張?jiān)马?周 旋 蘆相玉 夏洪蓮 李 穎 南錫浩

依托咪酯為現(xiàn)階段我國(guó)臨床上應(yīng)用較為廣泛的一種全身麻醉誘導(dǎo)用藥。近年來, 有研究發(fā)現(xiàn)該藥物對(duì)神經(jīng)元缺氧損傷具有保護(hù)作用［1］。為明確該藥物的神經(jīng)元保護(hù)機(jī)制, 本研究探討依托咪酯對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的影響, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 細(xì)胞株：小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞株(購自背景元唐盛興科技有限公司)。主要儀器及試劑：酶標(biāo)儀(購自上海紀(jì)寧生物科技有限公司)、6孔培養(yǎng)板(購自上海晶安生物科技有限公司)、DMEM高糖培養(yǎng)基(購自上海源葉生物科技有限公司)、胎牛血清(購自杭州四季青生物工程材料有限公司)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒(購自上海紀(jì)寧生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 使用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞, 培養(yǎng)條件, 溫度37℃、二氧化碳5%。

1.2.2 試驗(yàn)研究 細(xì)胞培養(yǎng)48 h后, 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞以每孔2×105的密度接種在6孔培養(yǎng)板中, 共接種在3張培養(yǎng)板中。每張培養(yǎng)板中均留1個(gè)孔作為空白對(duì)照, 分別向培養(yǎng)板中其他5個(gè)孔中加入0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg/L共5個(gè)濃度的依托咪酯(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司, 國(guó)藥準(zhǔn)字H32022379, 規(guī)格：10 ml∶20 mg), 繼續(xù)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β檢測(cè)。

1.2.3 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β檢測(cè)及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元存活率計(jì)算 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各張培養(yǎng)板中各培養(yǎng)孔中神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平。檢測(cè)操作嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行, 在酶標(biāo)儀波長(zhǎng)570 nm處讀取吸光度OD值。神經(jīng)元存活率(%)=試驗(yàn)組OD值÷空白對(duì)照組OD值×100.00%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平比較 3張培養(yǎng)板中, 依托咪酯濃度為4.8 mg/L時(shí), 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平明顯低于其他濃度以及空白對(duì)照的表達(dá)水平, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元的存活率比較 3張培養(yǎng)板中, 依托咪酯濃度為4.8 mg/L時(shí), 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元存活率, 明顯高于其他濃度以及空白對(duì)照的存活率, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平比較(s, pg/ml)

表1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平比較(s, pg/ml)

注：與依托咪酯濃度4.8 mg/L比較, aP＜0.05

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表2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元的存活率比較(s, %)

表2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元的存活率比較(s, %)

注：與依托咪酯濃度4.8 mg/L比較, aP＜0.05

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3 討論

IL-1β是IL-1存在形式的一種, 為人體正常細(xì)胞在應(yīng)答感染時(shí)所產(chǎn)生的炎性細(xì)胞因子, 其表達(dá)水平升高往往表示正常的細(xì)胞功能遭到破壞, 機(jī)體出現(xiàn)病理反應(yīng)［2］。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是廣泛分布于神經(jīng)元以外的細(xì)胞, 具有滋養(yǎng)和支持神經(jīng)元的作用［3-7］。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中IL-1β的表達(dá)水平變化能夠反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況［8］。近年來, 有國(guó)內(nèi)研究學(xué)者發(fā)現(xiàn), 靜脈麻醉藥物依托咪酯對(duì)神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用,但也有研究學(xué)者持反對(duì)觀點(diǎn)［9］。

基于上述研究現(xiàn)狀, 本研究分析依托咪酯對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的影響。結(jié)果顯示, 隨著依托咪酯濃度的升高, 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的表達(dá)水平降低, 神經(jīng)元存活率升高, 表明依托咪酯對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β表達(dá)能夠產(chǎn)生抑制作用,保護(hù)神經(jīng)元不受破壞。分析得到上述結(jié)果的原因可能為：依托咪酯能夠增強(qiáng)由γ-氨基J酸(GABA)介導(dǎo)的抑制性突觸傳遞, 直接激活GABA受體。激活GABA受體的過程中, 可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜上的氯離子通透性增加, 細(xì)胞電位失衡, 使細(xì)胞處于超極化的狀態(tài)［10］。這一狀態(tài)下具有電壓依賴性的的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體通道和電壓依賴性鈣離子通道的開啟受到抑制, 從而減少鈣離子內(nèi)流, 抑制IL-1β表達(dá), 發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用。

綜上所述, 依托咪酯對(duì)小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)元具有保護(hù)作用, 用藥劑量越大, 保護(hù)作用越顯著。但由于近年來國(guó)內(nèi)開展的相關(guān)課題研究較少, 本研究的試驗(yàn)過程可能受到混雜因素的影響, 故關(guān)于依托咪酯對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β的具體影響機(jī)制, 仍需進(jìn)行深入研究。