金華，蔡克瑞，董建將，孫曉冬，閆磊

(1本溪市第六人民醫(yī)院，遼寧本溪117000；2牡丹江醫(yī)學院)

肝損傷是多種肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展及最終走向肝功能衰竭的始動環(huán)節(jié)和共同途徑，研究減輕肝損傷的方法具有重要的臨床意義。中藥淫羊藿具有溫陽補腎、強筋健骨、祛風除濕等功效，淫羊藿苷(ICA)是淫羊藿的主要活性成分，現(xiàn)代藥理研究證實，ICA具有抗腫瘤、增強免疫功能、改善心腦血管功能、抗氧化損傷、抗肝臟缺血再灌注損傷和抑制肝纖維化等多重藥理學作用[1]。有關ICA對急性肝損傷作用的研究少見報道。2016年11月～2017年6月，我們通過對急性肝損傷大鼠模型給予ICA預處理，觀察ICA對肝功能的保護作用，并探討其可能的機制，為防治肝損傷提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑與儀器 SPF級大鼠40只，質(zhì)量300～400 g，雌雄不限。CCl4(廣州化學試劑廠)，ICA(陜西西安飛達生物技術有限公司)，超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)，腫瘤壞死因子α(TNF-α)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(上海信帆生物技術公司)，TritonX-100、二甲基亞砜、胰蛋白酶(華舜生物工程有限公司)。Scout-Ⅱ半自動生化分析儀，恒壓穩(wěn)流電泳儀，OLYMPUS熒光顯微鏡。

1.2 動物分組與處理 將大鼠隨機分為對照組、模型組、ICA低劑量組和ICA高劑量組，每組各10只。ICA低劑量組給予腹腔注射ICA 30 mg/kg 2 mL，ICA高劑量組給予腹腔注射ICA 80 mg/kg 2 mL，對照組和模型組給予相同體積生理鹽水注射，均1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后2 h，模型組、ICA低劑量組和ICA高劑量組給予0.35% CCl410 mL/kg灌胃建立急性肝損傷模型，對照組給予相同體積生理鹽水灌胃。大鼠禁食不禁水，12 h后處死。

1.3 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測 大鼠處死后取股動脈血，室溫靜置1 h，低溫離心10 min分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆?。采用半自動生化分析儀檢測ALT、AST活性。

1.4 肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平檢測 取大鼠肝臟全葉，液氮速凍后，-80 ℃保存。取適量凍存的肝組織，加入液氮研磨，制備10%肝組織勻漿。采用考馬斯亮藍法檢測SOD、MDA、GSH-Px，ELISA法檢測TNF-α，嚴格按試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 各組血清ALT、AST水平比較 見表1。與對照組比較，模型組ALT、AST水平均升高(P均<0.01)；與模型組比較，ICA低劑量組、ICA高劑量組ALT、AST水平均降低(P均<0.01)。

表1 各組血清ALT、AST水平比較(U/L，x±s)

注：與對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.01。

2.2 各組肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平比較 見表2。與對照組比較，模型組SOD、GSH-Px水平降低，MDA、TNF-α水平升高；與模型組比較，ICA低、高劑量組SOD、GSH-Px水平升高，MDA、TNF-α水平降低(P均<0.01)。

表2 各組肝組織勻漿SOD、MDA、GSH-Px、TNF-α水平比較

注：與對照組比較，*P<0.01；與模型組比較，△P<0.01。

3 討論

急性肝損傷是在短期內(nèi)由多種原因引起的肝功能突發(fā)性異常的疾病，其病因較多，機理復雜[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，急性肝損傷的發(fā)生與中毒、病毒性肝炎、免疫、血管障礙等相關，其機制可能與質(zhì)膜的完整性改變、線粒體功能失調(diào)、細胞內(nèi)離子濃度變化、自由基損傷增強和炎性因子表達增強等有關[3～6]。因此，對抗自由基損傷和降低炎癥因子表達或?qū)⒊蔀楸Ｗo急性肝損傷的新途徑。ICA是傳統(tǒng)中藥淫羊藿的有效藥理成分。最新的研究表明，ICA具有抑制肝癌[7]、對抗大鼠肝臟缺血再灌注損傷[8]、增強免疫和抑制肝纖維化[1]等作用，因此ICA在肝臟領域具有廣闊的研究前景。

SOD和GSH-Px是機體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶，其活性高低可反映機體抗氧化能力[9，10]。SOD在全身各組織廣泛分布，可以與O2-反應形成H2O2，H2O2經(jīng)過過氧化物酶和GSH-Px的催化生成水，從而清除自由基，保護細胞免受氧化性傷害。MDA是不飽和脂肪酸過氧化作用的終產(chǎn)物，可嚴重破壞細胞膜結(jié)構(gòu)，導致細胞腫脹、壞死、肝細胞膜通透性增加，造成肝細胞損傷[11～13]；MDA還可以使胞質(zhì)、膜蛋白及某些酶交聯(lián)蛋白復合物，刺激機體產(chǎn)生抗體，介導免疫損傷[14]。MDA含量可以間接反映細胞受自由基損害和過氧化的程度。ALT、AST是肝細胞內(nèi)主要酶系，在肝細胞膜受損時，胞內(nèi)ALT、AST釋放增加，ALT、AST活性檢測是判斷肝細胞膜損傷最直接的指標。本研究結(jié)果顯示，ICA預處理可以使急性肝損傷模型大鼠血清ALT、AST活性降低，肝組織中SOD、GSH-Px活性增高，MDA含量降低。提示ICA可以增強急性肝損傷模型大鼠對抗自由基和抗氧化的能力，減少肝細胞損傷，保護肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能。

TNF-α是引起肝細胞嚴重壞死的重要介質(zhì)，TNF-α激活可以介導炎癥級聯(lián)反應，誘導巨噬細胞以及炎癥遞質(zhì)等的表達，加重肝細胞損傷，在肝損傷中起著核心作用[15]。本研究結(jié)果顯示，ICA可以使急性肝損傷模型大鼠肝組織TNF-α含量降低，提示ICA預處理可以降低急性肝損傷模型大鼠肝細胞炎性因子表達，減輕炎癥反應，保護肝細胞功能。

綜上所述，ICA預處理對急性肝損傷大鼠的肝功能具有保護作用，其機制可能與降低ALT、AST活性，增加SOD、GSH-Px活性，降低MDA、TNF-α含量，減少自由基損害和減輕炎癥反應有關。