姬勁銳 鎬振選 劉 靜 韓文杰 劉恒亮

激酶非催化的C-葉域蛋白質(zhì)1(kinase non-catalytic C-lobe domin containing 1，KNDC1) 是最新發(fā)現(xiàn)的蛋白，其功能與(ras guanyl-nucleotide exchange factor,RasGEF)活性相關(guān)，在很多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的中扮演重要角色[1]。前期研究表明very-KIND的RasGEF活性通過(guò)c-JUN氨基末端激酶1(c-Jun N-terminal kinase 1, JNK1)和/或細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)，經(jīng)由Ras-Raf-MAPK通路誘導(dǎo)微管關(guān)聯(lián)蛋白2(recombinant microtubule associated protein 2,MAP2)的磷酸化，MAP2磷酸化后與微管結(jié)合的活性增加，可以促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞樹(shù)突的長(zhǎng)度增加，研究還發(fā)現(xiàn)抑制或敲低very-KIND的表達(dá)可以促進(jìn)培養(yǎng)中的小腦顆粒細(xì)胞和海馬神經(jīng)元的樹(shù)突生長(zhǎng)，這表明其作為一種信號(hào)分子在發(fā)育過(guò)程中調(diào)控或者抑制神經(jīng)元樹(shù)突生長(zhǎng)[2-3],研究表明，敲除KNDC1能延緩人內(nèi)皮細(xì)胞衰老[4]。然而，KNDC1過(guò)表達(dá)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)功能的影響和分子機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)構(gòu)建KNDC1腺病毒表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染HUVECs，產(chǎn)生KNCD1過(guò)度表達(dá)的HUVECs，進(jìn)而探討其對(duì)HUVECs衰老的影響及分子機(jī)制。

材料與方法

1.細(xì)胞和試劑 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為本實(shí)驗(yàn)室從新生兒臍靜脈中分離。KNDC1腺病毒(Santa Cruz Biotechnology公司)。ECM培養(yǎng)液、胰蛋白酶(Invitrogene公司)。胎牛血清(PAA公司)。β一半乳糖苷酶染色試劑盒(上海碧云天公司)。青霉素、鏈霉素(華北制藥)。SOD、GPx 檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所)?？筀NDC1、抗β-actin(Santa Cruz Biotechnology 公司)。兔及鼠二抗(Cell Signaling Technology)。Trizol(Invitrogene公司)。RT-PCR試劑盒(TAKARA公司)。PCR引物(深圳華大基因)。

2. 細(xì)胞獲取和培養(yǎng) 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在無(wú)菌條件下從北京醫(yī)院新生兒臍帶中分離后用含5%胎牛血清的M199培養(yǎng)基(HyClone 公司)在37.5℃、5% CO2孵箱(Thermo 公司)中傳代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞為0代(P0)，然后第一代為1代(P1)。傳代數(shù)定義為隨后的傳代次數(shù)。培養(yǎng)基每2或3d更換一次，待細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿培養(yǎng)基80%～90%時(shí)以0.125%胰蛋白酶消化后傳代培養(yǎng)。待細(xì)胞傳代6次后被接種在6孔培養(yǎng)板上。這項(xiàng)研究是由北京醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行。所有參與者監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書(shū)。

3. 腺病毒轉(zhuǎn)染 KNDC1腺病毒交由上海Geneway生物科技公司合成。將第六代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分為三組：①空白對(duì)照組；②陰性對(duì)照組，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染空白腺病毒；③K30/60/90，實(shí)驗(yàn)組，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染30/60/90 pfu/cell腺病毒載體。

4. RNA表達(dá)分析 內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)上述處理后，用TRIZOI試劑提取每組細(xì)胞總RNA后通過(guò)qPCR檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的KNDC1的mRNA的表達(dá)。檢測(cè)過(guò)程中以GAPDH作為內(nèi)部參考，通過(guò)比較循環(huán)閾值(CT)計(jì)算相關(guān)mRNA的表達(dá)水平。CT值的含義是：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。因此每個(gè)模板的CT值與該模板的起始拷貝數(shù)存在負(fù)性關(guān)系，即起始拷貝數(shù)越多，CT值越小，使用Sequence Detector System software version 2.1進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

5. SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色 ECM培養(yǎng)基中的第6～10代內(nèi)皮細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，內(nèi)皮細(xì)胞被轉(zhuǎn)染不同濃度的KNDC1腺病毒后，孵育48h后，吸除細(xì)胞培養(yǎng)基，用磷酸鹽緩沖0.9氯化鈉溶液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗2次后在室溫下用固定液固定15min。除去固定液后，用PBS沖洗3次，每次3min，并用含40 mmol檸檬酸，磷酸鈉等組成的工作液染色，然后將在37°C下培養(yǎng)10h，用普通光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照：當(dāng)細(xì)胞處于衰老狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色者，即為β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性，然后計(jì)算出的細(xì)胞染色陽(yáng)性總數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分率，即為β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性率。實(shí)驗(yàn)共重復(fù)3次。

6. Westemblot檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白 培養(yǎng)瓶中的內(nèi)皮細(xì)胞被冷的PBS充分沖洗兩次，棄去PBS洗液，每瓶?jī)?nèi)皮細(xì)胞加120μL的蛋白裂解液(1mL RIPA裂解液加5μL蛋白酶抑制劑100mmol)，均勻滴入內(nèi)皮細(xì)胞上，使用干凈的刮棒將蛋白裂解液分布均勻，將其于冰上，待裂解30min后收集細(xì)胞裂解液，放置離心機(jī)中在4℃條件下，以12 000r/min,離心20min，收集上清液后獲得胞漿蛋白。蛋白質(zhì)濃度用BCA試劑盒使用Bio-Rad蛋白法測(cè)定。相同蛋白質(zhì)量(30μg/泳道)用10% SDS-PAGE分離并轉(zhuǎn)移到PVDF薄膜上。短暫清洗后，將PVDF膜置于脫脂牛奶封閉液中，室溫封閉30min，將PVDF膜分別放進(jìn)以下新鮮配制的一個(gè)或多個(gè)1∶1 000稀釋原代兔抗體培養(yǎng)：KNDC1、p53、p-p53等。在4℃條件下,孵育原代抗體并與相應(yīng)的山羊抗兔二抗體孵育1h。蛋白條帶用高性能的放射自顯影膠片觀察，化學(xué)發(fā)光試劑曝光后用凝膠成像分析系統(tǒng)分析。采用圖像分析系統(tǒng)對(duì)western印跡結(jié)果進(jìn)行分析。

圖1P1～5 SA-β-gal染色細(xì)胞衰老情況;B:PCR檢測(cè)KNDC1的mRNA水平;C:western blot檢測(cè)KNDC1的表達(dá)水平,注:與P1比較,*P<0.05

7. 細(xì)胞抗氧化酶測(cè)定 體內(nèi)的主要酶性抗氧化劑包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase, GPX)。哺乳動(dòng)物SOD有三種同工酶，存在于胞漿和細(xì)胞膜中的含銅與鋅超氧化物歧化酶(CuZn- Superoxide dismutase, CuZn-SOD)，線粒體基質(zhì)中的含錳超氧化物歧化酶(Mn-Superoxide dismutase, Mn-SOD)以及分泌到細(xì)胞外的細(xì)胞外超氧化物歧化酶(extracellular superoxide dismutase, EcSOD)。大部分EcSOD錨在細(xì)胞表面硫酸肝素蛋白聚糖和組織間隙機(jī)制，但也存在于細(xì)胞外液中。因?yàn)镺2-難以穿過(guò)細(xì)胞膜，SOD同工酶主要在他們各自的部位發(fā)揮保護(hù)作用，催化O2-生成H2O2，再由過(guò)氧化氫酶催化生成水和氧氣，進(jìn)而清除氧代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的毒害作用。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase, GPX)主要是在胞漿和線粒體基質(zhì)中，GPX系統(tǒng)是水溶性的，膜脂過(guò)氧化生成的磷脂氫過(guò)氧化物只在受到磷脂酶A2水解成游離的脂氫過(guò)氧化物后才能與之反應(yīng)。如同SOD有EcSOD一樣，GPX也有細(xì)胞外谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(extracellular glutathione peroxidase, EcGPX)，它不但能催化H2O2和烷氫過(guò)氧化物還原，還能催化磷脂氫過(guò)氧化物還原，它在保護(hù)細(xì)胞外液成份和細(xì)胞表面免受過(guò)氧化物損傷方面起重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分光光度法檢測(cè)各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中SOD活性和GPX含量。

