萬廷友 肖拉拉 吳位珩 徐景峨 楊莉 劉鏡 孫啟躍 蒲魯琴 廖梅

（1，貴州省大方縣動物疫病預防控制中心 551600；2，貴州省畜牧獸醫(yī)研究所 550005；3，貴州省畜禽遺傳資源管理站 550001）

牛焦蟲病是由蜱為媒介傳播的一種蟲媒傳染病，焦蟲寄生于牛的紅細胞內。主要臨床癥狀是高熱貧血或黃疸，反芻停止，泌乳停止，食欲減退，消瘦，嚴重者則造成死亡[1]。牛焦蟲病在貴州省的流行已有40多年的歷史，這是由于貴州屬于高原地帶，多山地灌叢，氣候多溫暖潮濕，適宜傳播媒介蜱的生長發(fā)育，因此，牛焦蟲病分布于全省各地州市縣，凡是引進純種牛、雜交牛和本地?；旌巷曫B(yǎng)放牧的場所，極容易發(fā)生和流行此病，如不及時治療其發(fā)病死亡率則占發(fā)病數(shù)50%～100%[2]。大方縣2016年8月至2017年6月間，通過恒大集團大方扶貧公司引進的西門塔爾能繁母牛陸續(xù)發(fā)病，由于當?shù)孬F醫(yī)缺乏經(jīng)驗，不能及時準確診斷該病，按常規(guī)方法采用抗生素治療，效果不佳，導致部分病牛死亡。筆者及時與貴州省畜牧獸醫(yī)研究所相關專家進行會診，并無菌采集病料 （血涂片、全血、病死牛肝、肺、脾、心、腎、淋巴結等）送至貴州省畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病研究室進行檢測，確診為牛焦蟲病，嚴重的病牛系繼發(fā)牛出敗而死亡?，F(xiàn)將具體情況匯報如下。

1 發(fā)病情況

2016年8 月至2017年6月間，大方縣通過恒大集團大方扶貧公司陸續(xù)引進1～3歲西門塔爾能繁母牛，通過隔離觀察后發(fā)放給貧困農戶飼養(yǎng)，每戶養(yǎng)牛1～3頭，截止2017年6月12日共計發(fā)放扶貧牛1604頭，在農戶飼養(yǎng)過程中不同程度發(fā)生焦蟲病，波及全縣27個鄉(xiāng)鎮(zhèn) （辦事處），發(fā)病133頭，發(fā)病率為8.29% （133/1604）死亡57頭，死亡率為3.55% （57/1604）。

2 臨床及剖檢癥狀

2.1 臨床癥狀

病牛出現(xiàn)體溫升高達40～41.5℃，呈稽留熱。病牛精神沉郁，采食下降，反芻減少，眼結膜蒼白，貧血，喘氣，消瘦，拉茶色尿，怕累，大部分病牛出現(xiàn)啃土等異嗜現(xiàn)象。后期病牛流涎，食欲廢絕，反芻停止，后軀無力，臥地不起，倒地后3d左右死亡。同時在病牛體上采集到微小牛蜱。

2.2 剖檢癥狀

病牛脾臟脾髓變軟，呈暗紅色，白脾髓大呈顆粒狀突出表面；心肌柔軟，呈黃紅色，心臟表面彌漫性出血，心內膜點狀出血；膀胱內充盈大量紅色尿液，黏膜有出血點；氣管內有泡沫狀液體，肺臟切開輕微擠壓可見帶氣泡的分泌物；血液稀薄。

3 病樣的采集

無菌采集死亡牛的肝、肺、脾、心、腎、淋巴結等組織，冷藏置于保鮮箱中；無菌采集病牛的耳尖靜脈血，制成血涂片，待自然干燥后，置于玻片盒中；微小牛蜱置于無菌小玻璃瓶中，一并送至貴州省畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病研究室。

4 實驗室檢測

（1）血涂片染色、鏡檢，將自然干燥的血涂片，經(jīng)甲醇固定5min，用姬姆薩染液染色40～50min，沖洗，干燥，用40×10倍和100×10倍光學顯微鏡鏡檢。

姬姆薩染色液的配制：取姬姆薩染料0.6g，加于甘油50ml中，置55～60℃水浴中1.5～2h后，加入甲醇50ml，靜置1d以上，濾過即成儲存之姬姆薩染色原液。臨染色前，于每毫升蒸餾水中加入上述原液一滴，即成姬姆薩染色液。應當注意，所用蒸餾水必須為中性或微堿性，若蒸餾水偏酸，可用于每10ml加入1%碳酸鉀一滴，使其變成微堿性。

