閆天懿，安 林，李 萍，賈玉璽

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，吉林 長(zhǎng)春 130033； 2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院皮膚科，吉林 長(zhǎng)春 130033)

慢性蕁麻疹是臨床上常見的疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,與多種內(nèi)外因素相關(guān)，如食物、藥物、吸入物、物理因素及系統(tǒng)疾病等均可能是蕁麻疹的誘發(fā)因素[1-3]。由于該病缺乏有效的治療手段，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，近年來(lái)，關(guān)于蕁麻疹發(fā)生機(jī)制及治療研究已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。既往研究[4-6]表明:蕁麻疹的發(fā)生不僅與IgE介導(dǎo)的體液免疫有關(guān)，也有細(xì)胞免疫的參與，蕁麻疹與Th17/Th1細(xì)胞和Tc17/Tc1比例失調(diào)相關(guān)[4]，但目前有關(guān)伴有并發(fā)癥的慢性蕁麻疹患者CD4+T、CD8+T和CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及比例的研究尚未見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道。為進(jìn)一步探討T淋巴細(xì)胞在慢性蕁麻疹發(fā)病機(jī)制中的作用，闡明慢性蕁麻疹發(fā)生的免疫學(xué)機(jī)制，本文作者采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析68例慢性蕁麻疹患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)情況，并進(jìn)一步研究伴有不同并發(fā)癥慢性蕁麻疹患者外周血 T淋巴細(xì)胞亞群的改變情況。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇本院2017年1—2 月68例慢性蕁麻疹門診患者作為研究對(duì)象。慢性蕁麻疹納入標(biāo)準(zhǔn)：①皮膚突然出現(xiàn)大小不等、形狀不一的風(fēng)團(tuán)，境界清楚，皮疹此起彼伏，伴瘙癢，消退后不留痕跡，反復(fù)發(fā)作 6 周以上；②年齡 18 歲以上，符合慢性蕁麻疹診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠、哺乳期婦女；②物理性蕁麻疹及特殊類型蕁麻疹；③過去1個(gè)月內(nèi)應(yīng)用抗組胺藥物、免疫調(diào)節(jié)劑或糖皮質(zhì)激素的患者。68例患者中，男性 30例，女性 38例；年齡18～79歲，平均年齡(51.7±6.34)歲，病程2月～12年，平均病程(31.6±15.4)個(gè)月。并發(fā)自身免疫性疾病11例(類風(fēng)濕3例、紅斑狼瘡2例、甲狀腺疾病4例、白癜風(fēng)2例)，并發(fā)幽門螺旋桿菌感染13例，并發(fā)乙肝和丙肝感染10例，并發(fā)腫瘤6例，無(wú)并發(fā)癥患者28例。對(duì)照組為健康體檢者 70名，其中男性32名，女性 38名；年齡20～76歲，平均年齡(49.9±5.99)歲。2組研究對(duì)象年齡和性別構(gòu)成比等基本資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院倫理委員會(huì)審批且所有受試者均對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑和主要儀器 CD3、CD4和CD8細(xì)胞試劑購(gòu)自美國(guó) BD 公司。Cytomics FC500流式細(xì)胞儀為美 國(guó) Becton Dickinson 公司產(chǎn)品，LD4-2A(I)型離心機(jī)為北京京立公司產(chǎn)品。

1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群 采集各組研究對(duì)象外周血(肝素抗凝)2 mL,檢測(cè)方法嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作，分離淋巴細(xì)胞, 采用 MultiSET 軟件上機(jī)，檢測(cè)CD4+T、CD8+T和CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及比例，計(jì)算CD4+/CD8+比值。

2 結(jié) 果

2.1 慢性蕁麻疹組和正常對(duì)照組研究對(duì)象外周血T細(xì)胞亞群 與對(duì)照組比較，慢性蕁麻疹組患者外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低(t=-15.239，P<0.01)，CD8+T淋巴細(xì)胞比例升高(t=8.519，P=0.001)，CD4+/CD8+比值下降(t=-9.545，P=0.001)，CD3+T淋巴細(xì)胞比例無(wú)明顯變化(t=1.475，P=0.142)。見表 1。

表1 2組研究對(duì)象外周血 T淋巴細(xì)胞亞群比例

*P<0.01 compared with control group.

2.2 不同病程慢性蕁麻疹患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群 與病程≤12個(gè)月慢性蕁麻疹患者比較，病程>12個(gè)月慢性蕁麻疹患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低(t=2.359，P=0.021)，CD8+T 淋巴細(xì)胞比例升高 (t=-3.093，P=0.003)，CD4+/CD8+比值下降(t=2.471，P=0.016)，CD3+T淋巴細(xì)胞比例無(wú)明顯變化(t=1.145，P=0.236)。見表2。

表2 不同病程慢性蕁麻疹患者T淋巴細(xì)胞亞群比例

*P<0.05 compared with ≤12 months.