8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,三組比較采用單因素方差分析比較，兩組間比較采用SNK方法進(jìn)行。 以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1. 體外培養(yǎng)的不同代次內(nèi)皮細(xì)胞的改變 衰老細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，具有典型的增大、扁平的形態(tài)特點(diǎn)。隨著細(xì)胞代齡的增加，SA-β-gal染色顯示衰老內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目逐漸增多(圖1P1～5)。觀察KNDC1是否與正常細(xì)胞的衰老有關(guān)，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞不同代次的KNDC1表達(dá)水平用qPCR和Western blot分析，結(jié)果示隨著人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞代次的增加，KNDC1轉(zhuǎn)錄水平(圖1-B)和表達(dá)水平升高(圖1-C)。

2.各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞KNDC1轉(zhuǎn)錄與表達(dá)情況 為了進(jìn)一步探討KNDC1與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老的關(guān)系，我們通過(guò)對(duì)第六代內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒后發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞KNDC1 mRNA水平較對(duì)照組增高239%～344% (P<0.05)。與之類似的是，KNDC1蛋白表達(dá)量也出現(xiàn)了顯著的增高(P<0.05)，并且呈現(xiàn)劑量反應(yīng)性增高。①Werstern blot 顯示 KNDC1 在各劑量實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量均明顯增高。②與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，30epu/cell、60epu/cell、90epu/cell KNDC1腺病毒實(shí)驗(yàn)組KNDC1蛋白表達(dá)量分別增高了2.2、2.8及3.6倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③30epu/cell、60epu/cell、90epu/cell KNDC1腺病毒實(shí)驗(yàn)組KNDC1 mRNA表達(dá)量是空白對(duì)照組的2.4、2.6及3.4倍，與空白對(duì)照組比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖2)。

圖3 轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒后SA-β-gal染色情況 注：C 空白對(duì)照組；A 陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染空白腺病毒；K30/60/90 實(shí)驗(yàn)組， 轉(zhuǎn)染30/60/90epu/cell KNDC1腺病毒

圖2 KNDC1的轉(zhuǎn)錄水平與表達(dá)

3.各組內(nèi)皮細(xì)胞β-半乳糖苷酶染色情況 KNDC1過(guò)表達(dá)能顯著促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老，表明與對(duì)照細(xì)胞相比KNDC1過(guò)表達(dá)的細(xì)胞具有更高的SA-β-gal染色陽(yáng)性率。本研究轉(zhuǎn)染30epu/cell空白腺病毒、30epu/cell、60epu/cell、90epu/cell KNDC1腺病毒作用于HUVECS 24h，隨著KNDC1腺病毒濃度的增加，衰老細(xì)胞比例逐漸增多(P<0.01)，顯出明顯的劑量依賴性，各組衰老細(xì)胞比例分別為(6.2±1.3)% (C), (8.2±0.3)% (A), (26.3±2.5)% (K30), (62.9±2.8)% (K60) and(55.3±5.8)% (K90)。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組衰老細(xì)胞比例均較空白對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)組60epu/cell組與30epu/cell組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與90epu/cell組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此下面實(shí)驗(yàn)中KNDC1腺病毒實(shí)驗(yàn)組均轉(zhuǎn)染60epu/cell KNDC1腺病毒，見(jiàn)圖3。

