余艷麗，汪建軍，王 欣，朱小艷，徐少麗

(陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院 a.輸血科；b.檢驗(yàn)科，陜西 咸陽(yáng) 712000)

再生障礙性貧血指骨髓未能生成足夠或新的細(xì)胞來(lái)補(bǔ)充血液細(xì)胞所引起的病癥，本病以紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板降低為主要特點(diǎn)，患者常表現(xiàn)為貧血、頭暈、發(fā)熱、出血等癥狀，免疫功能也存在不同程度異常，及時(shí)合理診斷對(duì)改善患者預(yù)后有一定臨床意義[1]。既往文獻(xiàn)報(bào)道再生障礙性貧血的發(fā)生和發(fā)展與骨髓中造血干細(xì)胞免疫性損傷有緊密關(guān)系[2]，一旦自身免疫反應(yīng)被不同刺激物激活將釋放一系列細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-8(IL-8)、γ-干擾素(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等，進(jìn)一步造成造血干細(xì)胞分裂受阻凋亡，加重病情進(jìn)展[3]。研究表明機(jī)體多種血清因子水平會(huì)隨再生障礙性貧血發(fā)展而發(fā)生相應(yīng)變化，在一定程度上可較好地反映病情嚴(yán)重程度，由此可見(jiàn)臨床全面監(jiān)測(cè)再生障礙性貧血患者血清相關(guān)因子對(duì)了解其病情進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸有重要指導(dǎo)價(jià)值[4]。本文旨在分析再生障礙性貧血患者治療前后免疫T細(xì)胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化的臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2010年3月至2017年3月本院收治的80例再生障礙性貧血患者(研究組)及同期在本院體檢的32名健康志愿者(對(duì)照組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合《血液病學(xué)》[5]有關(guān)再生障礙性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者入院后經(jīng)醫(yī)師診斷和外周血象、骨髓涂片和活檢確診；③臨床資料完善；④患者及家屬對(duì)本研究?jī)?nèi)容和目的知情，自愿簽署知情同意書(shū)；⑤健康志愿者均為本院體檢中心經(jīng)健康體檢合格者，未合并心、肝、肺和腎等重要臟器功能障礙，同時(shí)排除腫瘤和結(jié)締組織及感染性疾患等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有氯霉素、磺胺類(lèi)藥物使用史和無(wú)殺蟲(chóng)劑等接觸史者；②合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；③合并嚴(yán)重自身免疫性疾病者；④同一時(shí)間段內(nèi)參加過(guò)其他相關(guān)研究者；⑤研究中未按要求服用規(guī)定藥物而影響療效判斷者。研究組男45例，女35例，年齡12～65歲[(45.26±3.14)歲]，病程1個(gè)月至22年[(15.02±3.04)年]；對(duì)照組男18例，女14例，年齡13～64歲[(44.98±3.20)歲]。兩組性別、年齡等基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。

1.2方法①再生障礙性貧血患者治療方法和療效判斷：采用免疫抑制治療(主要包含環(huán)孢菌素A+抗胸腺/淋巴細(xì)胞球蛋白，CsA+ATG/ALG)和促造血治療，持續(xù)治療6個(gè)月，6個(gè)月后對(duì)患者臨床療效進(jìn)行評(píng)估，參照《兒童獲得性再生障礙性貧血診療建議》[6]標(biāo)準(zhǔn)將患者分為緩解組(完全緩解+部分緩解)和未緩解組。②免疫T細(xì)胞亞群檢測(cè)：采用流式細(xì)胞儀(儀器及試劑均由上海信然生物技術(shù)有限公司提供)檢測(cè)研究組治療前后和對(duì)照組研究對(duì)象外周血中CD3+、CD4+、CD8+水平，并計(jì)算CD4+/CD8+比值。③血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫吸附法(奧地利公司提供的型號(hào)為Bioelisa ELX-800的酶標(biāo)儀)檢測(cè)研究組治療前后和對(duì)照組血清中IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。

1.3觀察指標(biāo)①研究組治療前后和對(duì)照組免疫T細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。②研究組不同亞組免疫T細(xì)胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平。③再生障礙性貧血患者預(yù)后與免疫T細(xì)胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用方差分析及SNK-q檢驗(yàn)，變量間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1研究組治療前后、對(duì)照組免疫T細(xì)胞亞群水平比較研究組治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于治療后及對(duì)照組，CD8+高于治療后及對(duì)照組；治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于對(duì)照組，CD8+高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 研究組治療前后、對(duì)照組免疫T細(xì)胞亞群水平比較

2.2研究組治療前后、對(duì)照組血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化研究組治療前IL-8、IFN-γ、TNF-α高于治療后及對(duì)照組治療后及對(duì)照組，治療后IL-8、IFN-γ、TNF-α高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 研究組治療前后、對(duì)照組血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化 (pg/ml)

2.3研究組不同亞組免疫T細(xì)胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平比較緩解組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于未緩解組，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α低于未緩解組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 研究組不同亞組T細(xì)胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平比較

2.4再生障礙性貧血患者預(yù)后與免疫T細(xì)胞亞群、血清IL-8、IFN-γ、TNF-α相關(guān)性分析再生障礙性貧血患者預(yù)后與CD3+、CD4+呈正相關(guān)(r=0.296、0.312，P<0.05)，與CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α呈負(fù)相關(guān)(r=-0.356、-0.335、-0.352、-0.302，P<0.05)，與患者年齡、性別無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。

