江蘇省鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗中心（224002）丁愛華 倪萍 支榮榮

暈可平糖漿由赭石、夏枯草、車前草、法半夏4味藥組成，具有潛陽鎮(zhèn)肝的作用，用于內(nèi)耳眩暈癥，頭暈目眩癥?，F(xiàn)行標準收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第2冊，質(zhì)量標準較為簡單。為了進一步完善該品種質(zhì)量標準，本研究采用薄層色譜（TLC）法對制劑中的夏枯草和車前草進行了定性鑒別，同時采用高效液相色譜（HPLC）法測定了夏枯草中迷迭香酸的含量。

1 儀器與試劑

美國Agilent1260高效液相色譜儀，瑞士CAMAG薄層成像系統(tǒng)，XS205電子天平（梅特勒托利多公司），B3200-T超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司），電熱恒溫水浴鍋（上海蘇達實驗儀器有限公司），硅膠G薄層板（50mm×200mm，青島海洋化工廠分廠）。

附圖 暈可平糖漿HPLC色譜圖。A：對照品；B：供試品；C：陰性對照；1：迷迭香酸

夏枯草對照藥材（批號120993-2 0 1 1 0 5），車前草對照藥材（批號121543-200501），迷迭香酸對照品（含量：98.8%，批號111871-201203）均購自中國藥品生物制品檢驗所。暈可平糖漿為市售A、B兩個廠家，產(chǎn)品批號分別為1409121，61140401。所用試劑甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別[1][2]

2.1.1 夏枯草的TLC鑒別 取本品10mL，加水10mL，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚提取液，揮去乙醚，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取夏枯草對照藥材2g，加水煎煮1h，濾過，濾液濃縮至20mL，自“用鹽酸調(diào)節(jié)pH值”起，同法制成對照藥材溶液。按暈可平糖漿生產(chǎn)工藝及上述樣品處理方法制備缺夏枯草陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB）試驗，吸取供試品溶液2μL，對照藥材溶液及陰性對照溶液各6μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-冰醋酸-水（7∶2∶0.5∶0.3）為展開劑，展開后，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與夏枯草對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，缺夏枯草陰性對照沒有斑點。

附表 加樣回收試驗(n=6)

2.1.2 車前草的TLC鑒別 取夏枯草鑒別項下供試品溶液作為供試品溶液。取車前草對照藥材2g，加水煎煮1h，濾過，濾液濃縮至20mL，自“用鹽酸調(diào)節(jié)pH值”起，同法制成對照藥材溶液。按暈可平生產(chǎn)工藝及上述樣品處理方法制備缺車前草陰性對照溶液。照薄層色譜法（附錄VIB）試驗，吸取供試品溶液、車前草對照藥材溶液及缺車前草陰性對照溶液各5～10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-甲酸（10∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，缺車前草陰性對照沒有斑點。

2.2 含量測定[2]

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取迷迭香酸對照品適量，加流動相制成每1mL含10μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2mL，置25mL量瓶中，加流動相20mL，超聲20min，用流動相定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 色譜條件 色譜柱為CAPCEll PAK C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流動相為甲醇-0.5%甲酸（39∶61）；流速為1.0mL·min-1；柱溫為30℃；檢測波長為330nm，進樣量為20μL。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計算，應不少于3000，見附圖。

2.2.4 空白試驗 空白溶液的制備是除夏枯草以外，按照處方比例稱取其他藥材，按其制備工藝制成空白制劑，再按供試品溶液的制備方法制備并測定，結(jié)果空白溶液在與迷迭香酸對照品相同保留時間處未出現(xiàn)色譜峰，故認為無干擾。

2.2.5 線性關系考察 分別精密吸取9.920μg·mL-1的迷迭香酸對照品溶液5，10，15，20，25，30μL進樣，照上述色譜條件測定，以峰面積Y為縱坐標，以迷迭香酸進樣量X為橫坐標，得回歸方程Y=3225.46X+4.79（r=0.9999），表明迷迭香酸在0.050～0.298μg線性關系良好。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液20μL，重復進樣6次，結(jié)果峰面積的RSD0.07%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液20μL（批號1409121），按上述色譜條件分別在0、3.5、7、12、18、24h時測定迷迭香酸的峰面積。結(jié)果RSD0.70%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號1409121），分別制備6份供試品溶液進行測定，結(jié)果迷迭香酸平均含量為92.33μg·mL-1，RSD為1.00%，表明重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取同一批次的暈可平糖漿（批號1409121，含迷迭香酸92.52μg·mL-1）6份，精密量取1.0mL，置于25mL容量瓶中，分別精密加入迷迭香酸對照品溶液（濃度為9.920μg·mL-1）10.0mL，按2.2.2項下方法制備加樣回收供試品溶液，按2.2.3項下色譜條件分析測定，計算回收率，結(jié)果見附表。

2.2.10 樣品測定 取兩個廠家的樣品，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.2.3色譜條件進行測定，結(jié)果迷迭香酸的含量分別為92.52，28.83μg·mL-1。

3 討論

3.1 在車前草鑒別試驗中，選用展開劑時，采用了氯仿-甲醇（20∶1）、氯仿-甲醇-甲酸（20∶1∶0.5）、氯仿-甲醇-甲酸（15∶1∶0.5）和氯仿-甲醇-甲酸（10∶1∶0.5）作為展開劑，結(jié)果以氯仿-甲醇-甲酸（10∶1∶0.5）為展開劑，分離效果好，斑點清晰。

3.2 在含量測定試驗中，分別選用甲醇、乙醇、水、50%甲醇和流動相對供試品進行提取，結(jié)果表明甲醇和乙醇的提取效果不佳，水、50%甲醇、流動相的提取率差異不大，考慮到流動相配制樣品能避免基線不穩(wěn)造成無法判斷雜質(zhì)峰，因此提取溶劑選擇流動相。

3.3 夏枯草和車前草藥材中均含有齊墩果酸和熊果酸，前期采用HPLC法測定了市售糖漿劑中齊墩果酸和熊果酸的含量，分別為0.16，1.66μg·mL-1，含量較低，故未以齊墩果酸和熊果酸作為含量測定項，與林萍等[3]研究報道一致。夏枯草主要水溶性成分為迷迭香酸[4]，故作為本制劑的一項定量指標。不同廠家樣品的迷迭香酸含量存在較大差異，含量限定范圍還有待進一步研究。