丁露,夏云紅,王為民,姚榮杰,孟曼

(合肥市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，安徽 合肥 230000)

人體免疫功能與肺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有著相當(dāng)密切的關(guān)系[1]，當(dāng)人體出現(xiàn)免疫功能下降甚至免疫缺陷時(shí)，腫瘤發(fā)病率會(huì)明顯增高。免疫衰老與T淋巴細(xì)胞表型及功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體逐漸衰老時(shí)，初始型T細(xì)胞比例出現(xiàn)降低，而記憶型T細(xì)胞逐漸增加，其中以CD8+T細(xì)胞的改變較為明顯[2]，而免疫衰老同某些惡性腫瘤發(fā)生相關(guān)，因此對(duì)CD8+T細(xì)胞亞群的檢測(cè)具有十分重要的意義。本研究擬通過(guò)檢測(cè)正常人群及肺癌患者外周血中CD8+CD57+T細(xì)胞水平的變化，評(píng)估其臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料采集2015年4月至2016年5月入住合肥市第二人民醫(yī)院明確診斷為肺癌的初次治療患者30例，其中男性患者21例，女性患者9例，年齡范圍39～79歲，年齡(56.0±14.3)歲;TNM分期(UICC，第7版)Ⅲ期12例，Ⅳ期18例。病理類型腺癌15例，鱗癌8例，小細(xì)胞肺癌7例。所有患者均經(jīng)細(xì)胞學(xué)或病理學(xué)證實(shí)。所有患者均經(jīng)過(guò)全身化療2周期后，以實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST)評(píng)價(jià)療效，按緩解組(完全緩解+部分緩解)和未緩解組(穩(wěn)定+進(jìn)展)進(jìn)行分組，其中緩解組13例，未緩解組17例。健康對(duì)照組取自本院門診體檢健康者，共35例，其中男性19例，女性16例，年齡范圍35～70歲，年齡(55.0±15.7)歲。所有入組患者及健康對(duì)照組人群均排除其他腫瘤、無(wú)風(fēng)濕免疫性疾病，且未使用激素等免疫抑制劑。本研究獲合肥市第二人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者或近親屬均簽署知情同意書。

1.2試劑與儀器采用CD8-PE、CD28-FITC、CD57-FITC單克隆抗體試劑購(gòu)自美國(guó)Beckman-CouLter公司，流式細(xì)胞儀系美國(guó)Beckman-CouLter公司產(chǎn)品。

1.3檢測(cè)方法分別采集肺癌患者周期性化療前后及健康對(duì)照組清晨空腹靜脈血2 mL，加入EDTA抗凝管后搖勻。取抗凝全血100 μL，各加入熒光標(biāo)記單克隆抗體20 uL混勻，設(shè)相應(yīng)同型對(duì)照。避光室溫孵育30 min后，加入1%草酸銨2 mL，充分搖勻，孵育10 min；離心(1 500 r·min-1，10 min)棄去上清，每管加入PBS洗滌液500 μL后離心10 min(1 500轉(zhuǎn))，棄去上清，重復(fù)2次，加入100 μL PBS混勻后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，采用BDFACSDiva軟件分析獲取細(xì)胞，樣品于6 h內(nèi)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1肺癌組患者血清中T細(xì)胞亞群表達(dá)與健康對(duì)照組的比較30例肺癌患者血清中CD8+CD28+T細(xì)胞表達(dá)水平低于健康對(duì)照組人群，而肺癌患者血清中CD8+CD57+T細(xì)胞表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 肺癌患者與健康對(duì)照組外周血T細(xì)胞亞群的表達(dá)水平

2.2經(jīng)治療后不同療效的肺癌患者與健康對(duì)照組T細(xì)胞亞群水平的比較肺癌患者經(jīng)含鉑類藥物為基礎(chǔ)的兩周期化療后，緩解組患者血清中CD8+CD28+及CD8+CD57+T細(xì)胞水平與健康對(duì)照組相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而未緩解組患者血清中CD8+CD28+及CD8+CD57+T細(xì)胞水平與健康對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同療效肺癌患者與健康對(duì)照組外周血T細(xì)胞亞群表達(dá)水平

2.3不同病理學(xué)類型及臨床分期肺癌患者T細(xì)胞亞群比較對(duì)于不同病理類型肺癌患者，其CD8+CD28+及CD8+CD57+T細(xì)胞水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，隨著臨床分期增加，CD8+CD57+T細(xì)胞表達(dá)程度亦差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而CD8+CD28+T細(xì)胞水平隨之逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同病理類型及臨床分期的肺癌患者T細(xì)胞亞群水平的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

