澤仁群西 強(qiáng)巴嘉措 王忠興

摘 要：目的：探究大鼠急性壞死型胰腺炎病理特征評(píng)估方法。方法：45只SD大鼠分為治療組（14例）、ANP組（20例）、假手術(shù)組（11例），在其胰膽管中注射?；悄懰徕c，使其發(fā)生大鼠急性壞死型胰腺炎，根據(jù)Schnidt等標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察等，對(duì)不同標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定急性壞死型胰腺炎病的準(zhǔn)確性進(jìn)行研究。結(jié)果：根據(jù)組織學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，Schnidt方法不能顯示組間出血的嚴(yán)重程度，壞死、水腫、炎癥過(guò)于繁冗。使用高倍鏡下間隔紅細(xì)胞數(shù)平均值以及分級(jí)評(píng)分比較，可以顯示不同組之間出血的差異。結(jié)論：簡(jiǎn)化Schnidt評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)中壞死、水腫、炎癥等3項(xiàng)和出血指標(biāo)，結(jié)合高倍鏡下間隔紅細(xì)胞數(shù)和分級(jí)統(tǒng)計(jì)，制定新的標(biāo)準(zhǔn)，可以對(duì)大鼠急性壞死型胰腺炎的病理組織學(xué)特征進(jìn)行更為準(zhǔn)確合理的評(píng)定。

關(guān)鍵詞：大鼠急性壞死型胰腺炎；病理特征；評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

?；悄懰徕c誘發(fā)的大鼠急性壞死型胰腺炎（ANP）是一個(gè)十分經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，長(zhǎng)期在ANP的發(fā)病機(jī)制、治療等方面的研究中應(yīng)用，但是當(dāng)前尚未形成統(tǒng)一的病理組織學(xué)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。

一、資料與方法

1.資料

雄性SD大鼠48只，每只體重220～280g，善寧（NO-VARTIS公司），牛磺膽酸鈉（sodium taurocholate，Sigma公司）。

2.方法

（1）動(dòng)物模型制作。將48只大鼠分為治療組（14例）、ANP組（20例）、假手術(shù)組（11例），使用2.5%戊巴比妥對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，然后將其固定，切開(kāi)下肢皮膚，經(jīng)股靜脈建立輸液途徑。切開(kāi)腹腔，鉗住胰膽管十二指腸端，在肝門處穿繞縫線，將針尖扎緊，將5%?；悄懰徕c恒速注入胰膽管中，持續(xù)1min，停留4min，然后將針、血管夾、縫線撤除。5min后在右下肢靜脈注入善寧，或生理鹽水（假手術(shù)組和ANP組）。假手術(shù)組不注射?；悄懰徕c，僅進(jìn)行胰腺牽引。發(fā)病后12h進(jìn)行存活統(tǒng)計(jì)，同時(shí)進(jìn)行處死和解剖。將因各種因素死亡的大鼠剔除。采集腹水、血以及胰腺等標(biāo)本，對(duì)其脂肪酶、血清酶等進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行普通病理以及電鏡病理觀察。

（2）制備病理標(biāo)本。取材前，對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉后，切開(kāi)其腹腔，然后進(jìn)行腹水收集、血液采集、胰腺摘取。同時(shí)將大鼠的心、肝、腎、肺等組織取出。以及相關(guān)的標(biāo)本制作方式進(jìn)行標(biāo)本制作，然后對(duì)標(biāo)本進(jìn)行細(xì)致的觀察。

透鏡電鏡樣品制備：將胰組織固定在戊二醛，然后對(duì)其進(jìn)行漂洗和固定操作，使用乙醇進(jìn)行梯度脫水工作，Epon812包埋。在光鏡下將胰組織定位，將需要進(jìn)行觀察的部分放置在視線下，進(jìn)行超薄切片。使用檸檬酸鉛、醋酸鈉對(duì)切片進(jìn)行染色，然后在電鏡下進(jìn)行觀察。

（3）病理組織學(xué)評(píng)定方法。根據(jù)Schnidt建議的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合Van Ooijen等的方法評(píng)分，將Schnidt標(biāo)準(zhǔn)中的0.5分項(xiàng)舍去，取0、1、2、3、4五個(gè)等級(jí)。針對(duì)出血這一項(xiàng)，Schnidt方法僅使用有或無(wú)對(duì)其進(jìn)行表示，因而無(wú)法對(duì)其差異進(jìn)行體現(xiàn)。因而結(jié)合高背景下間隔紅細(xì)胞數(shù)的平均值進(jìn)行比較分析，每份標(biāo)本觀察 10個(gè)視野。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以百分比表示， 采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（ ）表示，采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

