袁 航，陳安珍，吳愛英，盧京光

（山東省青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266073）

精制冠心片由丹參、降香、赤芍、川芎、紅花5味中藥組方，具有活血化瘀的功效，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于2015年版《中國藥典（一部）》，該標(biāo)準(zhǔn)中包括丹參、赤芍、川芎和紅花的薄層色譜鑒別項及丹參、赤芍的含量測定項［1］，但缺少降香的質(zhì)量控制方法，無法考察降香藥味投料及質(zhì)量。降香為豆科植物降香檀Dalbergia odoriferaT．Chen樹干和根的干燥心材，有化瘀止血、理氣止痛功效，主要有效成分為揮發(fā)油和水溶性黃酮類成分［2-3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，降香有抗急性心肌缺血、抗凝血、舒張血管、增加冠脈流量、抗炎及鎮(zhèn)痛等作用［4-5］。在精制冠心片生產(chǎn)工藝中，降香首先提取揮發(fā)油，并將水提液同時入藥。中藥復(fù)方配伍是中藥復(fù)方（中成藥）的關(guān)鍵［6］。有研究表明，降香揮發(fā)油和水提物與丹參配伍均可增強丹參的藥效［7］，故降香的質(zhì)量優(yōu)劣、是否足量投料及是否按工藝生產(chǎn)，對精制冠心片的質(zhì)量及臨床療效均有較大影響。由于法定標(biāo)準(zhǔn)中降香藥味質(zhì)控指標(biāo)的缺失，且降香價格昂貴，會有不法企業(yè)為降低生產(chǎn)成本，提高利潤，不惜違反生產(chǎn)工藝，降香不投料或不經(jīng)提取揮發(fā)油直接水提入藥，嚴(yán)重影響精制冠心片的臨床療效。本試驗中建立了可同時檢測降香揮發(fā)油和水提極性成分的薄層色譜法，并采用氣相色譜法驗證降香揮發(fā)油成分，本方法的建立，可同時考察企業(yè)是否按法定工藝投料及生產(chǎn)，進一步完善精制冠心片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，為精制冠心片中降香的質(zhì)量控制提供依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 7890A型氣相色譜儀（FID檢測器，美國Agilent公司）；DB-5 毛細管柱（30m×0．32mm，0．25μm，美國 Agilent公司），HP-5毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．25 μm，美國 Agilent公司），F(xiàn)B-5 毛細管柱（30 m ×0．32 mm，0．25 μm，美國菲羅門公司）；AS10200BT 型超聲波清洗器（天津Auto Science公司）；硅膠G薄層板（德國Merck公司）。

1．2 試藥

降香對照藥材（批號為120952-201108，中國食品藥品檢定研究院）；反式橙花叔醇（批號為BCBP5327V，西格瑪奧德里奇公司，質(zhì)量濃度為0．876 g／mL）；石油醚（40～60℃ ，色譜純，德國 Merck公司），乙醇（99．8%，色譜純，北京百靈威科技有限公司），甲醇（色譜純，德國Merck公司）；精制冠心片為2015年國家評價性抽驗樣品，共47批次。

2 方法與結(jié)果

2．1 降香揮發(fā)油及水溶極性成分的薄層色譜鑒別

2．1．1 溶液制備

供試品溶液：取樣品10片，除去包衣，研細，加石油醚（40 ～60℃）5 mL，超聲處理（功率 250 W，頻率 40 kHz）30 min，濾過，濾液作為降香揮發(fā)油測定的供試品溶液；濾渣揮干殘留溶劑，加甲醇5 mL，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，濾過，濾液作為降香水溶極性成分測定的供試品溶液。

對照藥材溶液：取降香對照藥材0．3 g，加石油醚（40～60℃）10 mL，超聲處理（功率 250 W，頻率 40 kHz）30 min，濾過，濾液作為降香揮發(fā)油的對照藥材溶液；濾渣揮干殘留溶劑，加水20 mL，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為降香水溶極性成分測定的對照藥材溶液。

陰性對照品溶液：取處方中除降香的其他藥味，按處方比例及工藝提取，制成缺降香的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2．1．2 薄層色譜條件及檢視

精密吸取 2．1．1項下3種溶液各 10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯 （8∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的主斑點；若揮發(fā)油樣品在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置未顯相同顏色的主斑點，則應(yīng)采用氣相色譜法進一步驗證；陰性對照品溶液在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置無干擾斑點。結(jié)果見圖1。

