解振強(qiáng)，韓柏明，吳偉民*

（1. 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇句容 212400；2. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所，江蘇南京 212214）

夏黑葡萄（Summer Black）由‘巨峰’和‘トム’雜交而成三倍體無(wú)核品種，早熟[1]?！?yáng)光玫瑰’（Shine Muscat）葡萄是‘安蕓津21號(hào)’與‘白南’雜交而成的新品種，歐美雜種，由于其具有特殊的玫瑰香味，風(fēng)味優(yōu)，近幾年推廣面積越來(lái)越大[2]。‘魏可’（Wink）是‘Kubel Muscat’與‘甲斐路’的雜交種，極晚熟歐亞種[3]。這3個(gè)品種成為多個(gè)地方早中晚熟葡萄搭配種植的優(yōu)良品種。在栽培過(guò)程中常使用赤霉素（GA3）和氯吡脲（CPPu）處理果實(shí)。

GA3和CPPu是2種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，國(guó)內(nèi)外已經(jīng)長(zhǎng)期而廣泛地應(yīng)用于葡萄拉長(zhǎng)花序、提高坐果率和果實(shí)膨大等方面[4-7]。全世界范圍內(nèi)對(duì)兩種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑研究不斷深入，不同品種對(duì)它們使用濃度、使用時(shí)間、果實(shí)品質(zhì)及生理反應(yīng)等不盡相同[8-10]。

目前，各地區(qū)應(yīng)用GA3和CPPu對(duì)葡萄果實(shí)處理千差萬(wàn)別，一些地區(qū)盲目地追求大果粒，不合理使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在一定程度上造成了果實(shí)品質(zhì)的下降。為了規(guī)范二者使用方法，本研究以‘夏黑’（早熟）、‘陽(yáng)光玫瑰’（中熟）、‘魏可’（晚熟）3個(gè)不同成熟期和生態(tài)類(lèi)型的品種為研究對(duì)象，探討不同濃度的GA3和CPPu混合液處理葡萄果實(shí)后，二者在果實(shí)中的殘留動(dòng)態(tài)規(guī)律以及對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響，為在生產(chǎn)實(shí)踐中科學(xué)合理地使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑提供指導(dǎo)和借鑒。浸蘸對(duì)照，分別記為WKⅠ、WKⅡ、WKⅢ、WKⅣ。

每處理3株，重復(fù)3次。處理后第7天、14天、21天以及果面完全著色后第15天分4次取樣，分別記為1、2、3、4。

1.2.2 檢測(cè)方法

以乙腈/水/甲酸提取方法提取樣品中植物內(nèi)源激素[11]，以waters ACQuiTY uPLC高效液相色譜儀串聯(lián)Xevo TQ質(zhì)譜儀測(cè)定GA3及CPPu。GA3或CPPu含量低于儀器定量限（GA3為0.2 μg/kg，CPPu為0.1 μg/kg）用0 mg/kg表示。

果實(shí)品質(zhì)于第4次采樣后立即測(cè)定。游標(biāo)卡尺測(cè)量果實(shí)縱徑、橫徑，1%電子天平測(cè)量單果重。采用折光儀法測(cè)定可溶性固形物含量[12]。采用酸堿滴定法測(cè)定可滴定酸含量[13]；鉬藍(lán)比色法測(cè)定VC含量[14]；采用硫酸消解，微量凱氏定氮法測(cè)定植物粗蛋白含量[15]。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件處理，并對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響采用最小顯著差法（LSD）進(jìn)行多重比較。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’‘魏可’3種不同生態(tài)型和成熟期的主栽品種為研究對(duì)象，分別選擇樹(shù)勢(shì)一致、生長(zhǎng)健壯的5年生成齡樹(shù)為試驗(yàn)材料。GA3為美商華侖生物科學(xué)公司生產(chǎn)的奇寶（含量20%，1 g裝），CPPu（為四川省蘭月科技有限公司生產(chǎn)的福美特?氯吡脲（含量0.1%，10 mL裝）。

1.2 方法

1.2.1 花（果）穗處理

‘夏黑’盛花期用濃度為20 mg/kg GA3浸蘸花穗保果，謝花后第10天，用GA3＋CPPu分別為25 mg/kg＋6 mg/kg、50 mg/kg＋4 mg/kg、75 mg/kg＋2 mg/kg的混合溶液膨大，清水浸蘸對(duì)照，分別記為XhⅠ、XhⅡ、XhⅢ、XhⅣ?！?yáng)光玫瑰’謝花后第3天，用25 mg/kg的GA3保果，第2次于保果后第12天用GA3＋CPPu分別為15 mg/kg＋6 mg/kg、20 mg/kg＋4 mg/kg、25 mg/kg＋2 mg/kg的混合溶液膨大處理，清水浸蘸對(duì)照，分別記為YGⅠ、YGⅡ、YGⅢ、YGⅣ?！嚎伞谥x花后第10天用GA3＋CPPu分別為30 mg/kg＋6 mg/kg、40 mg/kg＋4 mg/kg、50 mg/kg＋2 mg/kg的混合溶液膨大處理，清水

