李艷紅

（吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林四平 136001）

斷奶是養(yǎng)豬過程中的一個(gè)關(guān)鍵時(shí)期，在這期間，小豬暴露在不同類型的應(yīng)激源下，如環(huán)境、營養(yǎng)、心理等，導(dǎo)致仔豬生理結(jié)構(gòu)和消化道的功能發(fā)生一系列變化。斷奶后會使仔豬腸道絨毛變短，隱窩深度加深，同時(shí)胰腺活動降低，胰蛋白酶分泌量減少，仔豬消化吸收功能受損，導(dǎo)致生長緩慢、飼料轉(zhuǎn)化率降低以、及發(fā)生腹瀉（Hedemann和Jensen，2004）。斷奶仔豬通常需要較高水平的日糧，用于促進(jìn)早期肌肉、骨骼的生長和蛋白質(zhì)的沉積，若消化不良，則高水平未消化的蛋白會被腸道微生物用于發(fā)酵和增殖，微生物發(fā)酵未消化的蛋白質(zhì)產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如氨和胺這兩種物質(zhì)，它們都會抑制生長，引起仔豬腹瀉（Dong等，1996）。有相關(guān)學(xué)者研究表明，外源性蛋白酶對改善畜禽蛋白質(zhì)的利用率具有促進(jìn)作用（易中華等，2005）。但目前大多數(shù)關(guān)于蛋白酶的研究數(shù)據(jù)主要集中在對家禽影響上，因此，本試驗(yàn)以斷奶仔豬為研究對象，在日糧中添加100 mg/kg復(fù)合蛋白酶，研究其對斷奶仔豬生長性能、營養(yǎng)物質(zhì)消化率、血液指標(biāo)及腸道健康的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇200頭28 d斷奶仔豬（平均體重為6.40 kg），將其隨機(jī)分為2組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25頭豬。對照組飼喂以膨化玉米為主的基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加100 mg/kg復(fù)合蛋白酶，試驗(yàn)分為3個(gè)階段（1～7 d、8～21 d、22～42 d）共42 d。試驗(yàn)用復(fù)合蛋白酶購自加拿大Jefo公司，這種酶是細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)生的堿性絲氨酸肽內(nèi)切酶，最適pH為8.5?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 樣品收集與測定 分別在試驗(yàn)第1、7、21和42天對各重復(fù)豬只按個(gè)體進(jìn)行稱重，記錄采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。采用指示劑法測定營養(yǎng)物質(zhì)消化率，即在飼料中添加2 kg/t三氧化二鉻作為指示劑，豬只從14～21 d和35～42 d飼喂含三氧化二鉻的飼料，每個(gè)重復(fù)收集2只豬的糞便，-20℃保存。在進(jìn)行化學(xué)分析前，糞便在60℃條件下烘72 h，參考Kong和Adeola（2014）研究方法測定干物質(zhì)、總能和氮的表觀消化率，采用以下公式進(jìn)行計(jì)算：

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

營養(yǎng)物質(zhì)消化率 /%=[1-（Nf×Cd）/（Nd×Cf）]×100

其中：Nf表示糞中養(yǎng)分含量；Nd表示日糧中營養(yǎng)物質(zhì)含量；Cd表示日糧中鉻的含量；Cf表示糞中鉻的含量。

在試驗(yàn)第42天每個(gè)處理選擇5頭豬，采血5 mL，用于分析紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肌酐、尿素氮和IgG的含量，具體方法參考Brosnan等（2011）的研究方法。

在試驗(yàn)第42天，每個(gè)處理選擇5頭豬收集糞樣，于冰上置于無菌試管中，每克混合糞樣加入9 mL 1%的肉湯培養(yǎng)基，參考Wen等（2012）研究方法測定糞中硫醇化物、氨氣、乳酸桿菌、大腸桿菌的含量。糞便評分在每天早上8點(diǎn)到晚上8點(diǎn)進(jìn)行，1分代表顆粒硬糞，2分代表成型便，3分代表軟糞，4分代表不成型軟糞，5分代表稀糞。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)在EXCEL（2016）中做簡單的均值計(jì)算處理后，采用SAS軟件中一般線性模型進(jìn)行單因素方差分析，各組差異用T檢驗(yàn)進(jìn)行分析，以P＜0.05作為差異顯著判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬生長性能的影響

