還需進(jìn)一步研究。目前在臨床中我們觀察中醫(yī)藥治療肝硬化的效果,只能通過(guò)肝穿刺和影像學(xué)的檢查來(lái)實(shí)現(xiàn),但是肝穿刺創(chuàng)傷性較大且單個(gè)肝組織活檢標(biāo)本不一定能全面反映肝臟整體纖維化程度,亦不便于門(mén)診應(yīng)用;而影像學(xué)的檢查在短期的治療時(shí)間段內(nèi)是看不出明顯變化的。如若能通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察肝星狀細(xì)胞表達(dá)的促血管生成的關(guān)鍵因子VEGF和PDGF的變化來(lái)客觀衡量肝硬化藥物治療的微觀效果,那么在臨床中會(huì)極大的提高患者治療的依從性,從而獲得較大的臨床收益。