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        大鼠終體重對尿促性素效價測定的影響

        2018-09-17 08:33:52丁曉爽田恩圣
        食品與藥品 2018年4期
        關鍵詞:效價低劑量區(qū)間

        李 惠,丁曉爽,田恩圣*

        (淄博市食品藥品檢驗研究院,山東 淄博 255086)

        尿促性素(menotropin)為絕經婦女尿中提取的促性腺激素,主要含卵泡刺激性素(folliclestimulating hormone,FSH)與黃體生成素(luteinisting hormone, LH),主要通過補充患者促性腺激素不足以促進卵泡成熟,刺激排卵及加快黃體發(fā)育,臨床用于治療不孕不育癥已有40多年歷史[1-3]。研究認為尿促性素較大劑量使用易導致多胎妊娠和卵巢過度刺激綜合征的發(fā)生,主張盡量降低尿促性素的用量[4-5]。因此尿促性素生物效價的準確測定,對其臨床用藥有重要的指導意義。本實驗室近兩年按《中國藥典》2015年版多次測定注射用尿促性素效價,發(fā)現大鼠解剖時的終體重可能對其效價測定產生影響。已有文獻指出雌性大鼠初始體重對尿促性素中卵泡刺激素效價測定有影響[6]。但未見大鼠終體重對尿促性素效價測定影響的報道。本文對14次尿促性素效價測定數據進行統(tǒng)計分析,探究大鼠終體重對尿促性素效價測定的影響。

        1 儀器、材料與動物

        1.1 儀器

        BT124S型電子天平(賽多利斯);HCB20002型電子天平(慈溪華徐衡器)

        1.2 材料

        尿促性素標準品(中國食品藥品檢定研究院,批號:150524-201504,規(guī)格:FSH 247 IU/支,LH 202 IU/支);注射用尿促性素(煙臺東誠北方制藥);牛血清白蛋白(MP Biomedicals,LLC,批號:9651J,CAT號:103703);氯化鈉注射液(辰欣藥業(yè))。

        1.3 動物

        SD大鼠,SPF級,由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供,許可證號:SCXK(魯)20140007。本單位實驗動物使用許可證號SYXK(魯)20130004。

        2 方法

        本實驗嚴格按照《中國藥典》2015年版四部通則1216 FSH生物測定法和1217 LH生物測定法進行[7]。

        2.1 動物分組

        大鼠初始體重按要求,應在36~60 g,且相差不得超過15 g。本實驗中,為統(tǒng)計的合理性,減小初始體重對終體重的影響,選擇初始體重均為37~47 g,相差不超過10 g大鼠的實驗數據。

        2.2 溶液的配制

        FSH溶液按規(guī)定,配制為高劑量組(4 IU/ml),中劑量組(2 IU/ml),低劑量組(1 IU/ml),相鄰兩濃度之比值均為0.5的溶液。LH溶液按規(guī)定,配制為高劑量組(10 IU/ml),中劑量組(6 IU/ml),低劑量組(3.6 IU/ml),相鄰兩濃度之比值均為0.6的溶液。本實驗室溶液劑量均使低劑量組卵巢/精囊明顯增重,高劑量組卵巢/精囊增重不致達極限。

        2.3 效價測定

        按規(guī)定方法皮下注射后,將動物處死,稱重,解剖,摘出卵巢/精囊,稱重。以每10 g動物體重的卵巢/精囊毫克數作為反應值,用bs2000生物系統(tǒng)軟件中量反應平行線3.3法計算生物效價。實驗可靠性測驗均通過[F檢驗:回歸項顯著(P<0.01),偏離平行、二次曲線和反向二次曲線不顯著(P>0.05)],FSH可信限率(FL%)小于45 %,LH可信限率(FL%)小于35 %。

        2.4 數據處理

        注射用尿促性素為樣品組,尿促性素標準品為對照組。為進行數據比較,按以下公式計算相對反應值。

        式中反應值為每10 g動物體重的卵巢毫克數/精囊毫克數,對照組的反應值系數為1,樣品組的反應值系數為其測得的相應效價。統(tǒng)計14次注射用尿促性素效價測定實驗中所有相對反應值,其中大鼠終體重每5 g為一區(qū)間,低、中、高3個濃度分別統(tǒng)計,將各體重區(qū)間樣品組的相對反應值與對照組相對反應值兩兩進行t檢驗。若P<0.05,則表明該體重區(qū)間的樣品組的相對反應值與對照組的相對反應值差異有統(tǒng)計學意義,該體重區(qū)間的大鼠終體重對其生物效價測定有影響。

        3 結果

        3.1 雌性大鼠終體重對FSH效價測定的影響

        結果見表1。由表1可見,雌性大鼠各體重區(qū)間樣品組的相對反應值與對照品的相對反應值兩兩進行t檢驗,差異有統(tǒng)計學意義的組數為8組,占對照品總組數的38.10 %,差異有統(tǒng)計學意義的數量為477只,占對照組總數量的41.41 %,而一般生物測定誤差為20 %左右[8],表明雌性大鼠終體重對FSH的相對反應值有影響。進一步綜合分析低、中、高3個劑量,當雌性大鼠終體重為50~55 g和70~75 g時差異均無統(tǒng)計學意義,但70~75 g體重區(qū)間的標準差(s)小于50~55 g,個體間變異更小。綜上,70~75 g為雌性大鼠卵泡刺激素效價測定的最佳終體重。

