葉小理

摘要：目的：探討酒駕血液樣本有效保存時間，防止無效檢驗，確保血液中乙醇含量測定結(jié)果準確。

關(guān)鍵詞：真空抗凝采血管；乙醇含量；血液樣本；保存時效

1、材料與方法

1.1樣本來源

選擇健康成年男性30人，在酒后30 min后至實驗室抽取靜脈血 2 mL 各 10 管 。血樣分別儲存于EDTA-K2 管、枸櫞酸鈉（1：9）管、肝素鈉管等三種真空抗凝采血管中，立即測量各管中血液的乙醇含量，選取其中乙醇濃度≥ 20 mg/100 mL 且含量數(shù)值接近的 30 份血樣為研究樣本（三種真空抗凝采血管各10份，分別依次標記為 1～10號），在冰柜 （-20℃）中保存并進行初篩，分別在 0、3、7、14、21、30、42、49 d 測定血液中乙醇含量。根據(jù)初篩結(jié)果，選擇血液中乙醇含量穩(wěn)定性較好的采血管，在 -20℃下冷凍存儲，分別在 0、3、7、14、21、30、60、90、120、150 和 180 d 測定血液中乙醇含量，以初始乙醇濃度≥ 20 mg/100 mL且含量數(shù)值接近的10 份血樣為研究樣本探討酒駕血液保存時效。

1.2儀器與材料

島津 GC-2010 plus 型氣相色譜儀、島津 HS-20型頂空自動進樣器。

乙醇標準品和叔丁醇標準品均由上海安譜科學儀器有限公司提供，乙醇標準品濃度為 100 mg/100 mL，叔丁醇內(nèi)標液濃度為40 μg/mL。EDTA-K2管、枸櫞酸鈉（1：9）管、肝素鈉管等真空抗凝采血管均采用江西南昌贛達醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的一次性真空儲血管。

1.3色譜條件

色譜條件：色譜柱為 Rtx-BAC1（30 m×0.32 mm）毛細柱，柱溫 40 ℃載氣為氮氣（純度≥ 99.999%）， 流速 8 mL/min；進樣口溫度 150 ℃；柱流量 5 mL/min，吹掃流量3 mL/min，分流比6.4：1；檢測器為氫火焰離子化檢測器（FID），溫度 250 ℃。頂空進樣：恒溫爐溫度 65 ℃，樣品流路溫度105 ℃，傳輸線溫度 110 ℃，樣品瓶恒溫時間 10 min，樣品瓶加壓時間0.3 min，加壓平衡時間0.3 min，導入時間0.8 min，導入平衡時間 0.4 min，進樣時間 0.5 min，進樣針沖洗時間 0.4 min。

1.4實驗方法

按中華人民共和國公共安全行業(yè)標準《生物樣品血液中乙醇的頂空氣相色譜檢驗方法》（GA/T 1073-2013）進行檢驗。采用內(nèi)標曲線法進行定量測定，標準曲線方程為：y = 0.0574386 x - 0.0266151，y 為乙醇與叔丁醇的峰面積比值，x 為乙醇工作溶液濃度（mg/100 mL）。對同一份血樣進行平行試驗，結(jié)果取均值，且雙樣相差應(yīng)小于等于 5%。

1.5統(tǒng)計學分析

應(yīng)用 SPSS 20.0 進行重復測量數(shù)據(jù)的方差分析和單因素方差分析，采用 Duncan 氏新復極差法比較不同處理間的差異顯著性。檢測水準 α≈0.05。

2、結(jié)果

2.1-20℃保存條件下三種采血管中血液乙醇含量在各測試時間段的比較

2.1.1三種采血管血液乙醇含量的比較

三種采血管的血液乙醇含量差異有統(tǒng)計學意義（F =221.051， P <0.01）。三種管的血液乙醇含量見表1。

3、討論

綜上所述：本研究證實保存時間對于血液乙醇含量檢測結(jié)果有重要影響。建議鑒定部門在采集涉嫌酒駕人員血液后，使用 EDTA-K2 真空抗凝采血管儲存，并于 -20 ℃保存條件下 90 d 內(nèi)檢驗，以保證血液中乙醇含量測試結(jié)果的準確性。

參考文獻：

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