王耿杰，馬良赟，沈宇舟,廖澤飛

(泉州市180醫(yī)院 胸外科，福建 泉州362000)

研究發(fā)現(xiàn)程序性死亡因子-1(PD-1)、程序性死亡1-配體(PD-L1) 在多種腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中均有表達(dá)，如黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌、腎母細(xì)胞瘤等，腫瘤組織中過度表達(dá)的PD-L1 通過與PD-1結(jié)合下調(diào)抗腫瘤免疫反應(yīng)[1,2]。目前已有多種免疫藥物在臨床上應(yīng)用于多種惡性腫瘤，如pembrolizumab是一種高親和力的結(jié)合PD-1的人源化IgG4-kappa抗體用于治療晚期黑色素瘤，muvolumab用于治療鱗狀細(xì)胞肺癌，并取得美國食品藥品管理局(FDA)通過及認(rèn)證[3]；食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌。我國是世界上食管癌的高發(fā)地區(qū)之一，每年平均病死約15萬人，其發(fā)病率和死亡率各地區(qū)差異很大，閩南地區(qū)是食管癌高發(fā)地區(qū)之一。雖然國內(nèi)外就PD-1、PD-L1的機制尚不清楚，但有關(guān)于PD-1、PD-L1的表達(dá)情況與其他惡性腫瘤預(yù)后關(guān)系的報道[4,5]。因此，研究食管癌患者PD-1、PD-L1的表達(dá)情況與患者的臨床病理特征及對預(yù)后的影響，對食管癌患者的治療將產(chǎn)生重要的影響,現(xiàn)將研究報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年1月至2015年1月收治110例食管癌患者作為研究對象，其中男97例，女13例；年齡：<55歲24例、≥55歲86例；腫瘤直徑：>3 cm 79例、≤3 cm 31例；TNM分期標(biāo)準(zhǔn)按照第7版(2009)分期：Ⅰ-Ⅱ期61例、Ⅲ期49例；病理類型：鱗癌86例、腺癌24例；分化程度：高分化33例、中分化42例、低分化35例；腫瘤部位：上段28例、中段36例、下段46例；浸潤深度：肌層內(nèi)63例、肌層外37例；局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移65例。以健康體檢者110例為對照組，其中男100例，女10例，年齡：<55歲25例、≥55歲85例，兩組性別、年齡相匹配,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有可比性。

1.2病例入選標(biāo)準(zhǔn)

(1) 所有患者均經(jīng)病理檢查確診為食管癌；(2)入組前未經(jīng)過手術(shù)、化療、放療或其他生物治療；(3)無全身免疫系統(tǒng)疾病；(4)均接受標(biāo)準(zhǔn)的食管癌根治術(shù)治療；(5)均有完整的臨床、病理及隨訪資料；(6)患者知情同意。

1.3方法

所有入選者均經(jīng)胃鏡下留取食管組織，采用免疫組化方法檢測PD-1、PD-L1表達(dá)情況，試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，按照各試劑盒說明書進行，陽性對照采用已知陽性片，陰性對照用PBS替代。每張切片選取5個高倍視野，各計數(shù)100 個細(xì)胞，以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為PD-L1和PD-1陽性表達(dá)，綜合染色強度和陽性細(xì)胞比例進行計分，陽性細(xì)胞率≥51%記為3分、10%-50%記為2分、<10%記為1分；染色強度分為棕褐色(3分)、棕黃色(2分)、淡黃色(1分)、無著色(0分)，兩者得分相乘≤3分為陰性表達(dá)，>3分為陽性表達(dá)。

1.4觀察指標(biāo)

(1)比較不同病理類型、分化程度、腫瘤部位、腫瘤直徑、浸潤深度、臨床分期、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-1、PD-L1陽性表達(dá)率差異；(2)所有患者均以電話、信件等形式進行隨訪，隨訪截止日期為2017年12月30日，統(tǒng)計中位無進展生存時間(PFS)，采用K-M生存法分析PD-1、PD-L1表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1.5統(tǒng)計分析

