陳春秀， 尚曉迪， 馬 超， 戴媛媛， 賈 磊， 白東清

(1.天津渤海水產(chǎn)研究所，天津 300457； 2.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院/天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384)

半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)屬于鰈形目舌鰨科舌鰨屬，俗稱龍利、鰨米、牛舌頭，為我國(guó)近海常見的暖溫性大型底層魚類，主要分布于渤海、黃海水域[1]。半滑舌鰨生長(zhǎng)速度快，肉質(zhì)細(xì)膩，味道鮮美，是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高且有一定養(yǎng)殖推廣前景的名貴海水魚類[2]。

硒是動(dòng)物體必需的微量元素之一，具有抗氧化、提高免疫力、促生長(zhǎng)和提高肉質(zhì)等功能[3]。硒在最佳濃度和致毒濃度之間的安全限度非常狹窄，因此開發(fā)低毒、高效的硒源一直是硒營(yíng)養(yǎng)研究的重點(diǎn)。納米硒是一種利用納米技術(shù)制備而成的新型研制品，以蛋白質(zhì)為核、紅色元素硒為膜和以蛋白質(zhì)為分散劑的納米級(jí)別的無(wú)機(jī)單質(zhì)硒，粒徑一般在80 nm以內(nèi)[4]。它具有安全濃度寬、吸收效率高、生物活性強(qiáng)、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)，在動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)中的使用前景十分廣闊。目前研究表明，在飼料中添加納米硒對(duì)尼羅羅非魚[5]、鯉魚[6]、草魚[7]、團(tuán)頭魴[8]、異育銀鯽[9]、青鳉[10]和中華絨螯蟹[11]等具有促進(jìn)生長(zhǎng)、降低餌料系數(shù)、提高蛋白質(zhì)合成效率、提高硒在體內(nèi)的沉積率、增強(qiáng)免疫力等作用。納米硒在海水魚中應(yīng)用還未見報(bào)道，基于此，本試驗(yàn)在飼料中添加納米硒，探討其對(duì)促進(jìn)半滑舌鰨生長(zhǎng)、體成分組成和硒含量等方面的作用，以期探討出納米硒在半滑舌鰨飼料中適宜的添加量，為配制半滑舌鰨用預(yù)混料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)飼料 飼料原料采購(gòu)及加工均在天津市天祥水產(chǎn)有限責(zé)任公司進(jìn)行。原料經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后，過(guò)60目篩，混勻加水，用江蘇牧羊集團(tuán)牧羊MUZLM V4型飼料制粒機(jī)加工成粒徑為2 mm的沉性顆粒飼料，室溫下于通風(fēng)處晾干2 h，保存于-20 ℃冰箱中待用。

基礎(chǔ)飼料配方為魚粉60%、血漿蛋白4%、豆粕11%、魚油1.5%、豆油1.5%、淀粉13%、酵母3%、蝦粉2%、黏合劑1%、維生素預(yù)混料1%、礦物質(zhì)預(yù)混料2%。飼料常規(guī)成分含量為粗蛋白55.99%、粗脂肪7.32%、水分7.23%、粗灰分14.43%。

礦物質(zhì)預(yù)混料為Ca(H2PO4)·H2O 14 673.37 mg/kg、ZnSO4·7H2O 65.97 mg/kg、CuSO4·5H2O 10.61 mg/kg、FeSO4·7H2O 109.54 mg/kg、KI 32.7 mg/kg、CoCl2·6H2O 0.2 mg/kg、MnSO4·H2O 24.61 mg/kg。

維生素預(yù)混料為維生素A 2 400 IU/kg、維生素C 2 700 IU/kg、維生素D 6 600 IU/kg、維生素E 675 IU/kg、維生素B255 mg/kg、維生素B615 mg/kg、維生素B14 mg/kg、維生素K 3 mg/kg、葉酸25 mg/kg、DL-泛酸鈣60 mg/kg、煙酸 220 mg/kg、維生素B120.27 mg/kg、肌醇1 000 mg/kg、生物素 13.5 mg/kg、膽堿10 g/kg。

納米硒由廣州博士奧集團(tuán)提供，純度為0.5%。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、0.4、0.8、1.6、2.0、2.4 mg/kg的納米硒，從而配制出6種試驗(yàn)飼料(基礎(chǔ)飼料組不添加納米硒)。試驗(yàn)飼料中硒的總含量分別為1.38、1.67、2.09、3.56、4.23、4.62 mg/kg。