腫瘤的發(fā)生、侵襲過(guò)程中，承擔(dān)自身免疫功能的淋巴細(xì)胞發(fā)揮了重要作用，是構(gòu)成機(jī)體細(xì)胞免疫的重要因素之一[3]。反應(yīng)免疫功能的細(xì)胞表型CD抗原是重要標(biāo)志，并且會(huì)隨著疾病的轉(zhuǎn)歸發(fā)生相應(yīng)變化。機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)大多是由CD8+T細(xì)胞主導(dǎo)完成的。而肺癌患者細(xì)胞免疫功能的下降，常導(dǎo)致肺癌病情加重甚至死亡。

CD8+T細(xì)胞即細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)，在宿主抗病毒和抗腫瘤等免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用。CD28分子是T細(xì)胞中最主要的共刺激分子，為T細(xì)胞活化提供第二信號(hào)，通常CD28在CTL表達(dá)水平約為50%，而當(dāng)發(fā)生多種疾病時(shí)，CTL上CD28表達(dá)下降[4]。機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答時(shí)，需CD28與B7相互作用產(chǎn)生第二信號(hào)才可使T細(xì)胞活化，活化的CD4+細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子，由CD8+細(xì)胞毒性免疫細(xì)胞發(fā)揮直接殺傷，以防止形成克隆無(wú)反應(yīng)狀態(tài)。當(dāng)CD28表達(dá)下降時(shí)，可能對(duì)CD4+及CD8+細(xì)胞的活化和增殖有著直接影響，因而造成機(jī)體對(duì)腫瘤免疫力下降，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。有文獻(xiàn)報(bào)道[5-7]CD8+CD28+T細(xì)胞表達(dá)水平在多種腫瘤中下降，張曉倩等[8]指出肺癌患者外周血中CD8+CD28+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組顯著減少，因此CD28表達(dá)水平下降可能系肺癌患者免疫功能降低的重要因素。

CD57(leu-7)是人類NK細(xì)胞的標(biāo)志，當(dāng)其特異性結(jié)合靶細(xì)胞上的配體后，可以激活NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。CD57也部分表達(dá)于T淋巴細(xì)胞，通常為CTL的表面，其與CTL的效應(yīng)功能有關(guān)[9]。CD57是一種糖蛋白，其分子量為110kD，CD57+T細(xì)胞主要存在于骨髓，其在外周血中數(shù)量很少，為5%～10%。在骨髓和其他器官移植術(shù)后、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及AIDS患者，CD57+T細(xì)胞水平均增高[10]，提示該細(xì)胞在導(dǎo)致免疫異常的疾病中發(fā)揮一定作用。也有文獻(xiàn)報(bào)道老年人CD8+CD57+T細(xì)胞明顯高于青年人[11]，表明其在免疫衰老中有著一定意義，而腫瘤常發(fā)生于老年患者，因而腫瘤患者中可能出現(xiàn)CD8+CD57+T細(xì)胞表達(dá)水平的相應(yīng)升高。有相關(guān)報(bào)道顯示，CD57可以產(chǎn)生大量IFN-γ，且產(chǎn)生能力與數(shù)量相關(guān)[12]，而IFN-γ對(duì)腫瘤免疫發(fā)揮著重要作用。IFN-γ能夠直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖，增加表面MHC抗原和腫瘤壞死因子表達(dá)，抗腫瘤血管生成等。由此可見(jiàn)，CD8+T細(xì)胞表面CD57增多可能體現(xiàn)肺癌患者免疫功能下降。

本研究結(jié)果表明：肺癌患者CD8+T細(xì)胞表面CD28表達(dá)水平顯著下降，而CD57較健康對(duì)照組明顯升高，兩組人群相比較CD28及CD57均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通過(guò)兩療程化療后，緩解組病情逐漸好轉(zhuǎn)，與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而未緩解組的患者CD28+T細(xì)胞和CD57+T細(xì)胞較健康對(duì)照組仍差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示經(jīng)化療好轉(zhuǎn)后，肺癌患者的免疫功能得到一定程度恢復(fù)，患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞數(shù)減少。本研究同時(shí)分析了臨床因素與CD28和CD57的相關(guān)性，結(jié)果表明CD8+CD28+T細(xì)胞及CD8+CD57+T細(xì)胞的表達(dá)在肺癌患者不同組織學(xué)類型方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而隨著臨床分期的增加，CD8+CD57+T細(xì)胞表達(dá)率也未發(fā)現(xiàn)明顯變化，究其原因，可能系本研究入組的為Ⅲ期和Ⅳ期中晚期肺癌患者，且多數(shù)為老年患者，臨床分期和年齡選擇不具代表性所致。而CD8+CD28+T細(xì)胞表達(dá)隨著臨床分期增加呈現(xiàn)逐漸升高，提示晚期肺癌患者免疫力降低，進(jìn)一步表明CD28+T細(xì)胞增高水平可能與病情進(jìn)展密切相關(guān)。研究結(jié)果表明該兩組指標(biāo)可能為肺癌免疫功能下降的原因，檢測(cè)其表達(dá)可能評(píng)估肺癌患者療效及預(yù)后。