張明元 黃佳媛

(鄞州人民醫(yī)院，浙江 寧波 315040)

大腸癌是臨床中最為常見的一種消化系統(tǒng)腫瘤，其發(fā)病率位居所有惡性腫瘤疾病的第三位。癌細(xì)胞侵襲及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散是造成大腸癌高死亡病例的重要原因，故有效評估大腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制和潛能在延長患者生命、改善預(yù)后生活質(zhì)量具有極其重要的意義〔1〕。近年來有研究顯示，腫瘤轉(zhuǎn)移基因CD44變異體有利于促進(jìn)人體血管內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞及基底膜的浸潤與黏附，進(jìn)而能夠增強(qiáng)大腸癌腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及侵襲能力，且其表達(dá)率較未發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移者明顯增高〔2〕。本研究分析老年大腸癌患者外周血CD44v5、CD44v6表達(dá)及其對化療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年7月至2016年4月鄞州人民醫(yī)院確診的62例老年大腸癌患者為觀察組，男35例，女27例；年齡61～75歲，平均(67.68±4.63)歲，其中直腸癌41例，結(jié)腸癌21例，國際抗癌聯(lián)盟(UICC)分期〔3〕：Ⅰ期14例，Ⅱa期18例，Ⅱb期13例，Ⅲ期9例，Ⅳ期8例。50例非老年大腸癌患者為對照組，男28例，女22例；年齡37～58歲，平均(45.13±6.46)歲；UICC分期：Ⅰ期12例，Ⅱa期15例，Ⅱb期11例，Ⅲ期8例，Ⅳ期4例。另選同期于我院行體檢的38例健康老年人為正常組，男22例，女16例；年齡61～74歲，平均(66.18±4.07)歲。

1.2化療方法 觀察組接受XELOX化療方案：第1天靜脈滴注奧沙利鉑2 h，130 mg/m2；第1～14天：口服卡培他濱1 000 mg/m2，2次/d，21 d為1個周期。

1.3制備標(biāo)本 CD44v5檢測：取2 ml外周靜脈血，肝素(1∶9)抗凝，加入2 ml淋巴細(xì)胞分離液，1 500 r/min離心5 min，提取淋巴細(xì)胞分離層，采用磷酸進(jìn)行漂洗，收集淋巴細(xì)胞。將100 μl懸液與10 μl CD44v5鼠抗人單克隆抗體加入試管中，均勻混合后放入4℃冰箱反應(yīng)30 min；再將10 μl羊抗鼠IgG1-FITC標(biāo)記的二抗加入，并放入冰箱中反應(yīng)30 min；再將溶紅細(xì)胞液2 ml加入，混合均勻反應(yīng)5 min；后利用磷酸緩沖液進(jìn)行漂洗，將二抗加小鼠IgG1作為對照，實施上機(jī)檢測。CD44v6檢測：用小鼠IgG1-FITC設(shè)為同型對照，用鼠抗人CD44v6-FITC直接免疫熒光標(biāo)記單克隆抗體，不加二抗，其余與CD44v5檢測方式相似。

1.4儀器與試劑 FACS Calibur型流式細(xì)胞儀購自美國BD公司，陰性對照液羊抗鼠IgG1-FITC、鼠抗人單克隆抗體購自上海晶美生物工程公司。

1.5檢測方法 采用美國BD公司提供的Cell Quest軟件對CD44v5、CD44v6免疫熒光陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行分析，去除同型對照標(biāo)記的非特異性免疫熒光陽性細(xì)胞百分率。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2檢驗、t檢驗及非參數(shù)檢驗。

2 結(jié) 果

2.1外周血CD44v5、CD44v6表達(dá) 觀察組與對照組CD44v5、CD44v6水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.753、0.810，P=0.186、0.248)；觀察組CD44v5、CD44v6顯著高于正常組(t=8.795、19.447，均P<0.05)。觀察組化療后CD44v5、CD44v6水平較化療前明顯降低(t=9.602、8.850，均P<0.05)，但仍顯著高于正常組(t=4.523、5.959，均P<0.05)。見表1。

表1 各組外周血CD44v5、CD44v6表達(dá)水平對比

與觀察組比較：1)P<0.05；與化療前比較：2)P<0.05

2.2臨床病理特征與外周血CD44v5、CD44v6表達(dá)的關(guān)系 CD44v5、CD44v6表達(dá)水平與患者腫瘤大小、浸潤深度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組患者臨床病理特征與外周血CD44v5、CD44v6表達(dá)的關(guān)系