1.1.2 試驗(yàn)魚 360尾半滑舌鰨購(gòu)自天津市海發(fā)珍品實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司，體質(zhì)健壯，規(guī)格整齊，平均體質(zhì)量為(120.45±0.45) g。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)魚分組及管理 將試驗(yàn)魚隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾。用基礎(chǔ)飼料馴飼5 d，待試驗(yàn)魚能較好地?cái)z食后，正式進(jìn)行試驗(yàn)。飼養(yǎng)于天津渤海水產(chǎn)研究所品字形控溫可循環(huán)系統(tǒng)中，試驗(yàn)期間水溫為(20±0.5) ℃，鹽度2%，溶解氧含量大于8.00 mg/L，亞硝酸鹽含量小于 0.05 mg/L，氨氮含量小于0.10 mg/L。每日投喂2次(09：30、15：30)，投飼率1%左右。每天觀察試驗(yàn)魚狀況，記錄死魚數(shù)目與攝食情況，依據(jù)攝食情況及時(shí)調(diào)節(jié)飼料投喂量。試驗(yàn)周期為60 d。

1.2.2 樣品采集 連續(xù)喂食60 d后，將試驗(yàn)魚饑餓24 h后稱質(zhì)量取樣，每箱隨機(jī)取10尾魚，MS-222麻醉后測(cè)量體長(zhǎng)、體質(zhì)量。冰盤上解剖取其肝胰臟、背肌，其中3尾用于測(cè)定全魚營(yíng)養(yǎng)成分，-80 ℃保存。

1.2.3 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定 測(cè)量體長(zhǎng)、體質(zhì)量，用于測(cè)定和計(jì)算增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率、肥滿度、肝體比。

增質(zhì)量率(WGR，%)=(平均終末體質(zhì)量-平均初始體質(zhì)量)/平均初始體質(zhì)量×100%；

特定生長(zhǎng)率(SGR，%/d)=100×(ln終末均質(zhì)量-ln初始均質(zhì)量)/養(yǎng)殖周期；

飼料系數(shù)(FCR)=攝取的飼料總質(zhì)量/(終末總體質(zhì)量+死亡魚總質(zhì)量-初始魚總體質(zhì)量)；

蛋白質(zhì)效率(PER)=(終末魚總體質(zhì)量-初始魚總體質(zhì)量)/總投飼量×飼料蛋白質(zhì)含量；

肝體比(HSI，%)=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%；

肥滿度(CF，%)=體質(zhì)量/體長(zhǎng)3×100%。

1.2.4 試驗(yàn)魚、飼料常規(guī)成分測(cè)定 水分用105 ℃常壓恒溫烘干法(GB/T 5009.3—2010)測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用凱氏定氮法(GB/T 5009.5—2010)，粗脂肪含量測(cè)定采用索氏抽提法(GB/T 5009.6—2010)，粗灰分用550 ℃高溫灼燒法(GB/T 5009.4—2010)測(cè)定。

1.2.5 硒含量的測(cè)定 使用Agilent 7700x ICP-MS電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測(cè)定飼料、肝胰臟、肌肉和全魚中的硒含量。

2 結(jié)果

2.1 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)及飼料利用的影響及納米硒的需要量

2.1.1 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)及飼料利用的影響 由表1可知，隨著飼料中納米硒含量的增加，半滑舌鰨幼魚末均體質(zhì)量、增質(zhì)量率和特定生長(zhǎng)率均呈現(xiàn)先上升后下降再上升的變化趨勢(shì)，且均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其中以0.8 mg/kg組最高，顯著高于其他納米硒添加組。當(dāng)飼料中納米硒含量從0.4 mg/kg增加至2.4 mg/kg時(shí)，半滑舌鰨幼魚的飼料系數(shù)先下降后升高，0.8 mg/kg和1.6 mg/kg組飼料系數(shù)顯著低于對(duì)照組，其中最小值出現(xiàn)在0.8 mg/kg組。蛋白質(zhì)效率也隨著納米硒添加量的增加呈現(xiàn)先升高后下降再升高的變化趨勢(shì)，其中0.8 mg/kg和1.6 mg/kg組蛋白質(zhì)效率顯著高于對(duì)照組，最高值出現(xiàn)在0.8 mg/kg組，其余各組之間變化不大(P>0.05)。各組的肝體比和肥滿度無(wú)顯著差異?？梢?，從提高生長(zhǎng)性能和飼料利用率方面來(lái)看，0.8 mg/kg 納米硒水平(總硒量為2.09 mg/kg)效果最好，1.6 mg/kg 納米硒水平(總硒量為3.56 mg/kg)次之。