圖1 降香薄層色譜圖

2．2 降香揮發(fā)油氣相色譜驗證

2．2．1 色譜條件

色譜柱：HP-5 毛細管柱（30m×0．32mm，0．25μm）；檢測器：FID；進樣量：2 μL；流速：1．0 mL ／min；程序升溫：起始溫度為90℃，保持3 min，以30℃ ／min的速率升至180℃，保持6 min，再以相同速率升至220℃，保持5 min；進樣口及檢測器溫度：230℃。

2．2．2 溶液制備

按2．1．1項下方法制備供試品溶液、對照藥材溶液與陰性對照品溶液；取反式橙花叔醇對照品20 μL，加乙醇溶解并定容至100 mL，作為對照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

檢出限確定：取反式橙花叔醇對照品溶液，逐級稀釋后進樣。根據(jù)信噪比（S／N）＝3時的溶液濃度，計算出方法的檢出限（LOD）為 0．105 μg ／g。

專屬性試驗：分別精密吸取反式橙花叔醇對照品溶液、降香揮發(fā)油供試品溶液、石油醚提取的陰性對照品溶液，各2 μL，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果見圖2。供試品溶液色譜中，呈現(xiàn)與對照品溶液色譜峰保留時間基本一致的色譜峰，陰性對照品溶液在相同保留時間無相應(yīng)色譜峰，表明陰性樣品對測定無干擾。

耐用性試驗：按擬訂色譜條件測定，考察DB-5毛細管柱 （30 m × 0．32 mm，0．25 μm）和 FB-5 毛細管柱（30 m × 0．32 mm，0．25 μm）。結(jié)果反式橙花叔醇與其他成分分離度良好，陰性對照品溶液在與對照品溶液相應(yīng)位置無色譜峰，表明該方法的色譜柱耐用性良好。

圖2 降香揮發(fā)油氣相色譜圖

2．2．4 樣品檢出結(jié)果

取47批次樣品，依法測定，結(jié)果有7個企業(yè)的14批次樣品檢出降香揮發(fā)油，占29．79%；4個企業(yè)的11批次樣品檢出降香水提極性成分，占23．40%；其中，僅2個企業(yè)的2批次樣品同時檢出降香揮發(fā)油和水提極性成分，占4．26%；7個企業(yè)的24批次樣品中2種成分均未檢出，占51．06%。

3 討論

本試驗中所用47批次精制冠心片樣品分別從生產(chǎn)企業(yè)及經(jīng)營企業(yè)抽樣，涉及10家企業(yè)，分布于全國4個省份，其中吉林省7家，樣品覆蓋面廣，代表性強。樣品檢測結(jié)果表明，2批次樣品同時檢出了降香揮發(fā)油成分和降香水提極性成分，且同一廠家的樣品批間差異較大，部分批次只檢測出了降香揮發(fā)油成分或水提極性成分，部分批次2種成分均未檢出。檢測結(jié)果揭示了部分企業(yè)在生產(chǎn)過程中涉嫌違反生產(chǎn)工藝生產(chǎn)或使用偽劣降香藥材投料生產(chǎn)等。降香為處方中主要藥味，對于精制冠心片的臨床療效起著關(guān)鍵性作用，而精制冠心片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中降香質(zhì)量控制方法的缺失，使部分企業(yè)不按法定工藝生產(chǎn)或投料，嚴(yán)重影響藥品的有效性。

在精制冠心片的生產(chǎn)工藝中，降香為首先提取揮發(fā)油入藥，但對揮發(fā)油的量并無要求。因此，為確保揮發(fā)油檢出結(jié)果的準(zhǔn)確性，本試驗中同時建立了氣相色譜法對未檢出揮發(fā)油的樣品進行了進一步確證。有研究表明，降香揮發(fā)油的主要成分為反式橙花叔醇［8-9］，且正品與偽品間揮發(fā)油的成分差異較大［10］，因此選擇以反式橙花叔醇作為降香揮發(fā)油的檢測指標(biāo)對降香揮發(fā)油進行驗證。按照降香足量投料、揮發(fā)油提取轉(zhuǎn)移率為0．4%計算，則制劑中含有揮發(fā)油的量應(yīng)為 12．5 μg ／g，本方法的檢出限為 0．105 μg ／g，因此，按本療法可檢出制劑中的降香揮發(fā)油。

本試驗中建立的方法可通過同一個色譜條件實現(xiàn)對降香揮發(fā)油成分和水提極性成分的同時檢測，方法簡便、快速、有效，可進一步提高和完善中藥制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為藥品監(jiān)督部門提供了技術(shù)支撐，以有效打擊違法違規(guī)行為，保證廣大人民群眾用藥安全有效。