4.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞KNDC1過(guò)表達(dá)對(duì)p53及磷酸化p53活性的影響 為了進(jìn)一步探討在HUVECs衰老過(guò)程中相關(guān)衰老基因的參與，我們通過(guò)免疫印跡分析檢測(cè)其磷酸化形式的活化。我們發(fā)現(xiàn)p-p53作為細(xì)胞周期的一個(gè)重要的抑制劑，其表達(dá)顯著增加，也觀察到KNDC1腺病毒實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組對(duì)比(244.3±19.5)vs.(113.5±9.0)，與空白對(duì)照組相比，KNDC1腺病毒實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞p53表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，磷酸化p53較空白對(duì)照組有顯著性增高(P<0.05)這表明，p53通路可能是一個(gè)調(diào)節(jié)HUVECs衰老過(guò)程的重要中介。詳見(jiàn)圖4。

5.轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化酶SOD及GPx活性的影響 我們以前的研究表明，敲除KNDC1可通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)來(lái)延遲HUVECs衰老。在本實(shí)驗(yàn)中我們驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SOD和GPx的變化，轉(zhuǎn)染KNDC1 24h后，內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活性均明顯降低，GPx活性為(0.82±0.062)，SOD活性為(0.84±0.079)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通過(guò)這樣研究我們發(fā)放KNDC1過(guò)度表達(dá)的內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)抗氧化劑(SOD或Gpx)和刺激活性氧(ROS)的產(chǎn)生來(lái)顯著增加細(xì)胞衰老進(jìn)程。詳見(jiàn)圖5。

圖4 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞KNDC1過(guò)表達(dá)對(duì)P53及磷酸化p53活性的影響 注：C: 空白對(duì)照組；A: 陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染空白腺病毒；K: 實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染 60epu/cell KNDC1腺病毒

圖5 轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化酶SOD及GPx活性的影響注：C: 空白對(duì)照組；A: 陰性對(duì)照組，轉(zhuǎn)染空白腺病毒；K:實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染60epu/ cell KNDC1腺病毒

討 論

增齡是冠狀動(dòng)脈性疾病(CAD)的重要危險(xiǎn)因素，而血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老在其發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用[5]。衰老細(xì)胞表現(xiàn)出與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶(SA-β-半乳糖苷酶)染色陽(yáng)性、扁平細(xì)胞形態(tài)和基因表達(dá)模式等特征[6]。

KNDC1作為一種新型RasGEF蛋白，已被認(rèn)為是一個(gè)與細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白[7]研究發(fā)現(xiàn)KNDC1過(guò)度表達(dá)抑制海馬神經(jīng)元和小腦顆粒細(xì)胞樹(shù)突的生長(zhǎng)，而敲除KNDC1可促進(jìn)海馬神經(jīng)元和小腦顆粒細(xì)胞樹(shù)突長(zhǎng)度的增加[8]。然而，KNDC1對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控功能和機(jī)制還不清楚。由于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)的有限的分裂能力被用建立生物衰老模型[9]。因此，在本研究中，體外培養(yǎng)HUVECs作為生物衰老模型，觀察KNDC1對(duì)衰老的影響。因此，在本研究中，通過(guò)體外培養(yǎng)HUVECs建立生物衰老模型，觀察KNDC1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞衰老的影響，探討其導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞衰老的分子機(jī)制。在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)(24h)KNDC1腺病毒轉(zhuǎn)染HUVECs導(dǎo)致衰老。隨著傳代次數(shù)的增加，衰老的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量也增加(圖1-A)，SA-β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性數(shù)量增加(圖2)，KNDC1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平(圖1-B)和表達(dá)水平增加(圖1-C)。

為了進(jìn)一步探討KNDC1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞衰老影響，我們采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，在實(shí)驗(yàn)中通過(guò)同源重組法重組腺病毒獲得含有KNDC1基因腺病毒載體。然后將含KNDC1基因的腺病毒載體轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中。通過(guò)比較不同劑量KNDC1腺病毒轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率，我們發(fā)現(xiàn)，60pfu /cell組與90pfu /cell組陽(yáng)性率相似，但是明顯高于30pfu /cell組。RT-PCR和Western blot顯示在24h后，KNDC1腺病毒載體組mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯高于空載體組和空白對(duì)照組，差異有顯著性(P<0.05，圖2)。據(jù)觀察，當(dāng)轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒載體的內(nèi)皮細(xì)胞KNDC1表達(dá)上調(diào)時(shí)，其細(xì)胞典型的形態(tài)較同代次的對(duì)照組發(fā)生顯著改變，包括：體積增大，多核化和更高的SA-β-gal染色陽(yáng)性率。