鏡檢可見，持續(xù)高熱的病牛血液中大部分的紅細胞正常形態(tài)被破壞，紅細胞內有梨型、環(huán)形、逗點形、桿狀形蟲體，有些牛血涂片混合有附紅細胞體感染，鏡檢可見紅細胞邊緣不整齊，呈菜花狀或星狀狀，癥狀嚴重的病牛，80%以上紅細胞被感染 （見圖1）。

（2）采集到的微小牛蜱，取腹腔血涂片，自然干燥后，按上述方法染色鏡檢，可見紅細胞內有梨型、環(huán)形、逗點形、桿狀形蟲體。

（3）將采集的病料組織接種于10%犢牛血清肉湯培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，可見肉湯均勻渾濁，將培養(yǎng)物轉接于10%犢牛血清固體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，可見灰白色、露珠狀、針尖大小的菌落，美藍染色鏡檢可見典型的兩極著色，革蘭氏染色為陰性的小桿狀細菌。

（4） PCR診斷：采用建立的牛出敗病原 （多殺性巴氏桿菌(Pm)）PCR診斷方法對和純培養(yǎng)物進行PCR擴增，結果可見在585bp出現(xiàn)目標帶 （見圖2），判斷為陽性。引物的序列為：Pm1 5′-TGCTCTATCCGCTATTTACCCAG-3′； Pm2 5′-TCCCACCACATCAAATCCCG-3′。

5 結論

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀 （高熱稽留熱、眼結膜蒼白，貧血，拉茶色尿等）、剖檢癥狀及實驗室診斷，確診為焦蟲病感染，嚴重后繼發(fā)牛出敗感染，導致牛死亡。

6 防治對策

6.1 消滅中間宿主

采用化學滅蜱、生物防治滅蜱、免疫學預防方法滅蜱等綜合措施，可控制微小牛蜱對牛的侵擾，這也是防治牛焦蟲病的基礎。消滅牛身體上寄生蜱和圈舍內外的蜱，可采取人工捉蜱或體表噴灑藥物的方法，用2.5%敵殺死油乳劑按1：200～l：250倍稀釋，每隔15d噴霧牛體1次，或1.5%～2%敵百蟲溶液，每7天噴霧1次，還有如殘殺威、溴氰菊酯、氯氰菊酯、驅蜱靈等按說明書劑量使用。對圈舍內墻面、縫隙應定期噴灑藥物滅蜱，用藥時謹防人畜中毒；另外，結合人工種草、深翻土地、改良土壤等措施破壞蜱的生存條件，以消滅外界環(huán)境中的蜱；給感染微小牛蜱的牛注射大環(huán)內酯類抗生素如伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素的長效制劑來控制或消滅蜱。

6.2 定期進行藥物預防

由于大方縣屬于高原地帶，多山地灌叢，氣候多溫暖潮濕，適宜傳播媒介蜱的生長發(fā)育，因此，引進純種牛、雜交牛和本地?；旌巷曫B(yǎng)放牧的場所，極容易發(fā)生和流行此病，除積極滅蜱外，在引進牛應激階段過后，在發(fā)病季節(jié)前 （5月前）采用三氮脒、青蒿素按治療量的一半預防焦蟲病，一次用藥可預防2個月左右。在老疫區(qū)一般應進行2～3次預防。同時，在引進牛后，應及時接種牛出敗疫苗。

6.3 加強飼養(yǎng)管理

5～9月是蜱的活動高峰期，牛群應避免到大量滋生蜱的牧地放牧。不從疫區(qū)引進牛，引進牛應作隔離檢疫，對發(fā)病的牛進行隔離飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)血液紅細胞內有蟲體的應及時治療，病愈牛有帶蟲免疫現(xiàn)象，當營養(yǎng)不良、過度使役、環(huán)境氣候突變等原因，可使病反復發(fā)作，遭受重復感染。因此，應加強飼養(yǎng)管理，減少應激，提高機體抵抗力，才能有效降低本病的發(fā)生。

6.4 早期診斷

圖1 牛血涂片焦蟲顯微攝影

圖2 PCR擴增結果

對臨床疑似病例 （如5～9月有發(fā)熱現(xiàn)象的牛）進行涂片鏡檢，通過早期診斷結果對陽性牛場采取防治措施，有助于降低本病的發(fā)病率與死亡率。對零星發(fā)生該病農戶的牛采取有效防治，以防該病流行，最大限度降低農戶損失。

6.5 治療

三氮脒深部肌肉注射，重癥病牛首次加腎上腺素，同時注射磺胺間甲氧嘧啶鈉控制繼發(fā)感染，連用3d。并采用中藥輔助治療：大蒜200g、灶心土100g、血余炭50g、土酒曲20g、山楂50g、厚樸50g搗碎加水調勻灌服。采用該方法治愈發(fā)病牛67頭。