周卿　張艷　楊鑫

摘要：采用分散液相微萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立黨參（Codonopsis Radix）中8種有機(jī)磷農(nóng)藥的快速測(cè)定方法。以乙睛為分散劑，氯仿為萃取劑富集黨參中8種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥，采用+MRM監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，8種有機(jī)磷農(nóng)藥在各自濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.990 0；高、中、低3個(gè)濃度的加標(biāo)回收率范圍在76.81%～110.25%；各農(nóng)藥的方法檢測(cè)限范圍為0.006～1.300 μg/kg，表明該方法可用于黨參中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的快速測(cè)定。

關(guān)鍵詞：黨參（Codonopsis Radix）；有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥；分散液相微萃?。灰嘿|(zhì)聯(lián)用法

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.7+2；S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2018）15-0081-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.15.021 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Rapid Determination of Organophosphorus Pesticides Residues in Codonopsis Radix by Disperse Liquid-liquid Microextraction Coupled with Liquid

Chromatography-Mass Spectrometry

ZHOU Qing，ZHANG Yan，YANG Xin

（Teaching and Research Section of Pharmaceutical Analysis，College of Pharmacy，Zunyi Medical University，Zunyi 563003，Guizhou，China）

Abstract： To establish disperse liquid-liquid microextraction coupled with liquid chromatography-mass spectrometry（DLLME-LC-MS） method for determination of eight organophosphorus pesticides（dimethoate，dichlorvos，malathion，parathion，phorate，diazinon，ethion，chlorpyriphos） in Codonopsis radix. The eight organophosphorus pesticides in Codonopsis radix which was extracted by trichlormethane，and the acetonitrile was dispersant，then analysed by using mass spectrometric ditection in multiple reaction monitoring（MRM） mode under the optimal chromatographic conditions. The external standard method was adopted for quantitative analysis. The eight organophosphorus pesticides have a good linear relation respectively（r﹥0.999 0）. The recoveries at three spiked levels of eight organophosphorus pesticides ranged from 76.81% to 110.25%，the detection limits were 0.006～1.300 μg/kg. The method can be applied in detection of the organophosphorus pesticides residues analysis in Codonopsis radix.

Key words： Codonopsis radix； organophosphorus pesticides； disperse liquid-liquid microextraction； LC-MS

黨參（Codonopsis Radix）屬桔梗科植物，是傳統(tǒng)的補(bǔ)中益氣藥，同時(shí)也是貴州省十大道地藥材之一，在貴州省各地均有種植，但由于使用部位以根為主，使其易受農(nóng)藥殘留的污染，建立高效、快速的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)是保障其質(zhì)量的基礎(chǔ)[1]。中藥材中農(nóng)藥殘留是影響中藥材質(zhì)量的重要因素之一，有機(jī)磷農(nóng)藥因具有廣譜、高效等特點(diǎn)，是一類(lèi)廣泛使用的殺蟲(chóng)劑，各品種毒性不同，多數(shù)屬劇毒和高毒類(lèi)，有些品種混合使用時(shí)還有增毒作用，因此加強(qiáng)中藥材中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)很有必要[2]。在中藥材的農(nóng)藥殘留分析中，常用的樣品前處理方法有液液萃取、固相萃取、凝膠滲透色譜法等[3-5]，這些方法均需要消耗大量有機(jī)溶劑且耗時(shí)較長(zhǎng)。分散液相微萃取是近年來(lái)發(fā)展的一種新型的、綠色的樣品前處理方法，具有樣品使用量小，有機(jī)溶劑消耗量少等優(yōu)點(diǎn)[6-8]。本研究選取了貴州省不同產(chǎn)地黨參藥材種植過(guò)程中常用或涉及使用的8種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥，采用分散液相微萃取聯(lián)合LC-MS技術(shù)，建立了同時(shí)快速測(cè)定黨參藥材中8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ABSCIEX QTRAP4000型液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)AB科技有限公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；XW-80A型渦旋混合儀（海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司）；DN-36A型氮吹儀（上海比郎儀器有限公司）。