12h內(nèi)ANP組大鼠存活4只，存活率為20%，明顯低于治療組64.29%（9/14）。假手術(shù)組無(wú)腹水，胰腺正常，不進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)比較。

將胰腺炎大鼠腹腔切開(kāi)，大量紅色滲出液。血淀粉酶、腹水量、脂肪酶結(jié)果顯示，治療組明顯低于ANP組（P<0.05），具體情況如下表1所示。ANP大鼠的胰腺明顯水腫、充血、壞死，較正常體積大3～6倍，一些發(fā)黑。部分大鼠腺外臟器存在明顯的出血、充血。

光鏡下可見(jiàn)胰組織間質(zhì)顯著增寬，有核炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，數(shù)量不等。范圍大小不等的出血改變、腺細(xì)胞壞死十分突出。腺細(xì)胞壞死為大片狀、點(diǎn)狀，核溶解、細(xì)胞輪廓消失。腺外臟器在光鏡下出現(xiàn)水腫、充血、出血等。

根據(jù)Schnidt標(biāo)準(zhǔn)，也就是對(duì)炎癥、壞死、水腫、出血的評(píng)定結(jié)果表明，治療組各項(xiàng)積分均低于ANP組，但是只有壞死這一項(xiàng)的差異具有顯著性。根據(jù)本文提出的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，等級(jí)積分比較或者血管外紅細(xì)胞平均數(shù)獲得的結(jié)果，差異均有顯著性。

電鏡下胰組織細(xì)胞輪廓消失，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)不清。但是微血管中可以看見(jiàn)微血栓形成。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變形、增粗；分泌顆粒密度不等；高爾基體輪廓不清；自噬體和自噬空泡增多。治療組上述變化較ANP組輕。

三、討論

善寧組的生存率比較高，血清胰酶、福水量等指標(biāo)降低，但是根據(jù)Schnidt方法和合Van Ooijen方法無(wú)法對(duì)此進(jìn)行準(zhǔn)確的反映。ANP的兩大特征是胰腺出血、壞死，但是經(jīng)在壞死這一指標(biāo)上存在顯著差異，出血這項(xiàng)未能得到有效的顯示。因此，Schnidt方法和合Van Ooijen方法均存在不足，而且Schnidt方法中水腫、壞死、炎癥過(guò)于冗雜，無(wú)法在實(shí)際中準(zhǔn)確應(yīng)用，因而本文將Schnidt方法中水腫、壞死、炎癥這三項(xiàng)中的0、0.5分刪去，使病理評(píng)分更為方便。但是其出血這項(xiàng)過(guò)于簡(jiǎn)單，因而使用血管外紅細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值，對(duì)出血嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)評(píng)價(jià)。根據(jù)研究結(jié)果，可以對(duì)出血程度方法的差異進(jìn)行有效的體現(xiàn)。

綜上所述，簡(jiǎn)化Schnidt評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)中壞死、水腫、炎癥等3項(xiàng)和出血指標(biāo)，結(jié)合高倍鏡下間隔紅細(xì)胞數(shù)和分級(jí)統(tǒng)計(jì)，制定新的標(biāo)準(zhǔn)，可以對(duì)大鼠急性壞死型胰腺炎的病理組織學(xué)特征進(jìn)行更為準(zhǔn)確合理的評(píng)定。

參考文獻(xiàn)：

[1]李滿， 余佳， 梅方超，等. 肥胖大鼠合并急性壞死性胰腺炎肝臟損傷評(píng)價(jià)[J]. 臨床急診雜志， 2017（7）：531-535.

[2]伍先權(quán)， 蘇永輝， 卜巨源，等. 急性壞死性胰腺炎合并糖尿病大鼠早期細(xì)菌移位的研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版）， 2017， 38（3）：372-378.

[3]孔雷， 包皙婷， 胡皆樂(lè)，等. 急性壞死性胰腺炎大鼠水通道蛋白4與腦損傷關(guān)系探討[J]. 外科理論與實(shí)踐， 2017（2）：139-142.