2.1.2 納米硒的需要量 將飼料中納米硒添加量設(shè)為自變量(x)，每組增質(zhì)量率設(shè)為因變量(y)，進(jìn)行折線回歸性分析(圖1)。增質(zhì)量率達(dá)到最佳值時(shí)，納米硒的最適添加量為 1.82 mg/kg。

2.2 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚體組成的影響

由表2可知，各組半滑舌鰨幼魚全魚水分含量在77.97%～78.63%之間，粗蛋白質(zhì)占鮮樣的百分比在 15.96%～16.55%之間，粗脂肪占鮮樣的百分比在2.02%～2.25%之間，灰分占鮮樣的百分比在2.62%～2.76%之間，其中0.8 mg/kg組粗蛋白質(zhì)含量最高，2.4 mg/kg組粗脂肪含量最低，但各組之間體成分差異不明顯。

表1 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)及飼料利用的影響

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。

2.3 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚肝胰臟、肌肉和全魚中硒含量的影響

由表3可知，半滑舌鰨肝胰臟、肌肉和全魚中的硒含量隨飼料中納米硒含量的增加呈上升趨勢(shì)，且最大值均出現(xiàn)在 2.4 mg/kg 組。納米硒添加量超過(guò)1.6 mg/kg后，半滑舌鰨肝胰臟中硒含量顯著高于對(duì)照組。納米硒添加量趨于2.0 mg/kg后，肌肉中硒含量顯著高于對(duì)照組。全魚中硒含量隨納米硒添加量增大而增大，納米硒含量超過(guò)1.6 mg/kg后全魚硒含量顯著高于對(duì)照組。硒在魚體各部位的沉積順序?yàn)槿~>肝臟>肌肉?？梢?，從體內(nèi)硒沉積的角度分析，飼料中納米硒添加量為2.0 mg/kg(飼料中總硒量為4.23 mg/kg)時(shí)效果最為明顯。

表2 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚體組成的影響

表3 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚肝胰臟、肌肉和全魚中硒含量的影響

3 討論

3.1 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)及飼料利用的影響

硒作為水產(chǎn)動(dòng)物必需的微量元素之一，可以提高血漿中三碘甲腺原氨酸的水平，促進(jìn)生長(zhǎng)激素合成與分泌，從而加快動(dòng)物的生長(zhǎng)和蛋白質(zhì)合成[12]；還可以提高消化酶活性，提高食物的消化吸收率，從而促進(jìn)生長(zhǎng)[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加不同水平的納米硒投喂半滑舌鰨幼魚，對(duì)促進(jìn)魚體的末均體質(zhì)量、增質(zhì)量率、特定增長(zhǎng)率、降低飼料系數(shù)及提高蛋白質(zhì)效率均有一定的功效。其中，0.8 mg/kg納米硒組對(duì)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)性能和飼料利用率效果最佳。但添加不同水平的納米硒對(duì)肝體比和肥滿度無(wú)顯著影響。鄧岳松等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中硒含量為0.3 mg/kg時(shí)，亞硒酸鈉和蛋氨酸硒對(duì)尼羅羅非魚生長(zhǎng)無(wú)促進(jìn)效果，而納米硒可極顯著地促進(jìn)尼羅羅非魚的生長(zhǎng)[5]。黃小紅等發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加納米硒，提高了試驗(yàn)組草魚末均質(zhì)量、增質(zhì)量率、肥滿度、特定生長(zhǎng)率以及成活率，降低了餌料系數(shù)[7]。Ashouri等研究發(fā)現(xiàn)，在鯉魚日糧中添加1 mg/kg納米硒能顯著提高鯉魚的生長(zhǎng)性能，包括最終體質(zhì)量和增質(zhì)量(WG)[6]。侍苗苗等研究發(fā)現(xiàn)，在中華絨螯蟹飼料中添加0.2 mg/kg納米硒時(shí)，特定生長(zhǎng)率、存活率顯著增加，餌料系數(shù)達(dá)到最低，而且0.2 mg/kg納米硒組與1.0 mg/kg酵母硒組的養(yǎng)殖效果相近[11]。蘇傳福等研究發(fā)現(xiàn)，日糧硒含量對(duì)草魚的形體指標(biāo)和肥滿度無(wú)顯著影響，說(shuō)明硒對(duì)草魚魚體豐滿程度不產(chǎn)生影響[14]。本研究結(jié)果與這些研究結(jié)果相一致，說(shuō)明在飼料中添加納米硒對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和維持正常生理功能是必要的。

