肖麗華，傅慶萍，唐芹芳，顏冬梅，金浩，孫明忠

（東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鹽城醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇鹽城224001）

霍亂弧菌為革蘭陰性弧菌，棲居于海洋水產(chǎn)品及小海鮮類動(dòng)物腸道和體表。根據(jù)菌體脂多糖抗原的不同，目前可將其分為210多個(gè)血清群［1］，其中O1群和O139群是引起急性腸道傳染病的病原菌，感染后可導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉和嘔吐［2］。歷史上出現(xiàn)過的7次世界性霍亂大流行均由O1群引起。

2017年8月本實(shí)驗(yàn)室從1例膽囊結(jié)石患者血培養(yǎng)中分離出霍亂弧菌O1群小川型，并經(jīng)江蘇省疾病預(yù)防控制中心確證。因?yàn)閺难囵B(yǎng)中檢出霍亂弧菌O1群，國(guó)內(nèi)罕見［3］，現(xiàn)予以報(bào)告。

1 病例資料

患者，男，64歲，已婚，因右上腹痛伴發(fā)熱、皮膚黃染3 d就診?；颊邿o明顯誘因下出現(xiàn)右上腹持續(xù)性脹痛不適，逐漸加重，伴惡心嘔吐、畏寒發(fā)熱、尿黃、皮膚黃染，體溫最高39.0℃，大便2～3次／d，為黃色水樣便。入院時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)為13.22×109／L，中性粒細(xì)胞百分比為 93.3%，總膽紅素 93.28 μmol／L；CT檢查示膽囊結(jié)石，膽囊炎，膽總管擴(kuò)張。

入院后規(guī)范采集患者血標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，16 h后需氧瓶與厭氧瓶提示細(xì)菌生長(zhǎng)，及時(shí)轉(zhuǎn)種至血平板、巧克力平板和麥康凱平板。24 h后血平板上見濕潤(rùn)、光滑、具有綠色金屬光澤且呈β溶血的菌落生長(zhǎng)（圖1）；麥康凱平板上見光滑、邊緣整齊、不發(fā)酵乳糖菌落生長(zhǎng)。菌落涂片為革蘭陰性，弧形或逗點(diǎn)狀細(xì)菌（圖2）；挑取單個(gè)菌落制成懸滴，在鏡下呈中速或快速穿梭狀運(yùn)動(dòng)。全自動(dòng)微生物鑒定儀VITEK-2 Compact鑒定結(jié)果為霍亂弧菌，生物編號(hào)為0425611350506201，置信度94%。玻片法血清凝集試驗(yàn)（寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司）發(fā)現(xiàn)該分離株生理鹽水不自凝，O139群不凝，O1群多價(jià)凝集，小川型出現(xiàn)凝集，明確該分離株為霍亂弧菌O1群小川型。

參照臨床微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，該分離株對(duì)16種抗生素均敏感。左氧氟沙星的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）≤0.25μg／mL，頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素以及妥布霉素的MIC均≤1μg／mL，氨芐西林、氨芐西林舒巴坦和阿米卡星MIC均≤2μg／mL，哌拉西林他唑巴坦、頭孢唑林、頭孢替坦和亞胺培南均≤4μg／mL，呋喃妥因≤16μg／mL，復(fù)方新諾明≤20μg／mL。對(duì)患者行腹腔鏡下膽囊切除術(shù)后，予以環(huán)丙沙星等抗感染、保肝、補(bǔ)液對(duì)癥治療，生命體征平穩(wěn)，恢復(fù)良好，保肝抗炎后總膽紅素為18.74μmol／L，白細(xì)胞計(jì)數(shù)為 7.15×109／L，中性粒細(xì)胞百分比為69.9%。后續(xù)復(fù)查血培養(yǎng)3套，均未檢出細(xì)菌；同時(shí)送檢糞便標(biāo)本培養(yǎng)，未檢出霍亂弧菌。

圖1 血平板菌落形態(tài)

圖2 菌落涂片革蘭染色鏡檢（×1 000）

2 討論

O1群霍亂弧菌引起菌血癥的原因至今尚不明確，目前報(bào)道的菌株大多從免疫力低下的患者血液中分離。本例從膽囊結(jié)石患者血液中分離出O1群霍亂弧菌為江蘇報(bào)道的首例，其侵入血液途徑機(jī)制尚不清楚［4］。患者出生并生長(zhǎng)于江蘇鹽城，否認(rèn)有血吸蟲疫水疫區(qū)接觸史，否認(rèn)工業(yè)毒物、粉塵、放射性物質(zhì)等接觸史。發(fā)病前未接觸過海水、河水，未接觸過腹瀉患者，家人也未發(fā)生過腹瀉，同時(shí)否認(rèn)發(fā)病前曾生食或食用未經(jīng)煮熟的海產(chǎn)品或水產(chǎn)品，其居住地附近也未發(fā)生過水污染事件。

患者入院治療后總膽紅素逐漸下降至正常，推測(cè)黃疸的原因之一可能是O1群霍亂弧菌侵入血液。肝病或免疫力低下患者若被霍亂弧菌感染容易導(dǎo)致菌血癥或敗血癥。Restrepo等［5］研究指出hlyA編碼的霍亂溶血素在疾病的發(fā)生過程中可能起到一定作用，使得腸道中的霍亂弧菌通過腸黏膜侵入血液，提示霍亂弧菌的溶血能力也可能是重要的致病因素；同時(shí)，rtx編碼的細(xì)胞毒素可引起炎癥反應(yīng)［6］。本例患者初入院時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)為13.22×109／L，中性粒細(xì)胞百分比93.3%，治療后白細(xì)胞計(jì)數(shù)為7.15×109／L，中性粒細(xì)胞百分比為69.9%，恢復(fù)至正常；本例患者伴有發(fā)熱而沒有嚴(yán)重腹瀉，有待于進(jìn)一步研究其致瀉性毒力基因如 ctxA、ctxB、ace、cep、zot、tcpA和 cri等［7-8］。

研究發(fā)現(xiàn)不同血清群霍亂弧菌的毒力因子在外環(huán)境中容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。大多數(shù)非致病性霍亂弧菌經(jīng)過復(fù)雜的進(jìn)化和變異，可獲得毒力而有效地定殖在人類小腸并釋放腸毒素致??；同時(shí)非流行株和非產(chǎn)毒株也可感染人體引起腹瀉?；魜y弧菌毒力基因的分布特性為毒力因子的轉(zhuǎn)移提供了環(huán)境毒力貯存庫(kù)，成為霍亂持續(xù)流行的重要因素之一。