陳 益，夏艷勛，賀桂芬，鄧同煒，李文剛，石冬梅

（河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，鄭州 450046）

兔球蟲(chóng)病是家兔最常見(jiàn)的原蟲(chóng)病，在我國(guó)各地廣泛流行，幼兔幾乎100%感染，死亡率極高［1-5］，由于無(wú)有效疫苗，該病主要依賴化學(xué)藥物防治。聚維酮碘、二氧化氯和三氯異氰尿酸是生產(chǎn)中常用消毒劑，對(duì)細(xì)菌、病毒等高效，但迄今未見(jiàn)其抑殺球蟲(chóng)卵囊的研究報(bào)道。本試驗(yàn)選用這3種消毒劑在不同條件下體外作用于兔球蟲(chóng)卵囊，以檢測(cè)其對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響，為兔球蟲(chóng)病的防制提供參考。

1 材料

1.1 聚維酮碘 濃度99.8%，上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)。配制成500 mg/L、1 000 mg/L、2 000 mg/L三種不同濃度溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 二氧化氯 有效氯12%，北京京久環(huán)?？萍加邢薰旧a(chǎn)。配成不同有效氯濃度溶液：25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 三氯異氰尿酸 有效氯450 mg/g，德清縣康博消毒化工有限公司生產(chǎn)。配成3種不同有效氯溶液：250 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.4 重鉻酸鉀 分析純，上海浦江化工廠生產(chǎn)。稱取2.5 g重鉻酸鉀溶于100 mL蒸餾水，配成2.5%重鉻酸鉀溶液備用。

2 方法

2.1 卵囊收集

采集加利福利亞兔2 h內(nèi)排出的糞便，研細(xì)，加入約10倍體積的飽和鹽水，充分?jǐn)噭颍^(guò)濾，收集濾液并以3 000 r/min離心15 min，用膠頭滴管吸取表層溶液，然后將溶液混于10倍體積蒸餾水中，9 000 r/min離心5 min，棄上清，收集沉淀，加適量2.5%重鉻酸鉀溶液，置 4 ℃冰箱備用［6］。

2.2 卵囊孢子化抑制試驗(yàn)

將保存于2.5%重鉻酸鉀的卵囊溶液9 000 r/min離心5 min，棄上清，沉淀加適量蒸餾水洗滌后9 000 r/min離心5 min，收集沉淀，重復(fù)洗滌3次，在最終沉淀中加入蒸餾水，使卵囊數(shù)每毫升約4 000個(gè)。分別吸取200 μL卵囊液加入到1 800 μL上述3種不同濃度消毒劑溶液中，充分混勻，對(duì)照組以蒸餾水代替消毒液，室溫靜置。第5、15、30和60分鐘各吸取500 μL處理后卵囊液于2 mL EP 管中，離心（9 000 r/m，離心 5 min），棄上清，沉淀加2 mL蒸餾水以同樣轉(zhuǎn)速離心洗滌3次，最后在沉淀中加入500 μL 2.5%重鉻酸鉀溶液，置29℃恒溫箱中通氣培養(yǎng)，間斷性震蕩。

2.3 卵囊孢子化率計(jì)算

卵囊培養(yǎng)后第24、48和72小時(shí)分別統(tǒng)計(jì)各組孢子化卵囊數(shù)及總數(shù)，每次計(jì)數(shù)3次，求其平均值，計(jì)算卵囊孢子化率，卵囊孢子化率（%）=孢子化卵囊（/孢子化卵囊+未孢子化卵囊）×100%。

2.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。

3 結(jié)果與分析

3.1 聚維酮碘對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化的影響

由表1可見(jiàn)，培養(yǎng)24 h后，對(duì)照組卵囊孢子化率為68.23%，聚維酮碘不同處理組孢子化率集中在67.68%～68.40%間，與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。培養(yǎng)48 h和72 h后，聚維酮碘各處理組卵囊孢子化率略低于對(duì)照組，但差異均不顯著（P＞0.05）。此外，孢子化培養(yǎng)24、48和72 h后，聚維酮碘各濃度組在不同處理時(shí)間上均無(wú)明顯差異。

