高 芳 秦金東 馬立聰 劉得利 李晶晶 賈彥彬

(包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014060)

目前，全球范圍內(nèi)胃癌的發(fā)病率仍高居惡性腫瘤第5位〔1〕，死亡率位居第3位〔2〕；并存在明顯的地區(qū)差異和城鄉(xiāng)差別現(xiàn)象〔3，4〕，其中高的死亡率就包括中西部地區(qū)。同時胃癌在不同部位的發(fā)生趨勢也產(chǎn)生了變化：非賁門胃癌的發(fā)病率逐年上升〔5，6〕，而其流行病學(xué)和發(fā)病機(jī)制尚不清楚。胃癌是復(fù)雜的多基因疾病，即使在胃癌高風(fēng)險(xiǎn)人群中，也僅有一小部分人發(fā)病；提示在胃癌的發(fā)病過程中，個體自身的遺傳因素起非常重要的作用〔7〕。MUC6是正常胃黏液中的一種分泌性黏蛋白，與黏蛋白MUC1、MUC2、MUC5等共同組成生理性屏障，保護(hù)胃黏膜。而當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)異常時，MUC6基因編碼的黏蛋白在胃癌組織中異常表達(dá)，調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞生長等〔8〕；且MUC6基因在胃癌發(fā)生過程中異常變化〔9～11〕。因此，MUC6基因是胃癌易感性研究的一個十分重要的候選基因。本研究通過病例對照關(guān)聯(lián)研究的方法，觀察內(nèi)蒙古中西部地區(qū)包頭漢族人群中 MUC6基因rs10794282、 rs10794279、 rs11246386、 rs10751638、 rs11826309、 rs10794359位點(diǎn)多態(tài)性，探討其與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)。

1 材料與方法

1.1研究樣本〔12〕2008年9月至2010年6月包頭市腫瘤醫(yī)院，經(jīng)病理學(xué)診斷為非賁門胃癌病例288例為病例組；其中男224例，女64例，年齡26～83歲，平均(59.48±11.23)歲；病人發(fā)病時均已在包頭市居住5年以上，排除繼發(fā)病例和復(fù)發(fā)病例，均未接受過化療和放療。來自同期社區(qū)的體檢人群281例正常體檢者為對照組，無癌癥病史，也在包頭市居住5年以上。其中男220例，女61例，年齡26～85歲，平均(59.10±11.57)歲。樣本均為漢族。兩組年齡和性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2標(biāo)記單核苷酸多態(tài)性(Tag-SNPs)的篩選 使用Agorithm-Tagger-pairwise Tagging軟件進(jìn)行篩選，其中參數(shù)MAF> 5%、r2 > 0.8。選擇MUC6基因5′ 側(cè)翼區(qū)、3′ 側(cè)翼區(qū)和外顯子進(jìn)行篩選，最終初步篩選出6個SNPs進(jìn)行研究。

1.3基因分型 運(yùn)用酚/氯仿提取外周血白細(xì)胞中的DNA。 用熒光探針(TaqMan)法對6個SNP進(jìn)行基因分型，操作按照生產(chǎn)廠商的說明進(jìn)行(美國加州福斯特城應(yīng)用生物技術(shù)公司)。基因分型在北京諾賽基因組有限公司完成。并設(shè)陰性對照和陽性對照，且隨機(jī)挑取5%的樣本進(jìn)行重復(fù)基因型檢測，與之前的結(jié)果完全一致。

1.4統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)來檢測基因型分布是否符合遺傳平衡定律(Hardy-Weinberg)； 采用Haploview軟件構(gòu)建單體型。 用非條件性 Logistic回歸計(jì)算比值比(OR值)及其95%可信區(qū)間(CI)，評判各等位基因、基因型及單體型與非賁門胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是否存在關(guān)聯(lián)。

2 結(jié) 果

2.1MUC6基因6個SNP位點(diǎn)等位基因與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系 對照組SNP rs10794282、rs10794279、rs11246386、rs10751638、rs11826309、rs10794359的基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。兩組MUC6基因SNP rs11246386的等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2MUC6基因6個SNP位點(diǎn)基因型與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系 兩組MUC6基因的SNP rs11246386的基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，對胃癌的發(fā)生有保護(hù)作用，見表2。

2.3MUC6基因的單體型與非賁門胃癌發(fā)生的關(guān)系 對MUC6基因不同位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析，顯示rs10794359-rs11826309(模塊1)之間存在強(qiáng)連鎖不平衡，構(gòu)成單體型區(qū)域。但各單體型在兩組中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見表3。

表1 各SNP位點(diǎn)等位基因與胃癌的關(guān)聯(lián)分析〔n(%)〕

1)數(shù)據(jù)缺失；2)調(diào)整了性別和年齡因素；下表同

表2 各SNP位點(diǎn)基因型與非賁門胃癌的關(guān)聯(lián)分析

續(xù)表2 各SNP位點(diǎn)基因型與非賁門胃癌的關(guān)聯(lián)分析

表3 MUC6基因單體型與胃癌的關(guān)系(%)

3 討 論

2015年中國胃癌新發(fā)病例約為67.9萬例，胃癌死亡病例約為49.8萬例〔3〕，死亡率為73.3%，形勢嚴(yán)峻，仍是嚴(yán)重危害中國居民健康的主要疾病〔13〕。 在我國，超過90%的胃癌患者發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，因此進(jìn)一步深入研究我國胃癌的發(fā)病原因〔14〕，重視胃癌篩查工作〔3〕，重點(diǎn)預(yù)測胃癌的患病風(fēng)險(xiǎn)基因，早期做出診斷并及時干預(yù)，對提高患者預(yù)后具有重要意義〔15〕。胃癌包括賁門癌和非賁門癌，賁門癌在流行病學(xué)特征、病因及分子生物學(xué)特征等方面更接近食管癌；為了保證臨床標(biāo)本的均質(zhì)性，我們把研究對象限定為非賁門胃癌患者〔9〕。MUC6是一種黏蛋白基因，定位于染色體11p15.5〔16〕，這一區(qū)域在胃癌中經(jīng)常顯示雜合性丟失〔17〕。此外，幽門螺旋桿菌(H.pylori)引發(fā)的慢性炎癥與胃癌的發(fā)生和發(fā)展關(guān)聯(lián)密切〔18，19〕。汪榮泉等〔20〕研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者H.pylori 感染后，導(dǎo)致其癌旁胃黏膜組織中的MUC6黏蛋白明顯地表達(dá)降低，提示破壞胃黏膜的保護(hù)屏障。本研究發(fā)現(xiàn)： rs11246386位點(diǎn)與胃癌易感性相關(guān)：攜帶T等位基因者罹患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)降低； CT和TT基因型對非賁門胃癌有保護(hù)作用。 Jia等〔21〕研究顯示， 在高加索人群中，標(biāo)記的 MUC6基因14個不同的 SNPs和胃癌的發(fā)生沒有關(guān)聯(lián)，同樣Marín等〔22〕研究發(fā)現(xiàn)，在西班牙人群中采用 Tag-SNPs的篩選的6個 SNPs與胃癌的發(fā)生均無關(guān)聯(lián)； 這與本研究不太一致，這種結(jié)果的差異可能與樣本量的大小和遺傳亞結(jié)構(gòu)、環(huán)境因素有關(guān)，亦可能與人種、地域差異有關(guān)〔9〕。 總之，關(guān)于MUC6基因多態(tài)性與非賁門胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的確切關(guān)系還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量、篩查MUC6基因的其他SNPs來研究證實(shí)。