2.3 不同并發(fā)癥慢性蕁麻疹患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群 與無(wú)并發(fā)癥組慢性蕁麻疹患者比較，并發(fā)幽門螺旋桿菌感染、血液病或惡性腫瘤、自身免疫病、乙肝/丙肝的慢性蕁麻疹患者外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低(t1= 4.060，P1<0.01；t2= 3.725，P2=0.001；t3= 5.756，P3<0.01；t4= 4.333，P4=0.001)，CD8+T淋巴細(xì)胞比例明顯升高 (t1= -2.049，P1=0.047；t2=-3.199，P2=0.003；t3=-4.913，P3<0.01；t4=-3.484，P4=0.001)，CD4+/CD8+比值下降(t1=3.771，P1=0.001；t2= 2.721，P2=0.001；t3= 8.985，P3=0.001；t4=2.144，P4=0.013)，CD3+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低(t1= 2.471，P1=0.001；t2=2.190，P2=0.036；t3=4.119，P3<0.01；t4= 2.835，P4=0.007)。見表3。

表3 伴有不同并發(fā)癥慢性蕁麻疹患者T淋巴細(xì)胞亞群比例

*P<0.05 compared with no complication.

3 討 論

T 淋巴細(xì)胞是介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要細(xì)胞，在人 體 免 疫 系 統(tǒng) 中 扮 演 重 要 的角色，CD3分子在所有成熟T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)，是成熟T淋巴細(xì)胞的標(biāo)志。 CD4+T 淋巴細(xì)胞能夠輔助B細(xì)胞和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活化，并產(chǎn)生抗體使巨噬細(xì)胞激活，增加其提呈抗原及殺傷細(xì)胞內(nèi)微生物的能力[8-9], CD8+T淋巴細(xì)胞為具有殺傷活性的細(xì)胞，能夠通過分泌腫瘤壞死因子(TNF)顆粒酶和穿孔素等細(xì)胞因子殺傷靶細(xì)胞，介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡[10-11]。其中CD4+T細(xì)胞被提呈的抗原激活后,能成熟并分化為2個(gè)不同的功能亞群:Th1和Th2，Th2細(xì)胞能夠釋放白細(xì)胞介素 4、5和10等細(xì)胞因子，誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的激活，引起IgE及組胺釋放，發(fā)生炎癥反應(yīng)及超敏反應(yīng)，導(dǎo)致慢性蕁麻疹皮損的發(fā)生[12]。Th1細(xì)胞能夠釋放γ干擾素和白細(xì)胞介素12等細(xì)胞因子，減緩超敏反應(yīng)的發(fā)生及Th細(xì)胞向Th2 細(xì)胞分化，減輕慢性蕁麻疹的臨床癥狀[4，13-14]。紅斑狼瘡、干燥綜合征、風(fēng)濕病、甲狀腺炎和甲狀腺功能亢進(jìn)等自身免疫性疾病與慢性蕁麻疹發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)[15-18],提示免疫失衡可能是慢性蕁麻癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。

本研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢性蕁麻疹患者外周血 T淋巴細(xì)胞亞群的變化，結(jié)果顯示：患者組CD3+T細(xì)胞比例與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD8+T細(xì)胞比例明顯高于對(duì)照組，而CD4+T細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值明顯低于對(duì)照組，提示慢性蕁麻疹患者外周血免疫細(xì)胞功能失衡與疾病的發(fā)生有密切關(guān)系。本研究對(duì)不同病程慢性蕁麻疹患者外周血 T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了分析，與病程≤12個(gè)月慢性蕁麻疹患者比較，病程>12個(gè)月慢性蕁麻疹患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例明顯降低，CD8+T 淋巴細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值下降，表明病程越長(zhǎng)，患者的免疫功能失衡越嚴(yán)重。本研究結(jié)果顯示：慢性蕁麻疹伴有并發(fā)癥的患者，尤其是并發(fā)自身免疫性疾病組患者，CD4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+比值明顯降低，CD8+T比例明顯升高。關(guān)于并發(fā)結(jié)締組織病患者出現(xiàn)的蕁麻疹是自身免疫性疾病本身的皮膚表現(xiàn)，還是2種疾病共同的皮膚表現(xiàn)，還有待進(jìn)一步的研究。慢性蕁麻疹長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)作，逐漸增加機(jī)體對(duì)自身抗原的敏感性，可能改變了疾病自身的特點(diǎn)，增加了自身免疫的成分，使蕁麻疹的發(fā)病具有自身免疫學(xué)的背景，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞免疫功能紊亂，表明CD3+T淋巴細(xì)胞比例、CD4+T淋巴細(xì)胞比例、CD8+T淋巴細(xì)胞比例和 CD4+/CD8+比值與慢性蕁麻疹患者的臨床特征有一定的關(guān)聯(lián)。建議對(duì)病程較長(zhǎng)及伴有并發(fā)癥的慢性蕁麻疹患者進(jìn)行抗核抗體等免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)，以便早期發(fā)現(xiàn)并發(fā)存在的系統(tǒng)性自身免疫性疾病[19-20]。

綜上所述, T淋巴細(xì)胞亞群失衡與慢性蕁麻疹發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)聯(lián)，對(duì)慢性蕁麻疹患者進(jìn)行T淋巴細(xì)胞檢測(cè)，對(duì)評(píng)估病情、完善治療方案以及預(yù)測(cè)預(yù)后具有一定的意義，本研究結(jié)果為慢性蕁麻疹的臨床治療提供了新的思路。