KNDC1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)密切相關(guān)基因(p-p53)表達(dá)的改變，這與之前的研究一致[10]。以前的研究證實(shí)p53是DNA損傷反應(yīng)的調(diào)節(jié)因子，p53/p21被認(rèn)為在過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)、休止和復(fù)制衰老中起作用[11]。轉(zhuǎn)錄因子p53無(wú)疑是抑制衰老的最重要的蛋白之一，其多個(gè)功能作用于維持基因組的完整性[12]，特定環(huán)境下執(zhí)行的特定生物反應(yīng)包括短暫或永久性細(xì)胞周期阻滯到細(xì)胞死亡[13]。在這項(xiàng)研究中，Western blot實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)染KNDC1腺病毒載體的內(nèi)皮細(xì)胞，p53的表達(dá)無(wú)明顯變化，但是磷酸化p53顯著增加。據(jù)報(bào)道，p53蛋白穩(wěn)定性的調(diào)控主要是一些蛋白修飾，p53蛋白的磷酸化、乙酰化或磷酸化修飾均起到穩(wěn)定p53的作用[14]。因此磷酸化p53增高說(shuō)明KNDC1通過(guò)調(diào)節(jié)p53蛋白修飾，增加功能性p53的表達(dá)量，繼而激活下游基因，而發(fā)揮致衰老作用[15]。

最近研究表明，p53通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝和氧化應(yīng)激來(lái)發(fā)揮其抗增殖作用[16]。細(xì)胞內(nèi)ROS水平的增加是與衰老相關(guān)的應(yīng)激因子之一[17]。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，磷酸化p53水平增加，這將導(dǎo)致ROS的劑量依賴性增加產(chǎn)生。因此，p53通路的激活可能是對(duì)ROS誘導(dǎo)的DNA損傷的應(yīng)答[18]。急性應(yīng)激時(shí)，p53可以下調(diào)抗氧化酶的表達(dá)，如SOD和GPX，此外，p53還表現(xiàn)出促氧化的活性，可能會(huì)加劇細(xì)胞應(yīng)激狀態(tài)下的氧化應(yīng)激反應(yīng)[19]。ROS也可以激活p53和啟動(dòng)p53依賴的應(yīng)激反應(yīng)通路，如細(xì)胞周期阻滯，衰老和凋亡[20]。因此，p53和ROS正反饋循環(huán)促使應(yīng)激細(xì)胞凋亡或衰老。此外，p53的活化引發(fā)一系列下游轉(zhuǎn)錄事件導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和衰老。這些結(jié)果表明，KNDC1過(guò)表達(dá)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞衰老，可能在細(xì)胞衰老的進(jìn)展中起重要作用。p53被證明是一個(gè)誘導(dǎo)KNDC1相關(guān)細(xì)胞衰老的重要基因。

綜述所述，KNDC1過(guò)表達(dá)抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)其衰老。關(guān)于作用機(jī)制，，KNDC1過(guò)表達(dá)通過(guò)啟動(dòng)p53信號(hào)通路增加ROS表達(dá)。p53-ROS正反饋環(huán)在調(diào)控KNDC1介導(dǎo)的細(xì)胞衰老中發(fā)揮重要作用，通過(guò)增加磷酸化p53蛋白的表達(dá)，KNDC1促進(jìn)p53表達(dá)并放大p53-ROS反饋環(huán)的作用，進(jìn)而加速細(xì)胞衰老的進(jìn)程。因此，KNDC1在介導(dǎo)細(xì)胞衰老過(guò)程中的完整信號(hào)通路應(yīng)該繼續(xù)研究，這將為衰老相關(guān)疾病提供新的治療方向。