3 討 論

黏附分子CD44為一種透明質(zhì)酸的受體，也是分布較廣泛的多功能、多結(jié)構(gòu)的細(xì)胞表面糖蛋白之一〔4〕。其可對細(xì)胞外基質(zhì)(層黏連蛋白、Ⅰ型膠原、纖黏連蛋白)、腫瘤細(xì)胞的結(jié)合能力產(chǎn)生直接影響〔5〕。臨床研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血行出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，腫瘤細(xì)胞可透過血管壁進(jìn)入組織，并在淋巴歸巢中發(fā)揮重要作用。CD44基因由10個變異型外顯子及10個組成型外顯子組合，其中CD44v5、CD44v6是其常見的變異體，均屬于促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因〔6，7〕。有研究報道，黏附分子與結(jié)直腸癌、胃癌等疾病的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后存在明顯相關(guān)性〔8〕。本研究結(jié)果表明，外周血黏附分子與大腸癌之間關(guān)系密切，但并不是老年大腸癌患者所獨(dú)有〔9〕。大腸癌包括直腸癌及結(jié)腸癌，是臨床較為常見的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，從癌變發(fā)病率分析，依次為直腸、盲腸、乙狀結(jié)腸、升結(jié)腸及橫結(jié)腸等〔10〕。大腸癌具有發(fā)病率、致死率高的特征，雖早期無明顯癥狀，但是隨著癌變腫瘤的不斷發(fā)展，癥狀會逐漸出現(xiàn)，包括腹痛、便血、包塊、腹痛、腸梗阻等癥狀。與此同時，由于大腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，會以局部侵犯的浸潤形式轉(zhuǎn)移至周圍器官組織。研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的方式主要有兩種，(1)淋巴轉(zhuǎn)移：浸潤的腫瘤細(xì)胞會穿過淋巴管壁，脫落后隨人體的淋巴液轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)，并以淋巴結(jié)為中心重新生長出腫瘤〔11〕；(2)血行轉(zhuǎn)移：血行轉(zhuǎn)移是大腸癌轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散的另一種途徑，腫瘤細(xì)胞會通過人體血管途徑，擴(kuò)散到腫瘤組織以外的器官和組織(如肝臟、肺部、胃及骨等)〔12〕。一旦腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散現(xiàn)象，會極大增加臨床治療的難度，導(dǎo)致病死率大幅提升。臨床統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，大腸癌的致死率極高，已成為危害人類生命安全的國際性醫(yī)學(xué)難題〔13〕。在世界范圍內(nèi)，平均每年有超過120萬人確診大腸癌，并有超過65萬人死亡。研究結(jié)果顯示，由于大腸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散等原因，導(dǎo)致其5年生存率極低，不足50%，而在非洲、中北美洲及亞洲部分發(fā)展中國家，由于醫(yī)療水平的欠缺，大腸癌的5年生存率更低，嚴(yán)重威脅人類生命安全。另外，隨著人口老年化趨勢的不斷加劇，大腸癌的患病率與致死率還在不斷增加，亟需引起人們關(guān)注〔14〕。研究顯示，大腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是一系列復(fù)雜過程，需要癌細(xì)胞同細(xì)胞外間質(zhì)及人體內(nèi)的其他系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)雜的相互作用〔15〕。大腸癌腫瘤細(xì)胞外表面的黏附分子起到至關(guān)重要的作用。CD44又可稱為Hermes抗原因子，屬于細(xì)胞表面黏附分子，能夠特異性結(jié)合人體基質(zhì)透明質(zhì)酸及膠原蛋白細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，得以參與腫瘤細(xì)胞組織與人體正常細(xì)胞、基質(zhì)間的黏附過程，從而在大腸癌腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移及擴(kuò)散過程中起到至關(guān)重要的作用〔16〕。CD44也是一種跨膜透明質(zhì)酸受體細(xì)胞，能夠促使大腸癌細(xì)胞獲得細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移能力?；?qū)W研究顯示，CD44基因位于人類第11號染色體中，其分子量約為50 kb，存在20個具有高度保守特性的外顯子；根據(jù)其外顯子表達(dá)不同，臨床可以將CD44分為標(biāo)準(zhǔn)型(CD44s)及變異型(CD44v)，其中CD44v5與CD44v6是屬于CD44的變異型，同大腸癌腫瘤分型及癌細(xì)胞浸潤深度密切相關(guān)〔17〕。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CD44v6能夠通過促進(jìn)大腸癌細(xì)胞同人體正常血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。并且通過對于腫瘤細(xì)胞蛋白聚集分布的干擾，達(dá)到影響大腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和運(yùn)動的能力，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的形成〔17〕。CD44v6的表達(dá)可在一定程度上促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表面黏附分析的功能與結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化，從而促使腫瘤細(xì)胞存在侵襲轉(zhuǎn)移能力；而CD44v6高表達(dá)的癌細(xì)胞可逃避人體免疫系統(tǒng)的殺傷與識別，獲取淋巴細(xì)胞的“偽裝”，更利于進(jìn)入淋巴結(jié)，進(jìn)而形成轉(zhuǎn)移〔18〕。本研究結(jié)果提示，中晚期老年大腸癌患者更易轉(zhuǎn)移，CD44v5、CD44v6表達(dá)水平可反映腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能，且其表達(dá)水平越低患者預(yù)后越佳。另外，老年大腸癌患者接受化療可對部分內(nèi)皮細(xì)胞黏附作用及腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，可阻礙腫瘤細(xì)胞從血液循環(huán)中游出，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞血行擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移的目的，但無法完全阻止腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

綜上，CD44v5、CD44v6表達(dá)與老年大腸癌患者細(xì)胞血行轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測其水平可為臨床判定該病發(fā)生、預(yù)后提供科學(xué)理論參考；化療具有腫瘤轉(zhuǎn)移、抗黏附作用，有利于降低外周血黏附分子表達(dá)水平。