何賢臣 劉丹陽 尹海富

1 鱖魚傳染性脾腎壞死病毒病

鱖魚是我國重要名特優(yōu)魚類之一，隨著人們對名貴水產(chǎn)品需求不斷增加，鱖魚養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展，產(chǎn)值逐年上升。1994年在廣東省暴發(fā)并逐漸傳播開來鱖魚病毒病，成為限制鱖魚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的制約因素，至今仍深度影響鱖魚產(chǎn)業(yè)。1997年吳淑勤等通過電鏡發(fā)現(xiàn)了病鱖脾臟中的病毒顆粒，病毒直徑約150nm，并證明該病毒能引起鱖魚大規(guī)模死亡。1998年何建國等通過回歸感染進一步證明了該病毒的病原性，并通過組織學研究發(fā)現(xiàn)鱖魚脾臟和腎臟是其感染的主要器官，且該病毒可導致鱖魚脾臟和腎臟壞死，因而命名為傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）。

2 ISKNV的形態(tài)結(jié)構(gòu)

1998年何建國等人根據(jù)該病毒為具囊膜20面體，細胞質(zhì)內(nèi)寄生，直徑大小為150nm等特點，認為ISKNV屬虹彩病毒科。核心含有一條線狀雙鏈DNA，基因組由111362個堿基組成，而且胞嘧啶（G）5端特征是高度甲基化，鳥嘌呤（C）和胞嘧啶（G）含量占54.78%。包括125個預(yù)測開放讀碼框ORF，與其他種類的虹彩病毒有高度同源性的ORF有35個，這些ORF主要與蛋白功能有關(guān)。

3 ISKNV的檢測方法

病毒病的診斷有病原分離、血清學、免疫學和分子技術(shù)四個不同的階段。常規(guī)的病毒分離，是指對動物進行攻毒感染實驗、及利用敏感細胞進行病毒培養(yǎng)和電鏡觀察，是一種對病毒進行分離培養(yǎng)、純化和對其致病能力進行研究的手段。常規(guī)血清學方法特異性雖高，但存在不敏感的缺點。近年來，隨著免疫印跡酶連免疫吸附、免疫熒光和膠體金等免疫方法的出現(xiàn)和發(fā)展，病毒的免疫學診斷已兼具特異性和靈敏性。若以ISKNV流行病學調(diào)查或者抗原、抗體的檢測作為目標，可采用免疫學診斷為主要方法，分子生物學檢測為輔。若以檢測ISKNV存在及其種類、病毒含量、隱性感染等為目的，則主要采用分子生物學方法。為使結(jié)果準確，必須結(jié)合多種檢測方法。

4 ISKNV的流行病學

由ISKNV分子流行病學結(jié)果可知，ISKNV宿主非常廣泛。海水魚類中已有6目、19科、52種魚類被檢出感染該病毒，平均感染率為14.6%，斜帶石斑、青斑、大黃魚、美國紅魚等種類都易流行ISKNV病害。淡水魚類中已有鱖魚、草魚、烏鱧、尼羅羅非魚、大口黑鱸等被檢出感染該病毒。養(yǎng)殖水體溫度在25℃～34℃時，感染ISKNV的鱖魚發(fā)病死亡率達90%以上，發(fā)病至死亡平均時間為17d，28℃～30℃則是健康養(yǎng)殖鱖魚發(fā)病的最危溫度，這與廣東省夏天氣溫高導致鱖魚ISKNV病發(fā)病率高的現(xiàn)象相吻合。在20℃時，健康養(yǎng)殖鱖魚則不發(fā)生ISKNV病害。

5 鱖魚ISKNV病的組織病理學

根據(jù)近年來在廣東省內(nèi)分離檢測到ISKNV感染的病料觀察得知，患病鱖魚典型癥狀：脾、腎腫大，呈紫黑色；肝呈白色，有出血點，花肝癥狀；鰓白色，貧血癥狀；腸內(nèi)充滿透明流晶樣液體。組織切片顯示，被ISKNV感染的鱖魚脾臟、頭腎細胞病變非常嚴重，可觀察到明顯的細胞腫大特征，且細胞核萎縮。電鏡下觀察顯示，脾臟、頭腎細胞中的細胞質(zhì)內(nèi)有大量病毒粒子。

