冒玉娟，張 樂(lè)，馬佳寧

（江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300）

乙酰氨基阿維菌素是阿維菌素的衍生物，是一種高效、低殘留的抗線蟲(chóng)和抗外寄生蟲(chóng)藥物，應(yīng)用于奶牛和肉牛時(shí)無(wú)需休藥期，市場(chǎng)前景非常廣闊［1］。藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，乙酰氨基阿維菌素可以經(jīng)多種途徑吸收，吸收后分布廣泛，藥效均較好［1-3］。目前，乙酰氨基阿維菌素商品化的制劑只有澆潑劑和注射劑2種。澆潑劑較適合于大型動(dòng)物給藥，注射劑雖然生物利用率較高，但給藥不便，對(duì)動(dòng)物的驚擾較大。基于上述原因，為了發(fā)掘乙酰氨基阿維菌素的應(yīng)用潛力，筆者所在的實(shí)驗(yàn)室自制了乙酰氨基阿維菌素乳劑，并首次建立了針對(duì)該劑型的高效液相色譜法（HPLC）含量測(cè)定方法。該測(cè)定方法對(duì)乙酰氨基阿維菌素乳劑的開(kāi)發(fā)提供了參考資料，對(duì)于該劑型的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究都具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

電子分析天平（型號(hào)：BP110S，德國(guó)賽多利斯天平公司）；高效液相色譜儀（型號(hào)：UltiMate 3000，美國(guó)Dionex公司）。

1.2 主要試劑

乙酰氨基阿維菌素對(duì)照品 （批號(hào)：20160701，華北制藥集團(tuán)愛(ài)諾有限公司）；0.5%乙酰氨基阿維菌素乳劑 （批號(hào)分別為：20160702、20170101、20170703，江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院動(dòng)物藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室自制）；乙腈（色譜純，美國(guó)TEDIA公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件：色譜柱為 C18（150×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈—水 （70∶30，V/V），檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm，流速為 1.0 mL/min，進(jìn)樣量為 20 μL，柱溫為25℃。

1.3.2 溶液制備

1.3.2.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取乙酰氨基阿維菌素對(duì)照品50 mg于100 mL容量瓶中，用乙腈—水（70∶30）稀釋定容至刻度線，搖勻，制成 500 μg/mL的對(duì)照品貯備液；隨后精密量取上一步制備的對(duì)照品貯備液5 mL于100 mL容量瓶中，加乙腈—水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻并過(guò)濾，得到25 μg/mL的對(duì)照品溶液。

1.3.2.2 供試品溶液的制備：精密稱取乙酰氨基阿維菌素乳劑適量（相當(dāng)于乙酰氨基阿維菌素1 mg），置 100 mL 容量瓶中，加乙腈—水（70∶30）稀釋至刻度，搖勻并過(guò)濾，得到10 μg/mL的供試品溶液。

1.3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備：按配方比例量取與供試品相當(dāng)?shù)目瞻兹閯?（與乙酰胺基阿維菌乳劑相比只是不含乙酰氨基阿維菌素，其他成分相同）適量，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

1.3.3 適應(yīng)性試驗(yàn)：在1.3.1項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)色譜條件下，分別對(duì)乙酰氨基阿維菌素對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。

1.3.4 線性試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液 0.04、0.4、2.0、4.0、8.0 mL分別置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相配成 0.1、1、5、10 、20 μg/mL 的乙酰氨基阿維菌素溶液，按1.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)色譜條件測(cè)定，以各濃度下的峰面積A對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

1.3.5 回收率試驗(yàn)：分別精密量取對(duì)照品溶液0.04、2.0、8.0 mL置于10 mL容量瓶中，添加配方劑量的空白乳劑基質(zhì)，加流動(dòng)相稀釋成低、中、高3種濃度的對(duì)照品，每個(gè)濃度平行配制3份，按1.3.1項(xiàng)下試驗(yàn)色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.3.6 精密度試驗(yàn)：取1.3.2.1項(xiàng)下制備的對(duì)照品溶液，精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋成10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定。

1.3.7 檢測(cè)限與定量限：將乙酰氨基阿維菌素對(duì)照品溶液用流動(dòng)相多步稀釋后逐一進(jìn)樣，按信噪比為3計(jì)算檢測(cè)限，按信噪比為10計(jì)算定量限。

1.3.8 樣品含量測(cè)定：精密量取3批次的乙酰氨基阿維菌素乳劑樣品，每批次 3份，按1.3.2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，在該試驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行含量測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，乙酰氨基阿維菌素中主要成分B1a（該試驗(yàn)以B1a的峰面積作為定量指標(biāo)）的保留時(shí)間在10 min左右，陰性對(duì)照液在此時(shí)間附近沒(méi)有出峰，對(duì)乙酰氨基阿維菌素的HPLC測(cè)定沒(méi)有影響，專屬性良好，滿足檢測(cè)要求。

2.2 線性試驗(yàn)

以各濃度下的峰面積A對(duì)對(duì)照品濃度C進(jìn)行線性回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為C＝1.6015A－0.00206，r＝1.000 （n＝5）。 表明在 0.1～20 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，峰面積對(duì)濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3 回收率試驗(yàn)

回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，高、中、低3種濃度對(duì)照品的平均回收率在96.5%～100.5%，RSD在0.72%～1.40%，結(jié)果符合方法學(xué)的要求。

2.4 精密度試驗(yàn)

在1.3.1項(xiàng)的檢測(cè)色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定。結(jié)果表明，RSD為0.96%，樣品的多次檢測(cè)具有良好的重現(xiàn)性，精密度良好。

2.5 檢測(cè)限與定量限

圖1 高效液相色譜圖

用流動(dòng)相將對(duì)照品溶液用多步稀釋后，逐一進(jìn)樣。結(jié)果表明，其檢測(cè)限為15 ng/mL，定量限為30 ng/mL。

2.6 樣品含量測(cè)定

表2為樣品含量測(cè)定的結(jié)果。由表2可知，3批樣品的平均含量分別為標(biāo)示量的98.56%、95.68%、101.35%，表明該檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速，可用于乙酰氨基阿維菌素乳劑的含量測(cè)定。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果（n=9）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

乙酰氨基阿維菌素的測(cè)定流動(dòng)相多采用乙腈—水—三氟乙酸［4］，在該試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)在未加入三氟乙酸的情況下，其峰型良好，沒(méi)有拖尾。此外，反相色譜柱常用的有C8、C18柱，都可用于弱極性類藥物的分析，該試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)利用C18柱的分離效果更好，適合乙酰氨基阿維菌素乳劑的含量測(cè)定。

4 結(jié)論

該實(shí)驗(yàn)室成功建立了乙酰氨基阿維菌素乳劑的HPLC含量測(cè)定方法，在選定的色譜條件下，主藥和輔料分離效果好，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高，可用于乙酰氨基阿維菌素乳劑及其他劑型的質(zhì)量分析。