李 燕，顧志斌，鞠忠杰

（煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東煙臺264003）

近年來，在國家對食品安全嚴(yán)格把控，消費者對產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)注日益增加的大背景下，我國的葡萄酒質(zhì)量也得到顯著提升，在國家公布的抽查結(jié)果中葡萄酒的質(zhì)量合格率很高。但是，我國標(biāo)準(zhǔn)體系、方法更新速度快，也給葡萄酒生產(chǎn)帶來了不小的挑戰(zhàn)，使得企業(yè)不得不更多的關(guān)注葡萄酒的生產(chǎn)控制和質(zhì)量把關(guān)。

GB5009.97—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》于2016年9月20日實施以后，檢測機(jī)構(gòu)對葡萄酒中甜蜜素的測定由原來的氣相色譜法改為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1]，兩種方法的靈敏度有很大差別，新方法較原方法的檢出限[2]低了300多倍，這意味著原來未檢測出甜蜜素的葡萄酒，在新標(biāo)準(zhǔn)實施后，有可能會檢測出甜蜜素，從而造成產(chǎn)品不合格。為了了解新方法測定市售葡萄酒中甜蜜素的含量情況并對其進(jìn)行原因分析，本文對現(xiàn)有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，并采購了30個市售葡萄酒樣品進(jìn)行測試，對結(jié)果進(jìn)行分析和研究。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：30個干型葡萄酒，購于超市。

甲酸，色譜純；甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品，北京譚墨質(zhì)檢科技有限公司，純度99.5%；實驗室用水，二級水。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用10%空白樣品的水溶液，配制成系列濃度為2μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

儀器設(shè)備：LC-MS/MS AB5500，美國AB公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理

取葡萄酒5.00 mL于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，定容。0.2 μm濾膜過濾，上機(jī)。

1.2.2 LC-MS/MS條件

色譜柱：ZPRBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm，3.5μm)；流動相：甲醇+0.1%甲酸水溶液=30+70。

流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：35℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 條件優(yōu)化

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配制方式的選擇

由于葡萄酒樣品中含有一定的有機(jī)物，容易對目標(biāo)物造成較大干擾，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。利用與樣品基質(zhì)相近的陰性樣品水溶液（濃度與測試樣品保持一致）配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，能夠有效降低基質(zhì)干擾。利用純水配制的工作曲線測試樣品，回收率為60%～88%；而用陰性樣品水溶液配制的工作曲線測試樣品，回收率為80%～106%。

2.1.2 ICP-MS/MS質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過質(zhì)譜條件的優(yōu)化，使目標(biāo)物的響應(yīng)達(dá)到最佳。分析物質(zhì)量及分析條件見表1。

表1 分析物質(zhì)量及分析條件

2.2 方法線性及檢出限

利用優(yōu)化的質(zhì)譜條件，對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行分析，做線性回歸并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對應(yīng)的校正曲線見圖1，定性、定量離子色譜圖見圖2，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997，在0～30μg/L范圍內(nèi)線性良好。

對10%陰性樣品水溶液進(jìn)行測試，以3倍信噪比所對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度為方法檢出限，計算結(jié)果為0.02 mg/kg。

圖1 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 定量、定性離子色譜圖

2.3 精密度和回收率

吸取5.00 mL陰性樣品作為空白樣品于50 mL容量瓶中，同時做3個濃度梯度的加標(biāo)試驗，即10μg/L、30μg/L、100μg/L。同時做樣品空白及6個平行加標(biāo)試驗。計算方法的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。

表2 方法的回收率及精密度

2.4 樣品分析

對市售的30個國產(chǎn)干型葡萄酒樣品進(jìn)行了分析測試。從測試結(jié)果看，檢出甜蜜素的樣品有3個，含量分別是0.012 mg/L、0.18 mg/L和0.38 mg/L。其余樣品的測定值均低于方法檢出限。

從檢出的樣品分布看，市售的葡萄酒樣品絕大部分未檢出甜蜜素，但在檢出的樣品中甚至有規(guī)模較大的企業(yè)生產(chǎn)且市場銷量較高的產(chǎn)品；從含量范圍看，雖然有3個樣品經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測為陽性，但其濃度遠(yuǎn)低于氣相色譜法的檢出限[3-4]，且并不是人為添加的水平。以上說明這些產(chǎn)品的生產(chǎn)控制仍停留在原來的標(biāo)準(zhǔn)，并沒有因檢測方法的變更而加強(qiáng)對產(chǎn)品質(zhì)量控制，造成生產(chǎn)過程中的污染或帶入。經(jīng)調(diào)查、了解和分析，產(chǎn)品中污染甜蜜素原因，一方面是生產(chǎn)線和生產(chǎn)工具與配制酒或其他酒混用，將微量甜蜜素帶入葡萄酒中；另一方面，在葡萄種植和采摘過程中，生產(chǎn)工具的混用也可能造成最終產(chǎn)品的污染。

3 結(jié)論

本實驗對LC-MS/MS法測定葡萄酒中甜蜜素進(jìn)行了方法優(yōu)化，方法檢出限顯著低于現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法，且有效降低了基體干擾，線性范圍在0～100μg/L良好，回收率91%～102%，能夠滿足樣品測定的要求，樣品平行測定RSD小于3%。同時，利用本方法對30個葡萄酒樣品進(jìn)行的分析測試結(jié)果，能夠為企業(yè)生產(chǎn)的質(zhì)量控制，尤其是添加劑的監(jiān)控提供可靠數(shù)據(jù)支撐。同時找出可能造成污染的原因，為企業(yè)進(jìn)一步加強(qiáng)生產(chǎn)和質(zhì)量管理提供參考。