陳璐　張鑫淼　李更曉

[摘要] 目的 構(gòu)建大鼠糖尿病腎病模型，對比氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1與ACEI類藥物對模型大鼠的藥效學(xué)差異。方法 大鼠靜脈注射鏈脲佐菌素聯(lián)合食物誘導(dǎo)糖尿病腎病大鼠模型，按其給藥方式分為空白組、模型對照組、卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組、氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組，造模成功后連續(xù)用藥4周，觀察其血糖（Glu）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、血胰島素（FINS）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血膽固醇（CH）、血甘油三酯（TG）、尿量（Vol）、尿肌酐（Cr）、尿蛋白（Pro）、腎指數(shù)（RI）、腎小球直徑和面積。 結(jié)果 與空白組相比，模型對照組Glu、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、FINS、RI明顯上升（P<0.01），Cr明顯降低（P<0.01）。各給藥組較模型對照組Glu、FINS、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、RI降低，Cr升高，腎小球直徑、面積、腎指數(shù)明顯改善（P<0.05）。 結(jié)論 氯沙坦與前列腺E1聯(lián)合應(yīng)用較單獨(dú)使用ACEI類藥物藥效更突出，對糖尿病腎病的臨床治療有重要的指導(dǎo)作用。

[關(guān)鍵詞] 糖尿病腎?。宦?lián)合用藥；氯沙坦；前列腺素E1

[中圖分類號(hào)] R587.2；R692 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）12-0035-04

Comparison of pharmacodynamic differences between losartan combined with prostaglandin E1 and ACEI drugs in diabetic nephropathy rats

CHEN Lu ZHANG Xinmiao LI Gengxiao YU Hang WANG Kuo TONG Lei

Mudanjiang Medical College， Mudanjiang 157011， China

[Abstract] Objective To establish a rat model of diabetic nephropathy and compare the pharmacodynamic differences between ACEIs and losartan combined with prostaglandin E1 in model rats. Methods Rats with diabetic nephropathy were induced by intravenous injection of streptozotocin combined with food and were divided into blank group， model group， captopril group， losartan group， prostaglandin E1 group and combination group according to their administration methods. After the model was successfully administered for 4 weeks， blood glucose（Glu）， HbA1c， FINS， BUN， Scr， blood cholesterol， blood triglyceride（TG）， urine volume（Vol）， urine creatinine（Cr）， urine protein（Pro）， kidney index（RI）， glomerular diameter and area were observed. Results Compared with those of the blank group， the Glu， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro， FINS and RI in the model group increased significantly（P<0.01）， and Cr decreased significantly（P<0.01）. Compared with those of the model group， the Glu， FINS， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro and RI decreased， and Cr increased in the administration groups， and glomerular diameter， area， and kidney index in the administration groups improved significantly（P<0.05）. Conclusion The combination of losartan and prostate E1 is more effective than ACEI alone， and the former play an important guidance role in the clinical treatment of diabetic nephropathy.

[Key words] Diabetic nephropathy； Combination medication； Losartan； Prostaglandin E1

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病導(dǎo)致微血管病變的典型表現(xiàn)之一，不良飲食習(xí)慣、控制血糖不良、血壓血脂異常升高等因素會(huì)加劇腎臟損害，直至腎衰竭[1]。在現(xiàn)階段臨床上主要應(yīng)用ACEI類藥物治療該疾病，在1981年卡托普利的應(yīng)用得到批準(zhǔn)后，藥物發(fā)展迅速，在治療DN上取得顯著的療效[2]。本實(shí)驗(yàn)選取典型代表藥卡托普利進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，該藥物可以改善微血管血流，擴(kuò)張腎血管，達(dá)到治療目的，已被廣泛應(yīng)用，但臨床證實(shí)該類藥物具有刺激性干咳的副作用，多數(shù)患者都無法承受。氯沙坦為AT1受體拮抗劑的代表藥，與ACEI比較具有作用專一的特點(diǎn)。PGE1是人體內(nèi)存在的一種生物活性物質(zhì)，具備能夠分布在受損血管的特性，改變其血液流變學(xué)，可以擴(kuò)張血管，并且對血小板的聚集起到抑制。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，觀察聯(lián)合用藥與單獨(dú)用藥的藥效差異，并揭示其對糖尿病腎病腎臟功能的改善作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑

健康SD大鼠72只，雌雄各半，體型勻稱，雄性大鼠體重約（350±50）g，雌性大鼠體重約（230±40）g，約10周齡，購于長沙市天勤生物技術(shù)有限公司。飼養(yǎng)條件：由牡丹江醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心飼養(yǎng)，許可證編號(hào)為scxk（湘）2014-0010，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)本單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求。實(shí)驗(yàn)顆粒鼠飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司提供，蘇飼證（2014）01008。高脂高糖飼料[3]選自北京博泰宏達(dá)生物技術(shù)有限公司；尿蛋白定量試劑盒由上海晶抗生物工程有限公司提供，批號(hào)JKSJ-1820；肌酐試劑盒由北京博邁斯科技有限公司提供，批號(hào)K625-100；葡萄糖液體試劑盒由北京普利萊基因技術(shù)有限公司提供，批號(hào)E1010；膽固醇試劑盒由上海市協(xié)和梅迪克斯醫(yī)療器械有限公司提供，批號(hào)58236；胰島素試劑盒由上海晨易生物科技有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

卡托普利片（卡托普利）由浙江南洋藥業(yè)有限公司提供；科素亞（氯沙坦）由美國默沙東制藥廠提供；前列地爾（前列腺素）由杭州志聚生物技術(shù)有限公司提供，鏈脲佐菌素（STZ）Sigma S-1290。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

全自動(dòng)生化儀采用廣州東唐電子科技有限公司DOTOP型；紫外分光光度計(jì)采用上海元析有限公司UV759S型；離心機(jī)采用北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司DT5-2型。

1.4 動(dòng)物分組及病理模型的建立

健康SD大鼠72只隨機(jī)分為6組，每組12只，分別為空白組、模型對照組、卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組、氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組?？瞻捉M采用正常顆粒飼料，動(dòng)物飲用純凈水喂養(yǎng)，模型對照組以高脂高糖飼料配12%果糖水飼喂6周后，經(jīng)尾靜脈以60 mg/kg劑量注射STZ一次[4-7]，其他各給藥組采取相同方法誘導(dǎo)。通過檢測大鼠血糖變化、腎功能變化與腎組織病理學(xué)改變驗(yàn)證糖尿病腎病模型是否構(gòu)建成功，未成功者退出模型組。

1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥及指標(biāo)檢測

空白組注射10 mL/kg的0.9%的NaCl qd，卡托普利組給予10 mg/（kg·d）的卡托普利 qd，氯沙坦組給予80 mg/（kg·d）qd，前列腺素E1組給予20 μg的前列地爾 qd，氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組給予氯沙坦80 mg/（kg·d）加前列地爾20 μg qd，上午9時(shí)給藥，連續(xù)靜脈注射4周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，收集24 h尿液進(jìn)行稱量，用離心機(jī)2200 r/min，離心10 min，去沉淀，在-20℃保存待測，之后稱大鼠體重量。使用戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，取腹主動(dòng)脈血[8]，離心取血清檢測特征性生化指標(biāo)。取左側(cè)腎臟測其質(zhì)量，隨后剝離被膜，用17%的福爾馬林液固定，常規(guī)制片后使用光鏡測量腎小球的直徑和面積并計(jì)算腎臟指數(shù)RI（RI=左腎質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量×100）。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所得數(shù)據(jù)均錄入SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間比較采用LSD法，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠Glu、HbA1c、FINS影響

六組血糖之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=4.380，P<0.01），六組糖化血紅蛋白之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=12.195，P<0.01），六組血胰島素之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.682，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組Glu、HbA1c、FINS值與空白組相比明顯升高（P<0.01），氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組與模型對照組Glu、HbA1c、FINS值相比明顯降低（P<0.05或P<0.01），卡托普利組、氯沙坦組、前列腺素E1組Glu、HbA1c、FINS與模型對照組相比亦均有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），但對于Glu、HbA1c、FINS的降低氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組與卡托普利組比較更為明顯，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎功能的影響

