田秀娥，王永軍*，付明哲，趙彥儒，崔瑞賢

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動物科技學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.寧波市三生藥業(yè)有限公司，浙江 寧波 315000；3.慶陽市肉羊工程技術(shù)研發(fā)中心，甘肅 慶陽 745204 )

胚胎移植是良種家畜快速擴(kuò)繁常用的技術(shù)手段。供體同期發(fā)情與超數(shù)排卵是胚胎移植的一個重要環(huán)節(jié)。超排效果好則可望得更多的卵子或胚胎，對充分發(fā)揮優(yōu)秀母畜的繁殖潛力和提高胚胎移植效率具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。雖然該項(xiàng)技術(shù)的試驗(yàn)與研究已有幾十年的歷史，但仍然存在超排效果波動較大，影響因素較多的問題[1]。如供體年齡、重復(fù)超排次數(shù)[2]、供體發(fā)情周期的階段、產(chǎn)后時間長短、卵巢功能、季節(jié)[3]、激素種類與用量[4]、激素來源與卵巢狀態(tài)[5-8]等。其研究結(jié)果表明上述因素均會不同程度地影響羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵及胚胎移植效果。關(guān)于激素來源，一些研究人員采用進(jìn)口激素進(jìn)行超排處理，如苗玉青等[9]2004年比較了來自日本、加拿大、中國科學(xué)院動物研究所和寧波三生藥業(yè)生產(chǎn)的促卵泡激素(Follicle stimulating hormone,FSH)對杜泊羊超排效果，發(fā)現(xiàn)寧波生產(chǎn)的FSH效果最好。這些研究結(jié)果表明不同來源的激素超數(shù)排卵效果存在差異。隨著近年來胚胎移植在生產(chǎn)實(shí)踐中的大面積推廣和應(yīng)用，在超排過程中對進(jìn)口激素的用量也越來越大，而其價格逐年上漲，導(dǎo)致胚胎移植的成本進(jìn)一步增加。為了在不影響超排效果的前提下降低胚胎移植的成本，在羊胚胎移植超排時研究用國產(chǎn)激素取代進(jìn)口激素顯得尤為重要。本試驗(yàn)旨在以杜泊羊?yàn)檠芯繉ο?，分別用國產(chǎn)和進(jìn)口產(chǎn)品對其進(jìn)行同期發(fā)情和超數(shù)排卵處理，通過比較分析使用不同產(chǎn)品后的發(fā)情和超排效果以及經(jīng)濟(jì)性，解決綿羊胚胎移植推廣應(yīng)用過程中如何選擇性價比較高的產(chǎn)品問題，為以后羊養(yǎng)殖企業(yè)在實(shí)施超數(shù)排卵選擇激素時提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)羊的選擇與飼養(yǎng)管理

在甘肅某種羊場選擇中等體況、年齡和胎次一致的(均為2胎)健康杜泊綿羊18只作為試驗(yàn)用供體，試驗(yàn)羊采用常規(guī)飼養(yǎng)管理，自由飲水。

1.2 試驗(yàn)羊分組與處理程序

將選擇的試驗(yàn)用供體羊隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組，分別用國產(chǎn)和進(jìn)口產(chǎn)品進(jìn)行同期發(fā)情和超排處理，具體處理方案為：任意一天(記做D1)，兩組羊分別肌注氯前列醇鈉，D7分別放置進(jìn)口和國產(chǎn)陰道栓，從D16開始連續(xù)4 d，每天注射2次，兩組羊分別按照減量法肌肉注射進(jìn)口和國產(chǎn)FSH(進(jìn)口組第1次注射時需要換栓)，其總劑量分別為每只供體羊200 mg(10mL)和300單位，D19第7次超排注射的同時取栓，隨后觀察24 h內(nèi)供體的發(fā)情情況，24 h內(nèi)發(fā)情都視為超排處理有效。當(dāng)供體發(fā)情后每隔8 h配種一次直至發(fā)情結(jié)束，D24供體羊術(shù)前饑餓，D25手術(shù)沖胚并記錄每只供體卵巢上的黃體情況以及回收卵子或胚胎情況。本次試驗(yàn)所采用的程序及兩種產(chǎn)品的劑量均為前期相關(guān)試驗(yàn)優(yōu)化篩選而出。