6 ISKNV病的防治方法

鱖魚養(yǎng)殖戶慣用聚維酮碘、二氧化氯等化學藥物或氟苯尼考等抗生素進行預(yù)防和治療ISKNV病，但效果不佳。也有報道使用中草藥、黃芪多糖、維生素、免疫多糖等預(yù)防和治療ISKNV病，機理為激活鱖魚免疫系統(tǒng)，增加鱖魚細胞免疫和體液免疫，從而預(yù)防ISKNV病害發(fā)生，且具備副作用小、藥殘低等優(yōu)點。ISKNV致病的誘發(fā)或協(xié)同因子包括水體理化指標、養(yǎng)殖模式、飼養(yǎng)管理、氣候突變、病原感染、近親繁殖種質(zhì)退化等。預(yù)防鱖魚ISKNV病最安全有效的方法是免疫預(yù)防，根據(jù)鱖魚流行病學特點，在ISKNV病爆發(fā)季前，可注射滅活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗來減少病害的發(fā)生和流行。發(fā)現(xiàn)病鱖需及時隔離及早治療，應(yīng)合理用藥，以減少因抗生素濫用而導致的藥殘現(xiàn)象。

7 鱖魚ISKNV病疫苗

隨著國內(nèi)外對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的日益重視，ISKNV病引發(fā)的藥殘問題已成為鱖魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。為踐行生態(tài)友好持續(xù)發(fā)展型漁業(yè)，研發(fā)與ISKNV病原對應(yīng)的高效鱖魚虹彩病毒疫苗勢在必行。1997年以來中國水產(chǎn)科學研究院珠江水產(chǎn)研究所首先采用滅活組織漿疫苗對鱖魚病毒病進行防治，實驗室結(jié)果顯示組織漿疫苗可對鱖魚產(chǎn)生較好的免疫效果，新鮮制備疫苗的保護率在80%以上，該所連續(xù)6年對廣東南海等地生產(chǎn)場的種苗、親魚進行免疫注射，免疫種苗存活率提高5.6%～40%，免疫親魚子代存活率比未免疫親魚子代存活率普遍高5%～15%，證明免疫是預(yù)防鱖魚ISKNV病的有效途徑。但是鱖魚組織漿疫苗批次間有效抗原含量差異大，效果不穩(wěn)定，疫苗制備困難、推廣較緩。2004年以來珠江水產(chǎn)研究所聯(lián)合中山大學等科研機構(gòu)對鱖虹彩病毒病重組亞單位疫苗開展研究，2004～2016年篩選了多個抗原基因，制備的重組亞單位疫苗、DNA疫苗實驗室保護率分別在60%、50%以上，由于尚未找到高保護性抗原，致使重組亞單位疫苗、DNA疫苗的免疫保護率仍然低于全病毒滅活疫苗。因此病毒滅活疫苗是依然是目前最常用疫苗。滅活疫苗技術(shù)的關(guān)鍵點是構(gòu)建病毒的體外繁殖系統(tǒng)，實現(xiàn)魚類病毒在細胞系上大規(guī)模繁殖，輔助實驗室制備或工廠化生產(chǎn)疫苗。2008年中山大學建立了第一個對ISKNV高度敏感的鱖魚仔魚細胞系（MFF-1），并使用該細胞系生產(chǎn)出ISKNV滅活疫苗。2015珠江水產(chǎn)研究所建立了對ISKNV敏感的鱖腦組織細胞系，分離了多株鱖魚ISKNV，為鱖ISKNV滅活疫苗的創(chuàng)新性研究奠定了基礎(chǔ)。

（作者單位：1.150001黑龍江省水生動物資源增殖保護站；2.164300黑龍江省黑河邊境漁政管理站；3.150030東北農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)養(yǎng)殖系）