六組之間血清尿素氮比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.696，P<0.01），六組血清肌酐之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.585，P<0.01），六組血清膽固醇之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=14.850，P<0.01），六組甘油三酯之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.516，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組BUN、Scr、CH、TG與空白組相比明顯升高（P<0.01），表明大鼠腎功能受損，各給藥組血清中BUN含量相對于模型對照組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），各給藥組血清中Scr、TG含量相對于模型對照組降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），而氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于Scr、CH的降低亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），除氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組外其他各給藥組血清中CH含量相對于模型對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示通過聯(lián)合給藥相對于單獨(dú)應(yīng)用卡托普利對于降低血清中CH及Scr含量有明顯效果。見表2。

2.3 氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎臟濾過功能的影響

六組尿量之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.826，P<0.01），六組尿肌酐之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.428，P<0.01），六組尿蛋白之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.461，P<0.01）。

糖尿病腎病模型對照組與空白組相比尿量（Vol）、尿蛋白（Pro）水平增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），尿肌酐（Cr）水平降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明腎濾過功能受損，肌酐清除功能下降。各給藥組與模型對照組相比尿量的減少及尿肌酐含量的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），各給藥組尿蛋白含量相對于模型對照組降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）；其中氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于尿肌酐含量的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組相對于卡托普利組對于尿蛋白含量的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示通過聯(lián)合用藥對于DN大鼠腎濾過功能指標(biāo)的改善較單獨(dú)應(yīng)用卡托普利效果顯著，見表3。

2.4 氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1對糖尿病腎病大鼠腎臟組織形態(tài)的影響

六組腎指數(shù)之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.593，P<0.05），六組腎小球面積之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=13.192，P<0.05），六組腎小球直徑之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.439，P<0.05）。

糖尿病腎病模型對照組與空白組相比，腎小球直徑、腎小球面積及腎指數(shù)均有增大（P<0.01），可見腎臟出現(xiàn)改變，多數(shù)腎小球直徑顯著增大，并伴有基底膜增厚、系膜細(xì)胞增生等表現(xiàn)，各給藥組與模型對照組相比，腎臟病變及指標(biāo)均有一定改善，而氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1組較卡托普利組對腎臟形態(tài)各項(xiàng)指標(biāo)改善作用較為顯著（P<0.05）。見表4。

3 討論

在本研究中，大鼠在實(shí)驗(yàn)前均經(jīng)嚴(yán)格挑選，為健康大鼠，避免血壓血脂等干擾因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。經(jīng)造模后，對實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行測定，結(jié)果顯示尿素氮和血肌酐升高，尿蛋白濾過率明顯升高，說明大鼠糖尿病腎病模型的構(gòu)建是成功的，該模型可用于比較ACEI類藥物與氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1的藥效差異[9-13]。

對于糖尿病腎病的患者使用ACEI藥物是國內(nèi)外都比較常用的方法之一，但經(jīng)臨床用藥的實(shí)踐證明，ACEI存在起效慢、血管神經(jīng)水腫、刺激性干咳、高血鉀等一系列不可避免的副作用[14]。

氯沙坦對腎臟疾病具有很好的治療效果，對血壓有很好的降低作用，對蛋白尿的降低也具有顯著的改善作用，前列地爾可以阻止血管收縮，改善并增加其病變的腎血液流量，進(jìn)而改善腎小球的微環(huán)境，改善腎小球的濾過率，降低尿中排泄的蛋白含量[15，16]。

在本實(shí)驗(yàn)中，通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析和總結(jié)發(fā)現(xiàn)，氯沙坦與前列腺素E1二者聯(lián)合應(yīng)用對DN大鼠Glu、Scr、CH、Cr、Pro等多個(gè)指標(biāo)改善作用優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用卡托普利，此實(shí)驗(yàn)結(jié)果為氯沙坦聯(lián)合前列腺素E1對于糖尿病腎病的臨床治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（收稿日期：2017-12-19）