張 代 趙耀光

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系 河南 商丘 476000）

鴨大腸桿菌病是養(yǎng)鴨生產(chǎn)中較為常見的細(xì)菌病[1]，它是由某些致病性大腸桿菌引起的。該病可發(fā)生在任何年齡的鴨群，其中雛鴨最易感染，發(fā)病率和死亡率較高[2]。主要癥狀是精神萎靡、食欲不振，呼吸困難，腹瀉，拉黃綠色或黃白色稀糞。臨床剖檢表現(xiàn)為纖維性心包炎，包心、包肝，氣囊炎、輸卵管炎等[3]。由于大腸桿菌血清型復(fù)雜，很難依靠疫苗進(jìn)行控制，抗生素的大量使用又極易產(chǎn)生耐藥性，已逐漸成為人類的健康潛在的威脅。本試驗(yàn)對商丘市某鴨場發(fā)病雛鴨分離的細(xì)菌進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷和藥敏實(shí)驗(yàn)，以期望為臨床上進(jìn)行有效地預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 儀器。高壓滅菌器、生化培養(yǎng)箱、冰箱、顯微鏡。

1.2 培養(yǎng)基及試劑。普通瓊脂培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基、麥康瓊脂凱培養(yǎng)基、細(xì)菌生化鑒定管、藥敏試紙片。

1.3 試驗(yàn)動物。健康小白鼠12只，購于鄭州大學(xué)試驗(yàn)動物中心，體重20～24 g。

2 方法

2.1 病料的采集。剖檢鴨為商丘市某鴨場送往市動物疫病防控中心的臨床病例，病鴨臨床表現(xiàn)和剖檢結(jié)果與大腸桿菌病的典型特征吻合，疑似致病性大腸桿菌引起。無菌采取病鴨肝臟病料接種于普通瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃的生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落形態(tài)。

2.2 細(xì)菌的分離、純化。根據(jù)菌落形態(tài)，挑取單個疑似菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢，后接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃的生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，觀察菌落生長特點(diǎn)。

2.3 細(xì)菌的生化試驗(yàn)。根據(jù)中國農(nóng)業(yè)出版社出版的獸醫(yī)微生物試驗(yàn)指導(dǎo)(姚火春主編)進(jìn)行細(xì)菌生化試驗(yàn)。

2.4 藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)采用瓊脂紙片擴(kuò)散法，取細(xì)菌純培養(yǎng)物密集劃線接種于整個普通瓊脂平板上，將藥敏片依次均勻貼放到平板上，每個平板放5片，各紙片中心相距約24 mm，紙片距平板邊緣約15 mm，各紙片間距離相等，將平板倒置于37℃溫箱培養(yǎng)24 h，然后觀察藥物的抑菌情況，并測定各種藥物抑菌圈的大小。

2.5 動物試驗(yàn)。取分離菌接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)18 h，將12只小白鼠隨機(jī)分成2組(試驗(yàn)組和對照組)，每組6只，試驗(yàn)組采用腿部肌肉注射的方法，每只注射純培養(yǎng)物0.2 ml(約含細(xì)菌0.7億/只)，對照組每只腿部肌肉注射生理鹽水0.2 ml，接種24 h后觀察試驗(yàn)動物的發(fā)病及死亡情況。

3 結(jié)果

3.1 病理剖檢結(jié)果。肝臟腫大且有出血點(diǎn)，表面附有白色的纖維素樣炎性滲出物。腹腔、胸腔及心包積液嚴(yán)重，心包膜明顯增厚，纖維素性心包炎、腹膜炎特征明顯。

3.2 培養(yǎng)特性結(jié)果。該細(xì)菌能在普通肉湯中生長良好，管底沉淀呈灰白色，輕搖呈云霧狀均勻渾濁；接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長呈現(xiàn)紅色的菌落。革蘭氏染色后鏡檢可見該菌較小，呈陰性，桿狀，兩端鈍圓，符合大腸桿菌的培養(yǎng)及染色的典型特點(diǎn)。

3.3 生化試驗(yàn)結(jié)果。該菌能分解多數(shù)碳水化合物，即葡萄糖、麥芽糖、乳糖及甘露醇等，并且在發(fā)酵的過程中產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不發(fā)酵蔗糖；吲哚試驗(yàn)和MP試驗(yàn)結(jié)果呈陽性反應(yīng)；硫化氫試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)以及尿素分解試驗(yàn)結(jié)果呈陰性反應(yīng)(見表1)。

表1 分離菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果

3.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果。對丁胺卡那霉素高度敏感，對氯霉素、四環(huán)素、慶大霉素、鏈霉素、強(qiáng)力霉素、卡拉霉素、頭孢拉定及頭孢唑啉等中度敏感，對其他藥物不敏感(具有一定的耐藥性)。

表2 分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3.5 動物試驗(yàn)結(jié)果。接種細(xì)菌的試驗(yàn)組小白鼠均出現(xiàn)了呼吸急促、精神不振、厭食等癥狀，48 h內(nèi)全部死亡，尸體剖檢結(jié)果顯示死亡小鼠心臟有少量的片狀出血位點(diǎn)，心包內(nèi)有積液。接種生理鹽水的對照組則無任何異?，F(xiàn)象，即小鼠能夠正常生存。

4 分析與討論

4.1 通過對分離菌株進(jìn)行分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化鑒定、藥敏及動物試驗(yàn)，可以確診分離株為鴨致病性大腸桿菌，并且致病性較強(qiáng)。

4.2 大腸桿菌病是一種常見病、多發(fā)病，其血清型眾多，控制難度極大。血清型不同，地區(qū)不同，大腸桿菌對藥物敏感性也各不相同。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離菌對丁胺卡那霉素藥物高度敏感，對氯霉素、四環(huán)素、慶大霉素、鏈霉素、強(qiáng)力霉素、卡拉霉素、頭孢拉定及頭孢唑啉等中度敏感，對阿莫斯林、氟哌酸、利福平、環(huán)丙沙星及左氧沙星等其他藥物已經(jīng)產(chǎn)生了一定的耐藥性。

4.3 大腸桿菌是條件性致病菌，發(fā)病主要與環(huán)境條件有著極大的關(guān)系，因此為了減少大腸桿菌病的發(fā)生，我們應(yīng)盡可能的搞好鴨舍清潔衛(wèi)生，勤掃糞便，定期消毒，做好通風(fēng)，飼喂優(yōu)質(zhì)飼料及清潔水，采用全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式，減少各種不良應(yīng)激[4]。