李梅香，蔡麗萍

（南昌大學第一附屬醫(yī)院婦科，江西 南昌 330000）

在女性惡性腫瘤死亡疾病中，宮頸癌占第二位，目前宮頸癌是唯一一個機制明確，且可以預防的惡性腫瘤[1]。宮頸癌的癌前病變?yōu)閷m頸上皮內(nèi)病變（CIN），積極有效地治療宮頸上皮內(nèi)病變可降低宮頸癌的發(fā)病率。臨床上用于評估宮頸上皮內(nèi)病變癌變的常用分類方法為：低級別宮頸上皮內(nèi)病變（LSIL）以及高級別宮頸上皮內(nèi)病瘤變（HSIL）[2]。對于HPV感染不足以診斷 CIN以及CINⅠ級則為 LSIL，對于CINⅡ級及CINⅢ級則為HSIL。低級別宮頸上皮內(nèi)病變與高級別宮頸上皮內(nèi)病瘤變的治療及預后均具有顯著的差異性，有著不同的治療方式，因此，診斷明確對于治療具有重要意義[3]。病理醫(yī)師主觀因素易影響到CIN的分級，各分級間難以進行明確的區(qū)分，故診斷與治療的難度增加。為了提高不同病理醫(yī)師間診斷的可重復性，引進了多種生物化學標記物，其中P16、SOX-2已經(jīng)在臨床上廣泛應用[4]。當病理醫(yī)師用常規(guī)的HE染色不能明確診斷CIN時，則可以使用免疫組化法檢測P16、SOX-2以進行形態(tài)學的診斷。本研究通過觀察不同程度病變的宮頸組織中 P16、SOX-2陽性表達情況，探討P16、SOX-2在病變組織中表達的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 搜集2013年6月～2016年6月期間在本院經(jīng)病理活檢確診為宮頸上皮內(nèi)病變的病理組織標本80例，并搜集同期在本院經(jīng)病理活檢示宮頸組織正常的組織標本40例。將低級別宮頸上皮內(nèi)病變組織標本設為為低級別組（n=30），將高級別宮頸上皮內(nèi)病變組織標本設為高級別組（n=50），將宮頸組織正常標本設為正常組（n=40）。所有病理組織標本均經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師審核確定符合本研究的要求，且病例臨床資料完備，活檢前均未行任何放化療或中藥等抗腫瘤治療。

1.2 免疫組化染色檢查 參照免疫組化染色質量控制要求嚴格執(zhí)行操作程序。P16抗體、SOX-2抗體、濃縮型DAB試劑盒均來自于北京中杉金橋生物技術有限公司；其中P16抗體的克隆號為：3G5D5；SOX-2抗體的克隆號為：EP103；濃縮型DAB試劑盒的產(chǎn)品編號為：ZLI-9017。

1.3 結果判定 P16陽性：細胞漿呈棕黃色，SOX-2陽性：細胞核呈棕黃色。綜合陽性率與染色強度進行評分：①陽性率評分：每張組織切片上觀察5個高倍視野（×200），平均每高倍視野陽性細胞數(shù)占觀察總細胞數(shù)的百分比；0分：陽性率＜5%；1分：陽性率在5%～25%；2分：陽性率在26%～50%；3分：陽性率在51%～75%；4分：陽性率在76%～100%。②染色強度評分：0分：無色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。最終陽性率評分與染色強度評分的得分相乘，若為0分，則為陰性（-）；若為1～4分，則為弱陽性（+）；若為5～12分，則為陽性（++）。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

正常組織中SOX-2、P16表達的陽性率均為0.00%，宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中SOX-2、P16表達的陽性率分別為55%（44/80）、67.5%（54/80），,見表1。低級別組內(nèi)SOX-2的陽性表達率為13.33%（4/30），陰性（-）表達有26例，弱陽性（+）表達有3例，陽性（++）表達有1例；P16的陽性表達率為23.33%（7/30），陰性（-）表達有23例，弱陽性（+）表達有3例，陽性（++）表達有4例；高級別組內(nèi)SOX-2的陽性表達率為80%（40/50），陰性（-）表達有10例，弱陽性（+）表達有13例，陽性（++）表達有27例；P16的陽性表達率為94%（47/50），陰性（-）表達有3例，弱陽性（+）表達有15例，陽性（++）表達有32例；組間的P16、SOX-2陽性表達率均有明顯的差異性，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 SOX-2、P16在正常組織與宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達Table 1 Sox-2 and P16 expression in normal tissue and cervical epithelial neoplasia