3 討論

再生障礙性貧血是因造血干細(xì)胞異常導(dǎo)致骨髓造血功能降低所引起的以全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的貧血性疾病，同時(shí)伴有貧血、感染、出血、發(fā)熱的特點(diǎn)，發(fā)病年齡無(wú)特異性，本病易繼發(fā)各類(lèi)免疫系統(tǒng)疾病，現(xiàn)階段臨床對(duì)其發(fā)病機(jī)制的研究較廣，但對(duì)其病機(jī)尚未完全明確，多認(rèn)為與造血干祖細(xì)胞異常、免疫機(jī)制損傷和骨髓內(nèi)造血環(huán)境異常等緊密相關(guān)[7，8]；近期有學(xué)者研究則指出再生障礙性貧血患者外周T細(xì)胞亞群結(jié)構(gòu)分布異常，最明顯變化是CD4+數(shù)目明顯減少，同時(shí)伴隨CD8+數(shù)目明顯增多，導(dǎo)致兩者比值失衡甚至倒置，其中CD8+數(shù)目增多常表現(xiàn)明顯地抑制骨髓，以TNF-α和IFN-γ增多，破壞了患者骨髓環(huán)境并表現(xiàn)為負(fù)性調(diào)節(jié)，最終抑制了骨髓造血功能而引發(fā)全血細(xì)胞明顯減少[9]。近年來(lái)隨著血液界學(xué)者對(duì)細(xì)胞因子學(xué)說(shuō)研究的不斷深入，白細(xì)胞介素如IL-8是臨床上常見(jiàn)負(fù)性調(diào)節(jié)因子，其主要參與再障的發(fā)病[10]，因而臨床中探討再生障礙性貧血患者治療前后免疫T細(xì)胞亞群以及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平變化的臨床意義有一定參考價(jià)值。

李敬東等[8]研究表明再生障礙性貧血患者經(jīng)免疫抑制治療后可有效減少胞漿內(nèi)TNF-α、IFN-γ表達(dá)；姜麗波等[11]研究表明再生障礙性貧血患者免疫T細(xì)胞亞群與病情嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性；而早期王成紅等[12]研究則指出再生障礙性貧血患者發(fā)病過(guò)程中同時(shí)存在細(xì)胞免疫功能障礙以及體液免疫機(jī)制異常兩種情況，且其變化規(guī)律與疾病輕重緩急程度有明顯的相關(guān)性。雖目前臨床有關(guān)T淋巴細(xì)胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平與再生障礙性貧血患者病情關(guān)系的研究不少，但尚缺乏臨床回顧性分析方面的研究，為此本文在既往文獻(xiàn)基礎(chǔ)上展開(kāi)臨床回顧性分析，本分析結(jié)果提示，研究組治療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較研究組治療后、對(duì)照組明顯低，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α明顯高，研究組治療后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較對(duì)照組明顯低，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α明顯高，而緩解組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+較未緩解組明顯高，CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α較未緩解組明顯低，此外再生障礙性貧血患者預(yù)后與CD3+、CD4+呈明顯正相關(guān)，與CD8+、IL-8、IFN-γ、TNF-α呈明顯負(fù)相關(guān)，初步證實(shí)了再生障礙性貧血患者存在T淋巴細(xì)胞亞群失調(diào)及血清IL-8、IFN-γ、TNF-α異常表達(dá)的情況，且其水平變化與再生障礙性貧血患者預(yù)后有明顯的相關(guān)性，這與既往文獻(xiàn)報(bào)告的觀點(diǎn)大體上相符[13]。相關(guān)研究表明細(xì)胞免疫功能紊亂是引發(fā)再生障礙性貧血發(fā)生及進(jìn)展的重要環(huán)節(jié)，CD3+、CD4+、CD8+是T淋巴細(xì)胞亞群中較為常見(jiàn)的因子，在機(jī)體免疫功能調(diào)控中發(fā)揮重要作用，一旦T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)極化時(shí)，T淋巴細(xì)胞不同亞群平衡被打破導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能亢進(jìn)，最終抑制造血干細(xì)胞功能并破壞造血組織[14]，因而可推測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群水平與再生障礙性貧血患者預(yù)后存在明顯的相關(guān)性。此外在再生障礙性貧血患者體內(nèi)存在寡克隆擴(kuò)增的細(xì)胞毒T細(xì)胞，由其分泌的1型淋巴因子 (IL-8、TNF-α、IFN-γ) 水平隨之明顯升高，而這些造血負(fù)調(diào)控因子可對(duì)造血干細(xì)胞表面的Fas抗原表達(dá)進(jìn)行誘導(dǎo)，同時(shí)與促凋亡因子發(fā)揮協(xié)同作用，最終誘導(dǎo)骨髓造血干細(xì)胞凋亡[15]，因而可推測(cè)再生障礙性貧血患者預(yù)后與其血清IL-8、TNF-α、IFN-γ水平變化有明顯相關(guān)性，這與早期學(xué)者的觀點(diǎn)相符[16]。

綜上所述，再生障礙性貧血患者治療后其免疫T細(xì)胞亞群和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α水平得以有效調(diào)節(jié)，此外免疫T細(xì)胞亞群各因子和血清IL-8、IFN-γ、TNF-α在再生障礙性貧血疾病發(fā)生和預(yù)后中發(fā)揮著重要作用。