2 結(jié)果分析

2.1 GA3、CPPU殘留規(guī)律

2.1.1 ‘夏黑’果實(shí)中GA3、CPPu殘留規(guī)律

目前，我國(guó)對(duì)無(wú)公害果品GA3殘留尚未規(guī)定最高限值，本試驗(yàn)最高限值采用日本規(guī)定其在水果中最高限值GA3（0.2 mg/kg）[16]，我國(guó)葡萄中CPPu最高殘留限值0.05 mg/kg作為最高限值。

圖1A表明，不同濃度GA3處理后，果實(shí)中GA3殘留量均呈下降趨勢(shì)。不同濃度GA3處理14天后，果實(shí)中的GA3殘留量均低于最高限值。其中，低濃度GA3處理7 d后的殘留量已經(jīng)處于最高限值以下。隨著GA3處理濃度的增高，果實(shí)中GA3消解速率相應(yīng)加大。

圖1B顯示，不同處理后，CPPu在果實(shí)中的殘留量呈現(xiàn)整體下降趨勢(shì)，第2次處理后的第21天其殘留量幾乎可忽略不計(jì)。XhⅠ處理的前14天CPPu消解緩慢，但14天后加速消解；XhⅡ、XhⅢ處理分別于21天、14天后CPPu殘留接近0 mg/kg。

2.1.2 ‘陽(yáng)光玫瑰’果實(shí)中GA3、CPPu殘留規(guī)律

圖2A揭示不同處理7 d后，果實(shí)中GA3殘留均在最高限值以下。在處理后的14 d內(nèi)，隨著GA3濃度的增加，其消解速率呈現(xiàn)增大趨勢(shì)。

圖2B顯示，各品種第2次處理7 d后果實(shí)中CPPu的殘留量均低于最高限值。YGⅠ、YGⅡ處理的果實(shí)成熟后，CPPu殘留量接近于0.1 μg/kg，而YGⅢ處理后第14天CPPu殘留量即小于0.1 μg/kg，說(shuō)明CPPu濃度越高消解越慢。

2.1.3 ‘魏可’果實(shí)中GA3、CPPu殘留規(guī)律

圖3A表明，‘魏可’成熟后GA3、CPPu在果實(shí)中的殘留量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于最高限值，其消解規(guī)律總體上與‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’類(lèi)似。WKⅠ、WKⅡ、WKⅢ處理后的7 d內(nèi)，GA3在果實(shí)中的殘留量均高于最高限值，14 d后GA3殘留量才達(dá)到最高限值以下。試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，GA3處理濃度越高，其在‘魏可’前期果實(shí)中的殘留越多。

圖1 ‘夏黑’果實(shí)中GA3、CPPU消解規(guī)律（A為GA3，B為CPPU。下同）Figure 1 Digestion regular pattern of GA3 and CPPU in 'Summer Black' (A was GA3, B was CPPU, the same as below)

圖2 ‘陽(yáng)光玫瑰’果實(shí)中GA3、CPPU消解規(guī)律Figure 2 Digestion regular pattern of GA3 and CPPU in 'Shine Muscat'

圖3 ‘魏可’果實(shí)中GA3、CPPU消解規(guī)律Figure 3 Digestion regular pattern of GA3 and CPPU in 'Wink'

圖3B揭示W(wǎng)KⅠ、WKⅡ、WKⅢ處理后的7 d內(nèi)，CPPu隨著處理濃度增高，其在果實(shí)中的殘留也隨之增多。WKⅠ、WKⅢ處理于14 d后CPPu在果實(shí)中的殘留量小于0.1 μg/kg，而WKⅡ處理后CPPu的殘留量在果實(shí)成熟后才低于0.1 μg/kg，說(shuō)明該處理不利于果實(shí)中CPPu的消解。WKⅣ果實(shí)著色15 d后，圖中顯示對(duì)照采收時(shí)期CPPu濃度略微升高，但遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)限值，可能是由于儀器檢測(cè)誤差造成的。

2.2 GA3、CPPU對(duì)果實(shí)品質(zhì)的影響

3個(gè)處理都顯著增大‘夏黑’葡萄果粒質(zhì)量，降低蛋白質(zhì)含量，XhⅢ處理蛋白質(zhì)降低最明顯；XhⅡ降低果實(shí)VC含量，達(dá)到顯著性差異；3個(gè)處理后葡萄果形指數(shù)為1.02～1.04、可溶性固形物19.2%～19.7%、果實(shí)可滴定酸0.402%～0.416%均與對(duì)照相比影響較小，均沒(méi)有產(chǎn)生顯著性差異（表1）。

3個(gè)處理影響‘陽(yáng)光玫瑰’葡萄蛋白質(zhì)含量，YGⅢ處理降低最明顯，達(dá)到顯著性差異；3個(gè)處理后葡萄單果重5.96～7.79 g、果形指數(shù)為1.14～1.18、可溶性固形物17.1%～18.6%、果實(shí)可滴定酸0.268%～0.316%、果實(shí)VC為5.27～5.54 mg/g均與對(duì)照相比影響較小，均沒(méi)有產(chǎn)生顯著性差異（表2）。

