王淑靜 范文成 王剛 李寧

津力達顆粒為石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司研發(fā)的中藥顆粒劑新藥, 現(xiàn)已收載于2015年版《中國藥典》第一部, 處方由苦參、人參、黃精、丹參、黃連、淫羊藿等17味中藥組成,具有益氣養(yǎng)陰, 健脾運津, 臨床用于治療2型糖尿?。?］。本文采用UPLC法對其苦參堿進行了定量研究, 為本公司該品種質量監(jiān)控提供了新的檢測手段。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 超高效液相色譜儀( Waters, ACQuity H-class型,TUV檢測器)；色譜柱(氨基柱：Thermo , APS-2 HYPERSIL,100 mm×2.1 mm, 3 μm)；超聲波清洗器KQ-500E(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑 苦參堿對照品(批號：110805-201709, 購自中國食品藥品檢定研究院)；津力達顆粒(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司 , 批號 ：A1510010、A1605002、A1706002、A1804011、A1804012、A1805001)；磷酸為優(yōu)級純, 其他試劑均為色譜純。

2 方法與結果［1-3］

2.1 色譜條件 以乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液(88∶6∶6 )為流動相, 檢測波長 210 nm, 流速 0.2 ml/min, 進樣體積為2 μl, 理論塔板數(shù)按苦參堿計算應≥7000。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液制備 取供試品適量, 研細, 精密稱取約1.0 g, 置具塞三角瓶中, 精密加入85%甲醇50 ml, 密塞, 精密稱定重量, 超聲30 min, 放至室溫, 再精密稱定重量, 用85%甲醇補足減失的重量, 搖勻, 濾過, 精密量取續(xù)濾液25 ml, 蒸干, 殘渣加水1 ml使溶解, 轉移至中性氧化鋁柱(120～150目,4 g, 柱內徑1 cm), 再用甲醇少量多次洗脫至10 ml量瓶中, 并用甲醇稀釋至刻度, 搖勻, 濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品15.82 mg,置100 ml容量瓶中, 加乙腈-無水乙醇(80∶20)使溶解, 并稀釋至刻度, 搖勻, 作為對照品溶液。再精密吸取10 ml于100 ml量瓶中, 加乙腈-無水乙醇(80∶20)稀釋至刻度, 搖勻, 作為線性對照品溶液。

2.3 線性關系考察 精密吸取線性對照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0 μl注入UPLC, 按2.1色譜條件進行測定。以進樣量(μg)為橫坐標(X), 峰面積(Y)為縱坐標, 進行線性回歸 , 回歸方程為：Y=10182X-4361, r=0.9992, 實驗結果表明：苦參堿在7.910～47.64 μg范圍內線性關系良好。見表1。

表1 線性考察結果

2.4 精密度考察 吸取2.2.2中的對照品溶液, 按2.1色譜條件連續(xù)進樣5次, 苦參堿峰面積的RSD為0.58%, 說明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 供試品溶液放置0、4、8、12、16、20、24 h, 按2.1色譜條件進行測定, 苦參堿峰面積的RSD 為1.23%, 說明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.6 重復性實驗 取津力達顆粒(批號：A1804012), 按2.2.1制備供試品溶液, 平行制備6份, 按2.1色譜條件進行測定,苦參堿峰面積的RSD 為0.67%, 說明該方法的重復性良好。

2.7 回收率試驗 取已知含量的津力達顆粒(批號：A1804012), 研細, 精密稱取約0.5 g, 平行稱取9份, 按對照品加入量與供試品中苦參堿量之比1.5∶1、1∶1、0.5∶1, 按2.2.1制備供試品溶液, 按2.1色譜條件進行測定, 平均回收率為99.6%, 測定結果見圖1, 圖2 , 表2。

圖1 苦參堿對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

表2 回收率試驗結果(n=9)

2.8 陰性試驗 按處方和工藝制備除苦參外的陰性樣品,按2.2.1制備陰性供試品, 分別吸取供試品溶液、對照品溶液,陰性供試品溶液, 按2.1色譜條件進行試驗, 結果表明：陰性樣品無干擾。

2.9 樣品含量測定 取6批津力達顆粒, 按2.1和2.2.1測定含量, 結果見表3。

表3 樣品含量測定結果(%)

3 討論

3.1 制備對照品溶劑的考察 在日常生產檢測該品種過程中, 發(fā)現(xiàn)不同廠家的色譜柱, 經常出現(xiàn)對照品和樣品保留時間漂移的現(xiàn)象, 為解決此問題, 對制備對照品的溶劑進行了考察, 分別用甲醇、無水乙醇、乙腈、鹽酸-甲醇(1∶25)、乙腈-無水乙醇(80∶20)配制對照品, 發(fā)現(xiàn)除乙腈-無水乙醇(80∶20)溶劑外, 其余溶劑配制的對照品, 苦參堿的保留時間一直在漂移, 與供試品的保留時間差異較大, 難以穩(wěn)定下來。故選擇乙腈-無水乙醇(80∶20)作為制備對照品的溶劑。

3.2 氧化苦參堿含量的考察 本文對效期內樣品的氧化苦參堿含量也進行了考察, 發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿的含量較低, 且隨著留樣時間的增長, 氧化苦參堿含量在逐漸降低, 苦參堿的含量在逐漸增大, 說明氧化苦參堿轉化為苦參堿。因此, 本文只對苦參堿的含量測定進行了定量研究。曾有文獻報道［4］,氧化苦參堿與原兒茶醛類還原性物質作用, 轉化為苦參堿,表3的試驗結果也證實了這一點。

由于我公司該品種生產量較大, 采用UPLC法測定苦參堿的含量, 既快速, 又準確, 大大提高了工作效率, 同時為該產品增加了新的檢測手段。