采用SPSS19.0進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率表示，進行卡方分析，生存資料采用中位數(shù)表示，采用Kaplan-Meier法繪制患者的生存曲線,Log-rank法分析患者生存情況，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組間PD-1、PD-L1陽性表達(dá)率對比分析

觀察組和對照組PD-1陽性表達(dá)率分別為59.09%(65/110)和10.91%(12/110)，PD-L1陽性表達(dá)率分別為66.36%(73/110)和14.55%(16/110)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=56.124、60.260,P<0.01)。

2.2PD-1、PD-L1表達(dá)與食管癌的臨床病理特征的關(guān)系

不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、浸潤深度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-1陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.856、12.456、122.12、40.126、14.793，P<0.05)；不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、浸潤深度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-L1陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.788、18.113、121.786、49.038、13.650，P<0.05),見表1。

表1 PD-1、PD-L1表達(dá)與食管癌的臨床病理特征的關(guān)系

2.3PD-1、PD-L1表達(dá)與遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)系

102例患者獲得隨訪，隨訪時間截至2017年12月30日，隨訪時間為8-60個月，中位隨訪35.6個月。PD-1陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的中位無進展生存時間分別為24.3個月和39.8個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=45.813,P<0.01)。PD-L1陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的中位無進展生存時間分別為24.3個月和39.8個月個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=47.057,P<0.01)。見圖1、圖2。

3 討論

食管癌是世界上常見的惡性消化道腫瘤之一,以鱗狀細(xì)胞癌為主，在我國尤為高發(fā)，主要通過外科手術(shù)方法進行治療，術(shù)后局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的重要原因。目前，食管癌發(fā)生發(fā)展的分子機制尚未完全明確，PD-1、PD-L1在多種惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展中所起的作用逐漸受到了重視[6]，是近年來研究較熱的負(fù)性共刺激信號分子。PD-1與PD-L1結(jié)合后能夠激活PD-1/PD-L通路，抑制T淋巴細(xì)胞功能，誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫殺傷[7]，進而促進腫瘤形成，二者在惡性腫瘤組織陽性表達(dá)率明顯高于癌旁不典型增生組織或遠(yuǎn)癌的正常組織[8]，提示PD-1與PD-L1在實體惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。馬薇等[9]研究發(fā)現(xiàn)，PD-1與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。Muens[10]和Madore[11]等研究提示，PD-L1蛋白表達(dá)提示較差的預(yù)后。因而，本研究對PD-1與PD-L1在食管癌患者體內(nèi)的表達(dá)情況，分析其與食管癌的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以評價其對食管癌病情的評估及預(yù)后預(yù)測的價值。

圖1PD-1陽性表達(dá)組和陰性表達(dá)組的生存分析圖2PD-L1陽性表達(dá)組和陰性表達(dá)組的生存分析

本文研究結(jié)果顯示，觀察組和對照組PD-1陽性表達(dá)率分別為59.09%(65/110)和10.91%(12/110)，PD-L1陽性表達(dá)率分別為66.36%(73/110)和14.55%(16/110)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=56.124、60.260,P<0.01)。表明PD-1、PD-L1在食管癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

本文研究結(jié)果顯示，不同腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、浸潤深度、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PD-1及PD-L1陽性表達(dá)率存在差異。表明PD-1、PD-L1與食管癌病情發(fā)展和轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，可抑制T細(xì)胞的活化增殖，進而導(dǎo)致病情進展或轉(zhuǎn)移，可作為食管鱗癌病情程度的判斷指標(biāo)。

本文研究結(jié)果顯示，PD-1陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的中位無進展生存時間分別為24.3個月和39.8個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=45.813,P<0.01)。PD-L1陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的中位無進展生存時間分別為24.3個月和39.8個月個月，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=47.057,P<0.01)。表明PD-1、PD-L1陽性表達(dá)是導(dǎo)致食管癌患者預(yù)后不良的危險因素。

綜上所述，食管癌組織PD-1、PD-L1處于高表達(dá)，并與分化程度、腫瘤直徑、浸潤深度、臨床分期及局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，有助于評估患者病情發(fā)展變化情況，且PD-1、PD-L11表達(dá)情況在判斷患者預(yù)后也具有一定價值。