1.3 材 料

進(jìn)口FSH：FOLLTROPIN-V(貝爾尼奇公司，400mg/瓶)；國產(chǎn)FSH(寧波三生藥業(yè)有限公司，批號：B161005，500單位/瓶);進(jìn)口孕激素陰道栓(Controlled internal drug release,CIDR)(貝爾尼奇公司，1.56 g孕酮/支);國產(chǎn)孕激素陰道栓(CIDR)(寧波三生藥業(yè)有限公司，0.3 g孕酮/支);氯前列醇鈉注射液，寧波三生藥業(yè)有限公司，2 mL/支(批號：S161007)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

分析統(tǒng)計(jì)超排處理有效率、回收率、羊均回收胚胎和卵子數(shù)、羊均回收胚胎數(shù)、羊均可利用胚胎數(shù)、胚胎利用率等指標(biāo)。試驗(yàn)所獲數(shù)據(jù)均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)法分析。平均數(shù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同來源激素處理對杜泊羊同期發(fā)情效果的影響

兩組羊分別用不同來源激素處理后其發(fā)情情況見表1。經(jīng)試情觀察發(fā)現(xiàn)兩組羊均于取栓后72 h內(nèi)全部發(fā)情，也就是說72 h內(nèi)的同期發(fā)情率均為100%。然而由于這些羊均在同期發(fā)情處理的同時進(jìn)行超數(shù)排卵處理，一般認(rèn)為24 h內(nèi)發(fā)情羊?yàn)槌盘幚碛行?，即超排有效，故試?yàn)只統(tǒng)計(jì)了取栓后24 h供體的發(fā)情情況，超過24 h發(fā)情的供體羊進(jìn)入正常配種。由表1知，兩個不同處理間超排處理有效率很接近，試驗(yàn)組高于對照組11.11個百分點(diǎn)，而統(tǒng)計(jì)上未達(dá)到顯著水平(P>0.05)。即便如此，此結(jié)果在相當(dāng)程度上說明國產(chǎn)產(chǎn)品對杜泊羊的發(fā)情及超排反應(yīng)效果良好。

2.2 不同來源激素處理杜泊羊超排和胚胎回收的影響

不同來源激素處理后杜泊羊超排和胚胎回收情況見表2、表3。供體發(fā)情只表明其有排卵，但具體排卵數(shù)的多少則需通過手術(shù)的方法直觀觀察其卵巢上的黃體數(shù)量、顏色及大小。由表2數(shù)據(jù)可知杜泊羊?qū)φ战M和試驗(yàn)組羊均黃體數(shù)分別為10.63個、14.11個(P<0.05)，國產(chǎn)激素處理組顯著高于進(jìn)口激素處理組；由于對照組有一只羊黃體數(shù)較少，其實(shí)際超排反應(yīng)率較試驗(yàn)組低12.5個百分點(diǎn)。表明經(jīng)激素處理后凡是發(fā)情的綿羊其超排效率均為國產(chǎn)產(chǎn)品顯著優(yōu)于進(jìn)口產(chǎn)品。

由表3可知，杜泊綿羊?qū)φ战M和試驗(yàn)組平均回收數(shù)、平均回收胚胎數(shù)、平均可用胚胎數(shù)以及胚胎可利用率分別為9.29 vs 10.56、8.83 vs 10.11、7.43 vs 9.78、98.11 vs 96.70，各指標(biāo)均為國產(chǎn)組高于進(jìn)口組，但差異均未達(dá)顯著水平(P>0.05)。進(jìn)一步分析表3數(shù)據(jù)還可以發(fā)現(xiàn)，兩組羊均不同程度出現(xiàn)未受精卵，占比9.4%～15.62%，提示在開展胚胎移植工作時應(yīng)高度重視發(fā)情供體的配種工作，采取各種措施提高供體母羊受配率以減少不必要的損失。

表1 不同來源激素處理對杜泊羊發(fā)情效果的影響Table 1 Effects of different treatment on estrus effect of dorper sheep

表2 不同處理方案對杜泊綿羊超數(shù)排卵效果影響Table 2 Effects of different treatments on superovulation of Dorper sheep

注：對照組中一只供體因只有2枚黃體，未回收胚胎。

Notes:In the control group, the embryos of a donor was not recovered because only two yellow bodies were observed.