表2 SOX-2、P16在不同級別宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達Table 2 Sox-2 and P16 expression in different levels of cervical epithelial neoplasia

3 討論

宮頸癌是一種常見的女性惡性腫瘤，而宮頸上皮內(nèi)病變是其癌前病變。明確的CIN分級診斷可以為宮頸上皮內(nèi)病變提供有效的治療方法，從而降低宮頸癌的發(fā)病率[5]。目前臨床上病理活檢為診斷CIN的金標準。宮頸組織標本通常采用HE染色診斷，而有一部分標本通過HE染色難以明確診斷，其受病理醫(yī)師主觀因素的影響較大[6]。有相關研究結果顯示，不同病理醫(yī)師對CINⅠ級診斷的一致性僅為64%，CINⅡ級診斷的一致性低于50%[7]。宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷還會受到其它因素的影響。若標本采集時組織標本切片過厚，則CINⅠ級可能被診斷為CINⅡ級；若標本采集時組織標本切片過薄，則CINⅢ級可能被診斷為 CINⅡ級[8]。鱗狀上皮萎縮、慢性炎癥、特殊治療、不成熟鱗狀上皮化生等均有可能導致出現(xiàn)類似CIN病灶，從而會影響到宮頸上皮內(nèi)病變的治療。若治療過度會對組織造成不必要的損傷，若治療不足會使病灶殘留。因此，為了提高宮頸上皮內(nèi)病變病理診斷的可重復性及一致性，學術界提倡采用特異性強的生化指標來輔助診斷，如P16、SOX-2等。

在宮頸癌的發(fā)生過程中，HPV發(fā)揮著重要的作用，其中最常見的高危亞型為HPV16/18。HPV16/18在子宮頸鱗狀細胞癌中的檢出率較高，盡管目前還沒有HPV感染導致宮頸癌發(fā)病的確切證據(jù)，但已有大量證據(jù)顯示，HPV感染是宮頸癌十分常見的伴隨現(xiàn)象[9]。P16蛋白是一種重要的HPV轉染子宮頸細胞分子標志物，其聚集于宮頸細胞內(nèi)，因此可以采用免疫組化染色方法進行清晰地觀察。在宮頸細胞發(fā)生癌變的過程中，可通過觀察P16蛋白在細胞內(nèi)的表達情況而得到HPV轉染細胞的直接證據(jù)。當CIN伴有慢性宮頸感染時，通過形態(tài)學的觀察難以進行分級的判斷，特別是樣本較小，比較局限時，其重復性較差[10]。有無HPV感染可通過HPV16/18型原位雜交結果證實，但難以評價CIN的分級。在本研究結果中，正常宮頸組織的P16表達均為陰性，對于宮頸上皮內(nèi)病變組織，隨著病變嚴重程度的增加，P16的陽性表達率也明顯增加。因此，P16在宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷中具有重要意義，可以將其作為診斷及判斷其病變嚴重程度的客觀指標。

SOX-2是一種重要的轉錄因子，在DNA的損傷修復、腫瘤干細胞自我更新、細胞周期調(diào)節(jié)方面均有著不可替代的作用[11]。有相關文獻研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤干細胞的自我更新相關、宮頸癌的發(fā)生、宮頸癌細胞株的浸潤轉移均與SOX-2的表達密切相關[12]。在本研究結果中，正常宮頸組織的SOX-2表達均為陰性，對于宮頸上皮內(nèi)病變組織，隨著病變嚴重程度的增加，SOX-2的陽性表達率也明顯增加，在高級宮頸上皮內(nèi)病變組織中，SOX-2陽性表達率高達100%。該結果說明在宮頸上皮內(nèi)病變的發(fā)生發(fā)展過程中均有SOX-2的參與，其陽性表達率與宮頸上皮內(nèi)病變的嚴重程度密切相關，病變越嚴重，陽性率越高。SOX-2具有調(diào)控細胞的作用，其陽性表達率可能與宮頸細胞的分化程度有關，陽性表達率的升高表示宮頸上皮內(nèi)病變的病情在進展。

綜上所述，在宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷中，如果將HE染色的形態(tài)學觀察結合P16、SOX-2的免疫組化法檢測，則能得到更加客觀的診斷，且P16與SOX-2的聯(lián)合檢測能客觀反映出宮頸上皮內(nèi)病變的病變程度，提高病理診斷的精確性。