表1 不同條件下聚維酮碘對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化率的影響

3.2 二氧化氯對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化率的影響

如表2所示，培養(yǎng)24、48和72 h后，除個(gè)別組外，3種濃度的二氧化氯對(duì)卵囊不同作用時(shí)間后卵囊孢子化率總體上均略低于對(duì)照組，但均未達(dá)到顯著水平（P＞0.05），同時(shí)各組不同作用時(shí)間差異也不明顯（P＞0.05）。不難看出，二氧化氯各試驗(yàn)組卵囊孢子化率與對(duì)照組差異不明顯（P＞0.05），揭示有效氯為25～100 mg/L的二氧化氯溶液對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化基本無(wú)抑制作用。

表2 二氧化氯不同條件下的兔球蟲(chóng)卵囊孢子化率

3.3 三氯異氰尿酸對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化率的影響

由表3可知，培養(yǎng)24 h后，各組孢子化率50.88%～59.71%，均顯著低于對(duì)照組68.23%（P＜0.05）。培養(yǎng)48 h和72 h后，各處理組孢子化率均低于相應(yīng)對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。此外，同一濃度三氯異氰尿酸對(duì)卵囊不同處理時(shí)間比較顯示，僅1 000 mg/L組在培養(yǎng)24 h后不同處理時(shí)間表現(xiàn)出一定差異，尤其以處理60 min組顯著低于處理15 min組（P＜0.05）。綜合分析發(fā)現(xiàn)，三氯異氰尿酸對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化有一定抑制作用，且隨三氯異氰尿酸濃度的升高而增強(qiáng)；而在同一濃度三氯異氰尿酸對(duì)卵囊不同作用時(shí)間下，總體上各處理組間的卵囊孢子化差異不明顯。

表3 三氯異氰尿酸不同條件下的兔球蟲(chóng)卵囊孢子化率

4 討論

在一定溫度下，球蟲(chóng)卵囊迅速孢子化發(fā)育到感染性階段，因此阻止其孢子化是防止動(dòng)物感染球蟲(chóng)的關(guān)鍵措施之一。目前，已發(fā)現(xiàn)一些化學(xué)藥物可體外抑制球蟲(chóng)卵囊孢子化，如有試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，10%氨水可抑制球蟲(chóng)卵囊孢子化［7-8］，但高濃度氨水對(duì)動(dòng)物呼吸道黏膜刺激性強(qiáng)，容易誘發(fā)呼吸道疾?。?-10］，因此難以推廣。此外，碘制劑對(duì)球蟲(chóng)卵囊孢子化也有一定作用。張龍現(xiàn)等［8］報(bào)道，3%碘酊和2%碘酊醋酸液體外作用球蟲(chóng)卵囊30 min，可完全抑制球蟲(chóng)卵囊孢子化。陳漢忠等［11］也報(bào)道，含碘0.05%的復(fù)合消毒液可較好地抑制雞球蟲(chóng)卵囊孢子化。本試驗(yàn)結(jié)果表明，聚維酮碘溶液對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化基本無(wú)抑制作用，可能與聚維酮碘濃度較低有關(guān)，有待于進(jìn)一步探索。

二氧化氯和三氯異氰尿酸具有強(qiáng)烈的氧化作用，對(duì)細(xì)菌、病毒、真菌等效果良好。本試驗(yàn)中二氧化氯溶液（按有效氯計(jì)，25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L）在不同作用時(shí)間下，均未明顯地表現(xiàn)出對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化的抑制作用，這可能與二氧化氯濃度較低有關(guān)。三氯異氰尿酸溶液各處理組的卵囊孢子化率均低于對(duì)照組，尤其是培養(yǎng)24 h抑制作用最強(qiáng)。此外，三氯異氰尿酸溶液隨濃度升高，對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化抑制效果越好。綜合分析，二氧化氯及三氯異氰尿酸溶液的抑制結(jié)果，有效氯低于100 mg/L幾乎無(wú)抑制作用，250 mg/L以上有一定抑制作用，表明高濃度的含氯消毒劑對(duì)兔球蟲(chóng)卵囊孢子化有抑制作用。