復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬日增重、日采食量、料重比的影響見表2。本試驗(yàn)選擇的斷奶仔豬初重?zé)o顯著差異 [（6.40±0.1）kg，P ＞ 0.05]。試驗(yàn)組與對照組對7～21 d斷奶仔豬體重?zé)o顯著影響（P＞0.05），但試驗(yàn)組顯著提高了42 d斷奶仔豬體重（P＜0.05）。此外，試驗(yàn)組顯著提高了1～42 d日增重、1～7 d和8～21 d日采食量（P＜0.05）。對照組與試驗(yàn)組對斷奶仔豬1～7 d、8～21 d、22～42 d及1～42 d料重比影響無顯著差異（P＞0.05）。2.2 復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 日糧添加復(fù)合酶對斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)、氮和總能的消化率見表3。試驗(yàn)組較對照組顯著提高了斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)和氮的消化率（P＜0.05），但對兩階段總能消化率的影響無顯著差異（P＞0.05）。

表2 日糧添加復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 日糧添加復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬??????營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響?????????%

2.3 復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬血液指標(biāo)的影響由表4可知，試驗(yàn)組和對照組對血液紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞、尿素氮及IgG的含量的無顯著影響（P＞0.05），但試驗(yàn)組較對照組顯著降低了血液肌酐的濃度（P＜0.05）。

表4 日糧添加復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬?血液指標(biāo)的影響

2.4 復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬糞中菌群和有害氣體含量的影響 由表5可知，對照組與試驗(yàn)組對斷奶仔豬糞便評分無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加復(fù)合蛋白酶顯著降低了糞中氨氣的含量（P＜0.05）。與對照組相比，試驗(yàn)組對斷奶仔豬糞便硫醇化物、乳酸桿菌和大腸桿菌含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。

表5 日糧添加復(fù)合蛋白酶對斷奶仔豬糞中菌群和有害氣體含量的影響

3 討論

日糧中補(bǔ)充外源性蛋白酶可以提高蛋白質(zhì)的利用率的方案得到了人們的廣泛關(guān)注。但這些研究結(jié)果多數(shù)在家禽上報(bào)道，而在仔豬上的應(yīng)用研究數(shù)據(jù)較少。因?yàn)閷ωi只而言，其具有更大的蛋白質(zhì)消化能力，其腸道發(fā)酵功能強(qiáng)，飼料消化時(shí)間長。但對于早期斷奶仔豬，斷奶應(yīng)激會影響蛋白質(zhì)、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率（Pluske等，1997）。因此，在斷奶仔豬日糧中添加復(fù)合蛋白酶具有重要意義。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加復(fù)合蛋白酶可以提高斷奶仔豬各階段的體重及全期平均日增重，但對整個(gè)試驗(yàn)期飼料利用率無顯著影響。Wang等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，保育豬日糧中添加角蛋白酶可以顯著提高平均日增重。Zuo等（2015）也發(fā)現(xiàn)，在蛋白質(zhì)消化率低的斷奶仔豬日糧中添加復(fù)合蛋白酶可以顯著改善仔豬的生長性能。以上結(jié)果說明，通過添加復(fù)合蛋白酶可以改善飼料蛋白或氨基酸的利用率，進(jìn)而提高斷奶仔豬的生長性能。

