李 燕，顧志斌，鞠忠杰

（煙臺市食品藥品檢驗檢測中心，山東煙臺264003）

近年來，在國家對食品安全嚴格把控，消費者對產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)注日益增加的大背景下，我國的葡萄酒質(zhì)量也得到顯著提升，在國家公布的抽查結(jié)果中葡萄酒的質(zhì)量合格率很高。但是，我國標(biāo)準(zhǔn)體系、方法更新速度快，也給葡萄酒生產(chǎn)帶來了不小的挑戰(zhàn)，使得企業(yè)不得不更多的關(guān)注葡萄酒的生產(chǎn)控制和質(zhì)量把關(guān)。

GB5009.97—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》于2016年9月20日實施以后，檢測機構(gòu)對葡萄酒中甜蜜素的測定由原來的氣相色譜法改為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[1]，兩種方法的靈敏度有很大差別，新方法較原方法的檢出限[2]低了300多倍，這意味著原來未檢測出甜蜜素的葡萄酒，在新標(biāo)準(zhǔn)實施后，有可能會檢測出甜蜜素，從而造成產(chǎn)品不合格。為了了解新方法測定市售葡萄酒中甜蜜素的含量情況并對其進行原因分析，本文對現(xiàn)有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行改進和優(yōu)化，并采購了30個市售葡萄酒樣品進行測試，對結(jié)果進行分析和研究。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：30個干型葡萄酒，購于超市。

甲酸，色譜純；甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品，北京譚墨質(zhì)檢科技有限公司，純度99.5%；實驗室用水，二級水。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：用10%空白樣品的水溶液，配制成系列濃度為2μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

儀器設(shè)備：LC-MS/MS AB5500，美國AB公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理

取葡萄酒5.00 mL于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，定容。0.2 μm濾膜過濾，上機。

1.2.2 LC-MS/MS條件

色譜柱：ZPRBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm，3.5μm)；流動相：甲醇+0.1%甲酸水溶液=30+70。

流速：0.2 mL/min；進樣量：10μL；柱溫：35℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 條件優(yōu)化

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配制方式的選擇

由于葡萄酒樣品中含有一定的有機物，容易對目標(biāo)物造成較大干擾，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。利用與樣品基質(zhì)相近的陰性樣品水溶液（濃度與測試樣品保持一致）配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，能夠有效降低基質(zhì)干擾。利用純水配制的工作曲線測試樣品，回收率為60%～88%；而用陰性樣品水溶液配制的工作曲線測試樣品，回收率為80%～106%。

2.1.2 ICP-MS/MS質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過質(zhì)譜條件的優(yōu)化，使目標(biāo)物的響應(yīng)達到最佳。分析物質(zhì)量及分析條件見表1。

表1 分析物質(zhì)量及分析條件

2.2 方法線性及檢出限

利用優(yōu)化的質(zhì)譜條件，對標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進行分析，做線性回歸并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對應(yīng)的校正曲線見圖1，定性、定量離子色譜圖見圖2，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997，在0～30μg/L范圍內(nèi)線性良好。

對10%陰性樣品水溶液進行測試，以3倍信噪比所對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度為方法檢出限，計算結(jié)果為0.02 mg/kg。

圖1 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 定量、定性離子色譜圖

2.3 精密度和回收率

吸取5.00 mL陰性樣品作為空白樣品于50 mL容量瓶中，同時做3個濃度梯度的加標(biāo)試驗，即10μg/L、30μg/L、100μg/L。同時做樣品空白及6個平行加標(biāo)試驗。計算方法的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。

表2 方法的回收率及精密度

2.4 樣品分析

對市售的30個國產(chǎn)干型葡萄酒樣品進行了分析測試。從測試結(jié)果看，檢出甜蜜素的樣品有3個，含量分別是0.012 mg/L、0.18 mg/L和0.38 mg/L。其余樣品的測定值均低于方法檢出限。

從檢出的樣品分布看，市售的葡萄酒樣品絕大部分未檢出甜蜜素，但在檢出的樣品中甚至有規(guī)模較大的企業(yè)生產(chǎn)且市場銷量較高的產(chǎn)品；從含量范圍看，雖然有3個樣品經(jīng)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測為陽性，但其濃度遠低于氣相色譜法的檢出限[3-4]，且并不是人為添加的水平。以上說明這些產(chǎn)品的生產(chǎn)控制仍停留在原來的標(biāo)準(zhǔn)，并沒有因檢測方法的變更而加強對產(chǎn)品質(zhì)量控制，造成生產(chǎn)過程中的污染或帶入。經(jīng)調(diào)查、了解和分析，產(chǎn)品中污染甜蜜素原因，一方面是生產(chǎn)線和生產(chǎn)工具與配制酒或其他酒混用，將微量甜蜜素帶入葡萄酒中；另一方面，在葡萄種植和采摘過程中，生產(chǎn)工具的混用也可能造成最終產(chǎn)品的污染。

3 結(jié)論

本實驗對LC-MS/MS法測定葡萄酒中甜蜜素進行了方法優(yōu)化，方法檢出限顯著低于現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法，且有效降低了基體干擾，線性范圍在0～100μg/L良好，回收率91%～102%，能夠滿足樣品測定的要求，樣品平行測定RSD小于3%。同時，利用本方法對30個葡萄酒樣品進行的分析測試結(jié)果，能夠為企業(yè)生產(chǎn)的質(zhì)量控制，尤其是添加劑的監(jiān)控提供可靠數(shù)據(jù)支撐。同時找出可能造成污染的原因，為企業(yè)進一步加強生產(chǎn)和質(zhì)量管理提供參考。