8種農(nóng)藥對(duì)照品（樂(lè)果、對(duì)硫磷、甲拌磷、乙硫磷、敵敵畏、二嗪農(nóng)、馬拉硫磷、毒死碑）均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所（質(zhì)量濃度為100 μg/mL）；甲醇、乙睛為色譜純（美國(guó)TEDIA公司），氯仿為分析純（成都科龍化工試劑廠）；試驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

黨參藥材購(gòu)自貴州省各地中藥材市場(chǎng)，經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科中藥師楊建文鑒定為真品。

1.2 對(duì)照品溶液的配制

分別取樂(lè)果、敵敵畏、馬拉硫磷、對(duì)硫磷、甲拌磷、乙硫磷、二嗪農(nóng)、毒死碑對(duì)照品溶液適量，用甲醇定容，分別制成濃度為10 μg/mL的對(duì)照品溶液，于4 ℃儲(chǔ)存待用。

1.3 樣品的微萃取過(guò)程

取黨參藥材，粉碎后過(guò)60目篩，精密稱(chēng)取1.0 g，加入25 mL的甲醇，超聲30 min，經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm）過(guò)濾后，取100 μL于尖底離心管中，加入900 μL 6% NaCl制成1 mL的黨參樣品溶液。在制備好的黨參溶液中迅速加入300 μL乙腈與90 μL氯仿混合溶液，混勻，使之成為水、分散劑、萃取劑乳狀混濁體系，于渦旋儀上渦旋90 s，再3 500 r/min離心5 min，取下層沉積相用N2吹干，加100 μL甲醇復(fù)溶后，進(jìn)行LC-MS檢測(cè)。

1.4 色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse plus C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈。流速為0.60 mL/min，梯度洗脫程序：A∶B（95∶5）洗脫10 min，A∶B從95∶5變?yōu)?∶95洗脫10 min，然后保持5∶95比例5 min，共15 min。柱溫30 ℃，進(jìn)樣量1 μL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子化正離子模式（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描模式；離子噴霧電壓：4 500 V；離子源溫度550 ℃；霧化氣流速55 mL/min，輔助氣流速55 mL/min，氣簾氣流速40 mL/min；其他相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表1。離子流見(jiàn)圖1。

2 結(jié)果與分析

2.1 黨參藥材提取方法的選擇

在黨參藥材的提取方法中，采用甲醇為提取溶劑，比較了水蒸氣蒸餾、超聲提取、索氏提取3種方法，結(jié)果表明，超聲提取具有提取率高，操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，故選擇超聲提取法提取黨參藥材中的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥。

2.2 分散液相微萃取條件的優(yōu)化

2.2.1 萃取劑和分散劑的選擇 在分散液相微萃取方法中，萃取劑要求密度大于水，對(duì)待測(cè)物有較好的萃取效率，對(duì)檢測(cè)條件沒(méi)有干擾。在試驗(yàn)中考查了常用的氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、甲苯等萃取劑對(duì)8種有機(jī)磷農(nóng)藥萃取效率的影響，結(jié)果顯示采用氯仿時(shí)萃取效率高，且在選定色譜條件下，雜質(zhì)峰干擾較小，故選擇氯仿作為萃取劑。

分散劑的作用是增加萃取劑在體系里的分散度，從而增大與待測(cè)物的接觸面積，在試驗(yàn)中分別考察了乙腈、四氫呋喃、丙酮為分散劑時(shí)的萃取效果，結(jié)果顯示使用乙腈為分散劑時(shí)可與水及氯仿形成較好的乳濁液體系，萃取效率最高，且峰面積最大，丙酮的萃取率也較好，但出峰有干擾，四氫呋喃的萃取率最低，故選擇乙腈為分散劑。

2.2.2 萃取劑與分散劑體積的優(yōu)化 萃取劑氯仿的加入體積直接影響萃取效率的高低，試驗(yàn)中考察了加入氯仿體積分別為30、50、70、90、120 μL的萃取效率。結(jié)果表明，當(dāng)氯仿的加入體積為90 μL時(shí)，8種有機(jī)磷農(nóng)藥的萃取效率都最高，故選擇萃取劑氯仿加入體積為90 μL。

