張建忠
一、配套儀器設備
1.采精設備。塑料杯、集精杯、兔用膠皮假陰道、凡士林。
2.鏡檢設備。顯微鏡、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙。
3.保溫設備。恒溫水浴鍋(35~38℃,用于保證取出精液的溫度)、恒溫烘箱、雙制冷電子冰箱(可根據(jù)需要調溫、用于精液保溫和運輸)。
4.稀釋液。精液稀釋液粉劑,用雙蒸水稀釋。
5.輸精設備。兔用輸精槍、輸精槍套管。
6.其他。蒸餾器、酒精棉、溫度計等設備。
二、種兔前期準備
1.種母兔準備。種母兔配種前要進行催情處理。其催情方法一是調控兔舍光照,光照強度控制在開燈后把手放入兔籠內能看清掌紋為宜,光照時間為每天在18小時以上;二是用藥物催情(催情散或孕馬血清)。初產種母兔:配種前用催情散拌料飼喂(1包催情散拌20公斤飼料),連續(xù)補充光照3~5天,當母兔外陰大紅時進行配種。經(jīng)產種母兔:從母兔產仔后23天開始,連續(xù)補充光照5天至仔兔斷奶。仔兔斷奶當天給母兔注射孕馬血清促性腺激素,按0.3毫升/只的劑量注射,注射后2天內觀察母兔外陰,當外陰大紅時進行配種。
2.采精器準備。采精器包括塑料杯外殼、兔用膠皮假陰道內胎和集精杯三部分。將集精杯放入內胎的孔中,再將內胎塞入外殼中,集精杯露出外殼,另一端的集精杯開口處向外翻轉套在外殼上,扎緊,使其不漏水、不透氣,并經(jīng)消毒處理。然后從外殼后部緩慢注入50℃的溫水。采精器準備好后,放入 54℃的雙制冷電子冰箱內,然后帶入種兔舍準備采精。
三、精液采集
1.抓種兔。先挑選體質健壯、性欲旺盛的公兔;然后左手抓誘導母兔耳朵及頸皮,右手拿假陰道及套在假陰道上的集精杯,伸到母兔腹下。
2.采精。公兔陰莖進入假陰道后,抽動數(shù)秒后向前一挺,后軀蜷縮向一側倒去,表示其射精完成。采精者應立即將假陰道口端抬高,使精液流入集精杯,然后迅速把采精器從母兔腹下取出,豎直采精器,取下集精杯,放入36℃雙制冷電子冰箱內。
四、精液檢測
1.送檢。采精結束后,立即把雙制冷電子冰箱送回化驗室,把集精杯連同試管架放入36℃的恒溫水浴鍋中。取干燥清潔載玻片,用膠頭滴管吸取1滴精液涂于載玻片上,放在160倍顯微鏡下進行鏡檢。
2.品質檢測。(1)外觀觀察:肉眼觀察精液顏色(正常為灰白色或乳白色)、精液混濁度(似云霧滾動表示活力大、密度大),聞氣味(正常為無臭味)。(2)鏡檢觀察:觀察精子活力?;盍z查時,精液不能太少,過少容易風干??杉?~2滴精液于載玻片上,再加數(shù)滴稀釋液,觀察精子運動。精液中有3/5以上的精子呈前進式運動,才能用于精液稀釋和輸精。
五、精液稀釋
1.稀釋倍數(shù)。按檢測的精子活力分值來選擇合適的稀釋倍數(shù)。一般分值為5的稀釋5~10倍,分值為4的稀釋5倍,分值為3的稀釋2倍。
2.精液稀釋劑的配制。取一包精液稀釋劑粉,使其完全溶解在100毫升雙蒸水中。雙蒸水溫度控制在36℃,盛放稀釋劑的器皿用雙蒸水沖洗干燥后,可以使用雙蒸水潤洗1遍(雙蒸水放置時間很長的話,必須煮沸,以排除水中二氧化碳,保證水的pH值)。
3.稀釋。用玻璃棒引流,緩慢將配制好的精液稀釋液沿集精杯壁流入精液中,然后輕輕搖勻。
4.保存。必須現(xiàn)配現(xiàn)用,同時要縮短從采精到輸精的時間,以有效提高受孕概率。
六、輸精
1.抓種母兔??蓛扇藚f(xié)同操作,助手一只手抓母兔耳朵及頸皮,把母兔放到輸精車上,另一只手按住母兔背腰。輸精者左手拇指與其余四指抓住母兔尾根向上提并外翻,使母兔后軀懸空、外陰充分暴露。
2.輸精手法。輸精者右手持槍,用槍頭撥開母兔外陰,沿陰道背部向下進槍,遇到阻力時,輸精槍后退再試探性向前進,調整槍頭角度,經(jīng)產母兔槍頭向下,初配母兔槍頭向上,一般稍用力可過關。插入適宜深度為12~14厘米。兔為雙子宮動物,太深易單側子宮受孕,過淺精子不能到達受精部位。
3.輸精完成。輸完精后,緩慢拔出輸精槍,在母兔后軀輕拍一下,再注射經(jīng)生理鹽水稀釋的促排3號0.5微克,刺激母兔排卵。
4.注意事項。(1)避免強制輸精:當母兔掙扎,背腰拱起,后肢觸及物體、努責時不可強制輸精,以免給母兔造成損傷。(2)嚴格消毒:輸精槍在吸取精液前,用精液稀釋液清洗兩遍,甩凈精液稀釋液后再倒入精液,1次只倒20毫升,減少在輸精過程中紫外線、震蕩等對精液的損傷。輸精前排盡槍內空氣,1支輸精管只用于1只母兔。(3)減少精液震蕩:在輸精過程中,減少對精液的震蕩。因為在震蕩時,精液中的二氧化碳會溢出、氧氣溶入,使精子活動量增加,消耗精子能量,會加快精子衰竭死亡。(4)在操作室進行精液稀釋時,工作人員嚴禁吸煙,因為煙氣對精子具有很大的殺傷力。
七、輸精后管理
1.保持兔舍安靜。輸完精后,為了更好地讓母兔受孕,所有人員必須撤出兔舍,給母兔營造一個安靜舒適的環(huán)境。在輸精前加料以及采精前加料,保證水、料充足。
2.母兔摸胎。輸精以后,仍要保持每天18小時的光照,直至母兔摸胎。母兔在配種后12~15天進行摸胎,以確認母兔是否受孕。
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