表3 兩組羊胚胎回收及利用情況Table 3 Recovery and utilization of embryos with two groups

注：對照組有一只羊因生殖器官異常，未回收到胚胎。

Notes:One sheep in control group had abnormal reproductive organs,so no embryos are recovered.

2.3 不同處理方案費(fèi)用

本試驗(yàn)研究中所采用的不同產(chǎn)品的費(fèi)用情況見表4。從表4可知，在其他產(chǎn)品種類與數(shù)量一致的情況下，采用國產(chǎn)產(chǎn)品羊均總費(fèi)用較進(jìn)口產(chǎn)品便宜235元，性價比較高。

表4 不同來源產(chǎn)品費(fèi)用Table 4 Cost of products with different sources

注：表中僅列出兩處理組不同產(chǎn)品的費(fèi)用，其他所用相同產(chǎn)品未列入。

Notes:Cost of different products of two treatments are listed in the
Table, other similar products are not listed.

3 討 論

FSH即卵泡刺激素，是由動物腦垂體前葉嗜堿性細(xì)胞合成與分泌的一種糖蛋白激素。該激素是由α亞基和β亞基以非共價健結(jié)合組成的異二聚體，對雌性動物來說，其主要功能是促進(jìn)卵巢卵泡生長、卵泡顆粒細(xì)胞的增生以及雌激素的合成與分泌[10]。基于此，目前國內(nèi)外研究人員對FSH進(jìn)行了大量的研究。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，F(xiàn)SH已廣泛應(yīng)用于羊、牛等動物的超數(shù)排卵、同期發(fā)情以及胚胎移植等領(lǐng)域。為了提高其在這些領(lǐng)域的應(yīng)用效果，許多研究人員對不同來源的FSH對綿羊的超排效果進(jìn)行了研究。如張帆[5]用寧波產(chǎn)FSH對杜泊羊超排，結(jié)果每只獲可用胚胎7.8枚，高于魏建英等[6]羊均獲可用胚胎5.16枚的結(jié)果；李愛朵[8]用寧波產(chǎn)FSH對119只薩?？搜蜻M(jìn)行超排處理，結(jié)果平均每只供體羊獲胚胎10.18枚。易金云等[11]用10只杜泊綿羊進(jìn)行超排試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其平均可用胚為11.3枚。與本試驗(yàn)相比，這些研究結(jié)果超排結(jié)果不一，其原因可能與使用劑量、羊的年齡以及超排季節(jié)有關(guān)。

也有研究人員比較研究了進(jìn)口和國產(chǎn)激素對綿羊的超排效果，唐大偉等[12]2005年的研究結(jié)果表明，中科院產(chǎn)FSH對綿羊的超排效果好于加拿大產(chǎn)品，平均黃體數(shù)分別為7.2、5.0個，平均回收胚胎數(shù)分別為6.7、4.71枚，平均可用胚胎數(shù)分別為5.02、3.19枚，其研究結(jié)果均說明國產(chǎn)激素對綿羊品種有較好的超排效果，與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致。

用于超排的FSH均是從家畜腦垂體中提取的。商品FSH制劑中都含一定量的LH，不同廠家、同一廠家不同批次的FSH制劑中LH含量差異較大，導(dǎo)致FSH制劑的超排效果不穩(wěn)定，國內(nèi)外許多報(bào)道已證明了這一點(diǎn)[1]。上述研究結(jié)果表明，不論是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的激素，只要其效價穩(wěn)定，在適宜的劑量下，均可產(chǎn)生較好的超排效果。因此在生產(chǎn)中選擇激素產(chǎn)品時應(yīng)綜合考慮產(chǎn)品的效果和價格，理性選擇性價比高的產(chǎn)品。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，與進(jìn)口產(chǎn)品相比，國產(chǎn)激素產(chǎn)品性價遠(yuǎn)高于進(jìn)口產(chǎn)品，在對杜泊綿羊進(jìn)行超排處理時完全可以選擇國產(chǎn)產(chǎn)品。