對(duì)‘魏可’葡萄的3個(gè)處理，增加了單果重，WKⅠ分別增加了蛋白質(zhì)含量和降低了維生素C含量，WKⅠ、WKⅢ增加了可滴定酸，達(dá)到顯著性差異；3個(gè)處理果果形指數(shù)為1.41～1.55、可溶性固形物16%～19.9%與對(duì)照相比影響較小，均沒(méi)有產(chǎn)生顯著性差異（表3）。

3 討論與結(jié)論

GA3、CPPu在葡萄果實(shí)膨大中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，外源GA3增強(qiáng)了酸性轉(zhuǎn)化酶（Ai）和中性轉(zhuǎn)化酶（Ni）以及蔗糖合成酶（SS）活性，參與葡萄糖積累及代謝的調(diào)控[17]?？茖W(xué)合理地使用GA3、CPPu，其在葡萄果實(shí)中的殘留符合果品安全要求。本研究結(jié)果表明，不同濃度GA3、CPPu的混合液對(duì)不同品種果實(shí)生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響表現(xiàn)各異。

表1 不同處理對(duì)‘夏黑’葡萄果實(shí)品質(zhì)影響Table 1 Effect of different treatment on the quality of 'Summer Black' grapevine berries

表2 不同處理對(duì)‘陽(yáng)光玫瑰’葡萄果實(shí)品質(zhì)影響Table 2 Effect of different treatment on the quality of 'Shine Muscat' grapevine berries

表3 對(duì)‘魏可’葡萄果實(shí)品質(zhì)影響Table 3 Effect of different treatment on the quality of 'Wink' grapevine berries

外源GA3、CPPu在‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’‘魏可’3個(gè)品種中的殘留規(guī)律表現(xiàn)為：二者在果實(shí)中的殘留呈下降趨勢(shì)，在果實(shí)成熟后其含量均低于最高限值。隨著GA3濃度的升高，果實(shí)前期殘留量相應(yīng)增加，且濃度越高消解速率越快；外源性CPPu濃度越高，其前期（處理后的14天內(nèi)）在‘夏黑’‘魏可’果實(shí)中的殘留越低，說(shuō)明高濃度（6 mg/kg）的CPPu處理后前期消解速度遠(yuǎn)大于低濃度（2 mg/kg、4 mg/kg）處理。

前人許多研究表明，使用植物生長(zhǎng)GA3、CPPu能夠顯著增加葡萄果實(shí)的粒質(zhì)量、穗質(zhì)量[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)，‘陽(yáng)光玫瑰’無(wú)核化后，再用15 mg/kg GA3＋6 mg/kg CPPu混合液處理，其單粒重比對(duì)照小，可能與處理時(shí)間、濃度不適宜有關(guān)。各處理對(duì)不同品種的果實(shí)品質(zhì)影響表現(xiàn)存在差異。陳婷等[20]研究表明，GA3、CPPu混合液處理后，‘夏黑’的可溶性固形物含量顯著提升，張靜等[21]認(rèn)為GA3、CPPu處理的果實(shí)著色緩慢，成熟期推遲本，降低了可溶性固形物含量。本研究發(fā)現(xiàn)，2種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)對(duì)3個(gè)品種的可溶性固形物影響較小，說(shuō)明處理濃度、時(shí)間、方法不同，對(duì)不同品種的可溶性固形物含量的影響存在差異，具體影響機(jī)理需要進(jìn)一步研究。史文婷[22]研究表明，不同處理不僅能提高‘陽(yáng)光玫瑰’的滴定酸含量，也能降低其含量。本研究發(fā)現(xiàn)不同配比混合液以提高‘魏可’果實(shí)的滴定酸含量，對(duì)‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’沒(méi)有影響，可能與二者所采用的濃度或品種不同有關(guān)。不同處理對(duì)‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’果實(shí)VC含量影響未達(dá)到顯著差異水平。30 mg/kg GA3＋6 mg/kg CPPu處理后，‘魏可’果實(shí)VC含量極顯著降低，因此生產(chǎn)中應(yīng)謹(jǐn)慎選擇配比。各處理對(duì)不同品種葡萄果實(shí)蛋白質(zhì)的影響不盡相同，在‘夏黑’‘陽(yáng)光玫瑰’上總體表現(xiàn)為抑制其合成或促進(jìn)其降解。30 mg/kg GA3＋6 mg/kg CPPu混合液處理雖然極顯著提升了‘魏可’的蛋白質(zhì)含量，但同時(shí)極顯著降低了VC含量、提高了滴定酸含量，不利于果實(shí)品質(zhì)提升。

由此可見(jiàn)，外源性GA3、CPPu對(duì)葡萄可溶性固形物、滴定酸、VC以及蛋白質(zhì)的相關(guān)代謝基因表達(dá)的影響極其復(fù)雜，其分子生物學(xué)、代謝動(dòng)力學(xué)等機(jī)理需進(jìn)一步研究。