        表1 FSH效價測定的相對反應值統(tǒng)計表(±s)

        表1 FSH效價測定的相對反應值統(tǒng)計表(±s)

        注:各體重區(qū)間的樣品組的相對反應值與對照品的相對反應值兩兩進行t檢驗, *P<0.05。

        低劑量(1單位/ml) 中劑量(2單位/ml) 高劑量(4單位/ml)樣品組 對照組 樣品組 對照組 樣品組 對照組n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值<50 7 12.065±2.367 3 10.876±1.702 9 6.796±1.804 3 7.779±1.411 8 6.441±0.917* 3 4.664±0.519 50~55 50 13.702±3.038 9 12.340±1.966 43 8.652±2.877 8 7.087±1.222 45 5.847±1.046 6 5.217±0.899 55~60 98 13.193±2.673 34 12.722±2.249 104 8.923±2.605 27 8.808±1.713 110 6.318±1.235* 34 5.860±0.853 60~65 130 14.516±2.741 36 13.461±3.511 123 9.510±1.946 45 8.894±1.612 129 6.178±1.176* 42 5.671±1.099 65~70 71 14.041±2.595*21 12.562±1.991 76 9.099±2.004*19 8.046±1.092 66 6.282±1.067* 17 5.678±1.163 70~75 21 12.606±2.474 7 11.238±1.155 19 8.113±1.938 6 7.359±0.684 16 5.629±1.132 7 4.621±1.059>75 7 12.519±1.829*2 8.880±0.227 10 8.017±1.481* 4 5.980±0.889 10 4.041±0.476* 3 3.242±0.296總體重區(qū)間 384 13.799±2.767 112 12.688±2.683 384 9.192±1.906 112 8.384±1.627 384 6.124±1.989 112 5.547±1.106大鼠終體重區(qū)間/g

        3.2 雄性大鼠終體重對LH效價測定的影響

        結果見表2。由表2可見,雄性大鼠各體重區(qū)間樣品組的相對反應值與對照品的相對反應值兩兩進行t檢驗,差異有統(tǒng)計學意義的組數為6組,占對照品總組數的28.57 %,差異有統(tǒng)計學意義的數量為410只,占對照組總數量的47.45 %,而一般生物測定誤差為20 %左右[8],表明雄性大鼠終體重對LH的相對反應值有影響(中劑量組對照組55 g以下動物僅1只,未進行統(tǒng)計)。進一步綜合分析低、中、高3個劑量,當雄性大鼠終體重為55~60 g和75~80 g時差異無統(tǒng)計學意義,但75~80 g體重區(qū)間的標準差(s)均小于55~60 g,個體間變異更小。綜上,75~80 g為雄性大鼠LH效價測定的最佳終體重。

        表2 LH效價測定的相對反應值統(tǒng)計表(±s)

        表2 LH效價測定的相對反應值統(tǒng)計表(±s)

        注:各體重區(qū)間的樣品組的相對反應值與對照品的相對反應值兩兩進行t檢驗, *P<0.05,**P<0.01

        低劑量(3.6單位/ml) 中劑量(6單位/ml) 高劑量(10單位/ml)樣品組 對照組 樣品組 對照組 樣品組 對照組n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值 n 相對反應值<55 4 1.061±0.147 2 0.951±0.049 3 0.876±0.071 1 0.731 3 0.571±0.015 2 0.590±0.011 55~60 31 0.961±0.150 12 0.881±0.130 25 0.741±0.135 8 0.664±0.113 16 0.575±0.061 6 0.518±0.087 60~65 65 0.952±0.170* 21 0.849±0.146 50 0.706±0.126 13 0.661±0.093 49 0.545±0.071** 19 0.477±0.074 65~70 84 0.882±0.148* 21 0.795±0.105 90 0.706±0.111 31 0.676±0.108 97 0.535±0.066** 25 0.490±0.072 70~75 57 0.935±0.159** 15 0.812±0.131 58 0.678±0.118 17 0.659±0.113 58 0.515±0.078* 16 0.466±0.085 75~80 33 0.910±0.130 9 0.838±0.140 42 0.669±0.081 11 0.622±0.042 44 0.502±0.054 13 0.471±0.045>80 14 0.902±0.150 4 0.760±0.051 20 0.672±0.136 3 0.556±0.073 21 0.488±0.057 3 0.489±0.056總體重區(qū)間 288 0.923±0.156 84 0.831±0.128 288 0.697±0.118 84 0.654±0.106 288 0.527±0.070 84 0.484±0.073大鼠終體重區(qū)間/g

        4 結論

        大鼠終體重對尿促性素效價測定有影響,雌性大鼠終體重70~75 g,雄性大鼠終體重75~80 g,為其效價測定最佳終體重,對尿促性素效價測定有指導意義。

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