分散劑乙腈的加入量會(huì)影響水/分散劑/萃取劑白色乳狀混濁體系的形成，從而影響萃取效率的高低。乙腈體積偏小，萃取劑未能在水相中分散均勻，不能保證樣品萃取完全，而當(dāng)乙腈體積偏高時(shí)，會(huì)使待測(cè)物在水相中的溶解度加大，從而降低萃取效率，試驗(yàn)中考察了乙腈的加入體積分別為100、200、300、400、500 μL時(shí)萃取效率的變化。結(jié)果表明，當(dāng)乙睛的體積為300 μL時(shí)8種有機(jī)磷農(nóng)藥的萃取效率最高。

2.2.3 萃取時(shí)間優(yōu)化 萃取時(shí)間是指加入萃取劑/分散劑體系到樣品溶液中后渦旋混勻的時(shí)間，混旋是為了增加萃取劑在水相中的分散度，保證萃取效果的完全與穩(wěn)定。試驗(yàn)中分別考察了混旋時(shí)間為30、45、60、75、90、120 s對(duì)8種農(nóng)藥萃取效率的影響，結(jié)果顯示當(dāng)混勻時(shí)間為90 s時(shí)萃取效率最高，故選擇混旋時(shí)間為90 s。

2.2.4 鹽濃度的影響 在體系中加入鹽會(huì)影響待測(cè)物在水相中的溶解度，從而影響萃取效率。試驗(yàn)中分別考察了加入0、3%、6%、9%、12%、15%的NaCl溶液對(duì)分析農(nóng)藥萃取效率的影響，結(jié)果顯示加入NaCl后萃取效率要明顯高于未加入NaCl，且在加入含鹽量為6%時(shí)對(duì)各農(nóng)藥的萃取效率最高。

試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，在優(yōu)化的液相微萃取條件下，對(duì)中等極性至弱極性的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥提取效果較好，故該方法更適合于極性偏弱的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥的提取。

2.3 線性范圍、富集因子、定量限、檢測(cè)限

取“1.2”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋配制含8種農(nóng)藥的系列對(duì)照品溶液，采用“1.3”方法微萃取后，進(jìn)行LC-MS測(cè)定，以峰面積（y）與對(duì)照品濃度（x）進(jìn)行線性回歸，得到各種農(nóng)藥的線性方程及其相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。由表2可知，8種有機(jī)磷農(nóng)藥在各自的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸系數(shù)在0.993 7～0.999 7。通過(guò)空白黨參基質(zhì)加標(biāo)，以信噪比（S/N=3）測(cè)定各農(nóng)藥的檢測(cè)限在0.006～1.300 μg/kg；以信噪比（S/N=10）測(cè)定各農(nóng)藥的定量限在0.02～5.00 μg/kg，表明該方法的檢測(cè)限均低于中國(guó)藥典中中草藥農(nóng)藥殘留量的最高規(guī)定[9]。分散液相微萃取方法中的富集倍數(shù)按EF=■（Csed待測(cè)物在沉積相中的濃度，C0待測(cè)物在樣品中的原始濃度）計(jì)算。

2.4 回收率和精密度

在黨參空白基質(zhì)中添加高、中、低3個(gè)濃度水平的對(duì)照品混合溶液，按“1.3”方法萃取，每個(gè)添加水平重復(fù)測(cè)定5次（表3）。由表3可知，3個(gè)添加水平的平均回收率為76.81%～110.25%，RSD為1.06%～8.60%。

2.5 樣品檢測(cè)結(jié)果

采用上述建立的方法對(duì)貴州省7個(gè)不同產(chǎn)地的黨參樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示部分產(chǎn)地中有樂(lè)果、敵敵畏、馬拉硫磷、二嗪農(nóng)4種有機(jī)磷農(nóng)藥被檢出，但均低于食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中農(nóng)藥最大殘留限量。

3 小結(jié)

建立了分散液相微萃取-液相質(zhì)譜法快速測(cè)定黨參中8種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。該方法中樣品的微萃取方法相較于其他方法在樣品前處理時(shí)間方面大大縮短，且有機(jī)溶劑使用量少、富集倍數(shù)高、操作簡(jiǎn)便，可用于快速提取中藥材中微量甚至痕量級(jí)的農(nóng)藥殘留，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，靈敏度高，可用于黨參藥材中多種有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

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