從試驗(yàn)結(jié)果來看，試驗(yàn)組較對照組顯著提高了斷奶仔豬21和42 d干物質(zhì)和氮的消化率。Guggenbuhl等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，在玉米-豆粕型日糧中添加復(fù)合蛋白酶可以提高蛋白質(zhì)利用率。蛋白酶可能中和飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制劑，這樣就可以解釋其提高蛋白質(zhì)消化率的原因（Huo等，1993）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，總能的消化率得到一定的提高與蛋白酶破壞了淀粉蛋白質(zhì)基質(zhì)有關(guān)（McAllister，1993）。此外，蛋白酶對能量消化率的改善具有選擇性，如植物性蛋白豆粕、菜粕或豌豆粕，動物性蛋白肉粉或肉骨粉等（Nielsen等，2013）。

血液中肌酸苷的含量在試驗(yàn)組表現(xiàn)為顯著降低，而紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和IgG的數(shù)量及尿素氮濃度與對照組相當(dāng)。肌酸和磷酸肌酸的降解是血液中肌酸苷的主要來源，血液中肌酸苷水平升高，使肌肉動員蛋白質(zhì)，減少營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，最終導(dǎo)致斷奶仔豬腹瀉率升高（Brosnan等，2011）。但由于本試驗(yàn)中豬只未發(fā)生腹瀉，試驗(yàn)組低水平的肌苷酸說明該組氨基酸的利用率高于對照組。肌肉中肌酸降解的減少可以降低甲硫氨酸和精氨酸的代謝負(fù)擔(dān)，從而對整個(gè)機(jī)體氮代謝起到平衡作用（Brosnan等，2011）。

斷奶仔豬日糧高蛋白水平與其對蛋白質(zhì)的消化能力有關(guān)，高蛋白可能導(dǎo)致腸道細(xì)菌的增殖，從而引起腹瀉（Dong等，1996）。我們假設(shè)給斷奶仔豬日糧提供蛋白酶可以降低腸道病原菌的數(shù)量，進(jìn)而降低腹瀉。但本試驗(yàn)結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)，蛋白酶組和對照組對糞中乳酸桿菌和大腸桿菌的含量無顯著影響。Zhang等（2014）發(fā)現(xiàn)，日糧中添加外源性復(fù)合酶（木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶）可以提高乳酸桿菌的數(shù)量，降低糞中大腸桿菌的數(shù)量，降低仔豬腹瀉率。試驗(yàn)結(jié)果存在差異的原因可能與日糧類型、酶的種類和衛(wèi)生條件及環(huán)境有關(guān)（Wen等，2012）。在本研究中，試驗(yàn)豬在一個(gè)環(huán)境衛(wèi)生條件相對較好的欄位中，而養(yǎng)豬業(yè)環(huán)境衛(wèi)生條件可以影響斷奶仔豬胃腸道微生物的水平。從豬糞中釋放出的惡臭氣體，如氨氣對環(huán)境及設(shè)備具有負(fù)面影響，同時(shí)也可能會讓斷奶仔豬產(chǎn)生呼吸道疾病。日糧添加復(fù)合蛋白酶顯著降低糞中氨氣含量，而McAlpine等（2012）研究卻發(fā)現(xiàn)，肥豬階段條件蛋白酶提高了糞中氨氣濃度，而添加蛋白酶和木聚糖酶則降低了糞中氨氣濃度。盡管豬日齡和飼料結(jié)構(gòu)有所不同，引起這種差異的原因需進(jìn)一步研究。未消化的蛋白質(zhì)或氨基酸在后腸微生物發(fā)酵產(chǎn)生氨氣，進(jìn)而通過糞排出（Gaskins，2000）。因此，在目前研究中，糞中氨氣濃度低的原因?yàn)槿占Z蛋白質(zhì)和氨基酸的消化率較高，復(fù)合蛋白酶限制了后腸微生物對未消化蛋白的利用。

4 結(jié)論

斷奶仔豬日糧添加復(fù)合蛋白酶可以有效改善斷奶仔豬的生長性能和養(yǎng)分消化率，尤其是提高蛋白質(zhì)的利用率。另外，復(fù)合蛋白酶可以降低糞中氨氣的含量，可以作為畜牧業(yè)中降低環(huán)境污染的有效措施。