3.2 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚體組成的影響

魚類的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值主要取決于其肌肉中的蛋白質(zhì)和脂肪含量等[15]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中添加納米硒對(duì)全魚水分、粗蛋白質(zhì)含量、粗脂肪含量和灰分含量雖無(wú)顯著影響，但0.8 mg/kg組粗蛋白含量最高，2.4 mg/kg組粗脂肪含量達(dá)到最小值，一定程度上反映出硒可以提高蛋白質(zhì)合成，減少體脂沉積。蘇傳福等發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加0.66 mg/kg硒能顯著提高草魚蛋白含量，降低其脂肪含量，對(duì)草魚營(yíng)養(yǎng)成分有優(yōu)化作用[14]。侍苗苗等研究發(fā)現(xiàn)，和不加納米硒的對(duì)照組相比，添加0.2 mg/kg納米硒組能顯著提高中華絨螯蟹的粗蛋白含量[11]。儲(chǔ)霞玲發(fā)現(xiàn)，在南美白對(duì)蝦飼料中添加適量硒能顯著提高對(duì)蝦的體蛋白含量，但對(duì)體脂含量影響不顯著[16]。龍萌等也發(fā)現(xiàn)，酵母硒和茶多酚均能夠通過(guò)提高粗蛋白含量改善團(tuán)頭魴肌肉營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)[17]。本試驗(yàn)結(jié)果與這些研究結(jié)果存在一定差異，這可能與試驗(yàn)魚種類和規(guī)格、硒添加方式和水平、養(yǎng)殖環(huán)境不同有關(guān)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.3 納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚肝臟、肌肉和全魚中硒含量的影響

納米硒具有獨(dú)特的性能，它與動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞膜具有更高效的相互作用界面，使黏膜通透性增加，促進(jìn)動(dòng)物吸收[18]。半滑舌鰨幼魚組織的硒含量隨納米硒添加水平的升高而增加，當(dāng)納米硒添加量達(dá)到1.6～2.4 mg/kg時(shí)，組織中硒含量提高趨于平緩。說(shuō)明當(dāng)硒達(dá)到一定濃度時(shí)，半滑舌鰨幼魚對(duì)硒的沉積率減弱。本試驗(yàn)同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，半滑舌鰨幼魚肌肉硒含量明顯低于全魚和肝胰臟硒含量，組織中肝胰臟硒含量最高，說(shuō)明半滑舌鰨幼魚硒的主要蓄積部位在肝胰臟。Liu等研究發(fā)現(xiàn)，軍曹魚的脊椎骨和全魚硒含量隨著飼料硒添加量的增加而逐漸升高，當(dāng)飼料硒水平分別達(dá)到0.793、0.811 mg/kg 時(shí)趨于穩(wěn)定[19]，本研究結(jié)果可以與Liu等的研究結(jié)果相互印證。Lin等發(fā)現(xiàn)，點(diǎn)帶石斑魚全魚硒含量隨飼料硒添加量的增加而逐漸升高，且當(dāng)飼料硒含量為4 mg/kg時(shí)，肝臟中硒含量最高[20]。在其他魚類的研究中也發(fā)現(xiàn)了這種現(xiàn)象。Elia等對(duì)鯉魚的研究發(fā)現(xiàn)，在投喂硒含量為0.25、1 mg/kg 的飼料 60 d 后，硒含量為1 mg/kg的飼料對(duì)應(yīng)鯉腎臟中有最高的硒累積量[21]。在腎臟、肝臟和肌肉這3個(gè)組織中累積硒的能力依次為腎臟>肝臟>肌肉。

4 結(jié)論

綜上所述，在半滑舌鰨幼魚飼料中納米硒最適宜添加量為1.6 mg/kg(總硒含量為3.56 mg/kg)。飼料中添加納米硒能夠促進(jìn)半滑舌鰨幼魚生長(zhǎng)，提高增質(zhì)量率、特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率，降低餌料系數(shù)，加快蛋白質(zhì)合成效率。并且作為富硒產(chǎn)品，半滑舌鰨能夠?yàn)槿梭w有效地補(bǔ)充硒和蛋白質(zhì)，促進(jìn)人體生長(zhǎng)發(fā)育。