陳韓英，邵焱焱，俞銀江，趙 博，袁曉峰，曾獻存*

（1.石河子大學藥學院，新疆石河子832003；2.石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；3.165團畜牧獸醫(yī)站，新疆塔城834609）

鈣調(diào)蛋白賴氨酸轉(zhuǎn)甲基酶（CAMKMT）基因?qū)︹}依賴信號通路和轉(zhuǎn)錄后修飾有重要調(diào)節(jié)作用[1]。CAMKMT基因能調(diào)控鈣調(diào)蛋白三甲基賴氨酸的形成[2]，且在腦部、肝臟、肌肉、結腸和肺部都有表達[3]。Abdelmohsen等[4]研究表明，CAMKMT與胚胎細胞數(shù)量、骨表面積和血管平滑肌細胞粘附度相關。目前，在畜禽CAMKMT基因的多態(tài)性及其與生長性狀的關聯(lián)分析研究較少，尤其是在綿羊。張莉等[5-6]采用全基因組關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，與綿羊斷奶后日增重顯著相關的 OAR-84073899.1位點位于 CAMKMT 基因內(nèi)。Ma等[7]在烏珠穆沁綿羊CAMKMT 基因外顯子區(qū)域發(fā)現(xiàn) 2 個 SNPs位點，在上、下游1 000 bp調(diào)控區(qū)發(fā)現(xiàn) 3 個SNPs 位點，在內(nèi)含子8上發(fā)現(xiàn)6 個SNPs 位點；關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)rs411221065與6月齡胸圍顯著相關，rs162300069位點與4、6月齡的體重和胸圍顯著相關。近年來，隨著羊肉需求量和羊肉價格的不斷上漲，養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展轉(zhuǎn)向以肉用生產(chǎn)為主，利用優(yōu)秀肉羊品種對新疆地方綿羊品種進行雜交改良已成為趨勢。本研究以薩福克羊與哈薩克羊雜交F1代群體及回交群體為研究對象，對CAMKMT基因的rs162300069、rs411221065、rs425859722位點多態(tài)性及與體尺性狀關聯(lián)性進行分析，旨在尋找能夠應用于綿羊雜交后代生長性狀標記輔助選擇的SNP，以期加快新疆地方綿羊肉用雜交改良進展。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 采集薩福克羊×哈薩克羊雜交F1代成年母羊180只、4月齡回交羔羊187只血樣（新疆生產(chǎn)建設兵團農(nóng)九師165團）。采用天根血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，-20℃冷凍保存。同時按常規(guī)方法對生長性狀進行測定，測定指標包括體斜長、體高、胸圍、胸寬和臀寬。

1.2 實驗方法 經(jīng)核酸蛋白分析儀及瓊脂糖凝膠檢測符合要求的基因組DNA送康普森公司進行MassARRAY?SNP檢測。根據(jù) SNP位點序列信息，使用Sequenom公司的引物設計軟件Assay design3.1設計 PCR 反應和單堿基擴展引物（表1），進行rs162300069、rs41122 1065、rs425859722位點的基因分型檢測。

1.3 統(tǒng)計分析 3個SNP位點的分型數(shù)據(jù)和生長性狀數(shù)據(jù)的關聯(lián)分析用SPSS 17.0一般線性模型方法[8]：

Y=μ+基因型+隨機誤差

其中，Y為性狀觀察值，μ為平均數(shù)。

基因頻率、基因型頻率、群體雜合度（He）、多態(tài)信息含量（PIC）、χ2檢驗利用Excel 2007進行計算[2]。

2 結 果

2.1 群體遺傳參數(shù) 3個SNP的等位基因頻率、基因型頻率及部分遺傳特征參數(shù)見表2，3個SNP位點均檢測到3個基因型。He和PIC等是評價群體內(nèi)遺傳多樣性的重要指標，rs411221065和rs162300069位點在F1代羊及回交羊群體均屬于中度多態(tài)（0.25＜PIC＜0.5），rs425859722位點為低度多態(tài)。這3個位點的基因型分布在2個群體中均符合哈代-溫伯格平衡（P＞0.05）。

2.2 關聯(lián)分析 3個SNP位點不同基因型對4月齡回交羊生長性狀無顯著影響（P＞0.05）（數(shù)據(jù)略）；如表3所示，在F1代成年母羊群體中，rs425859722位點CC基因型個體的胸寬極顯著低于CT基因型（P＜0.01）、臀寬極顯著低于CT和TT基因型（P＜0.01），rs41122 1065位點CC基因型個體胸寬顯著低于CT和TT基因型（P＜0.05），rs162300069位點GG基因型個體體高顯著高于AG基因型、胸寬顯著高于AA基因型（P＜0.05）。

3 討 論

CAMKMT 基因位于綿羊3號染色體上，編碼320個氨基酸，在賴氨酸降解通路中具有重要的作用[2]，為綿羊生長性狀的一個重要候選基因[6-7]。本實驗選擇的rs411221065、rs162300069、rs425859722位點突變均屬于錯義突變，并且引起了生長性狀的差異。在F1代成年母羊群體中，rs411221065位點CC基因型為胸寬不利基因型，rs162300069位點GG基因型為體高、胸寬有利基因型，因此在地方綿羊雜交改良中可針對這些有利基因型進行輔助選育，以期加快地方綿羊肉用雜交改良進展。此外，本研究發(fā)現(xiàn)rs411221065、rs162300069屬于中度多態(tài)，說明其PIC較高，可以獲得更多的選擇效果。rs425859722位點不同基因型對胸寬、臀寬有顯著影響，CT基因型為有利基因型，這可能是雜種優(yōu)勢造成，而TT基因型頻率較低，因此這些研究結果還需要擴大樣本含量進一步驗證。在回交群體上，上述3個SNP位點不同基因型之間的4月齡回交群體生長性狀差異不顯著，這與在烏珠穆沁綿羊4月齡和6月齡生長性狀上的研究不一致[7]。

表2 F1代、回交羔羊CAMKMT基因3個SNP位點的群體遺傳參數(shù)

表3 3個SNP位點不同基因型對F1代母羊生長性狀的影響 cm

生長性狀是一個極為復雜的性狀，受到很多基因和通路調(diào)控，單個遺傳標記效應相對較小。本實驗亦對3個SNP位點合并基因型的遺傳效應進行了分析，不同合并基因型對實驗群體生長性狀無顯著影響（數(shù)據(jù)略）。上述研究結果為應用于綿羊雜交后代生長性狀標記輔助選擇奠定基礎，在后續(xù)的研究中需要進一步擴大候選基因及SNP位點的選擇范圍、擴大實驗樣本數(shù)量等進一步驗證。