劉立山 郎俠 王彩蓮 周瑞 宋淑珍 宮旭胤 王斐 吳建平

摘要：聯(lián)合使用PGF2α和GnRH對(duì)荷斯坦奶牛進(jìn)行不同的同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理，結(jié)果表明：4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后，奶牛子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分分別較試驗(yàn)前提高了0.55分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05），2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后，奶牛子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分分別較試驗(yàn)前分別提高了0.30分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05）。4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理和2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后的奶牛同期發(fā)情率分別為80%、90%，第1個(gè)情期受胎率分別為65%、70%，比對(duì)照自然發(fā)情牛分別高25、30百分點(diǎn)。說(shuō)明利用外源激素PGF2α和GnRH處理能促進(jìn)奶牛卵巢和子宮復(fù)舊，達(dá)到同期發(fā)情的效果，并提高奶牛受胎率。

關(guān)鍵詞：奶牛;激素;PGF2α;GnRH;同期發(fā)情;定時(shí)輸精;受胎率

中圖分類號(hào)：S663? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ?文章編號(hào)：1001-1463（2018）12-0076-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.12.023

近年來(lái)，中國(guó)的畜牧業(yè)比重不斷增加，乳品行業(yè)已發(fā)展迅速，總產(chǎn)奶量也不斷提高。但在快速發(fā)展的過(guò)程中，奶牛養(yǎng)殖業(yè)也出現(xiàn)了很多問(wèn)題，比如產(chǎn)后奶牛疾病過(guò)多，影響奶牛生殖機(jī)能的恢復(fù)，受胎率低、產(chǎn)犢間隔過(guò)長(zhǎng)等，都影響和制約著我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)代化的發(fā)展[1 - 2 ]。奶牛產(chǎn)后的子宮機(jī)能恢復(fù)程度與早期卵巢機(jī)能的恢復(fù)及活動(dòng)密切相關(guān)。在卵巢活動(dòng)周期正常的前提下，子宮機(jī)能的恢復(fù)程度決定了受胎率[3 - 5 ]。對(duì)產(chǎn)后奶牛的保健治療，加強(qiáng)機(jī)體免疫力，是加快子宮機(jī)能復(fù)舊的重要措施。目前，對(duì)奶牛產(chǎn)后疾病的治療基本是采用化學(xué)和激素類藥物，通過(guò)對(duì)產(chǎn)后奶牛早期的激素分泌進(jìn)行調(diào)控，促進(jìn)奶牛產(chǎn)后子宮復(fù)舊，達(dá)到同期發(fā)情的效果，提高奶牛繁殖率[6 - 8 ]。因此同期發(fā)情定時(shí)輸精技術(shù)在養(yǎng)殖場(chǎng)的應(yīng)用對(duì)家畜繁殖率的提高具有重要意義[9 ]。同期發(fā)情可以實(shí)現(xiàn)難孕母牛以及繁殖有障礙的母牛集中發(fā)情和配種，達(dá)到正常受孕和產(chǎn)犢。定時(shí)輸精可以使牛的發(fā)情時(shí)間集中，防止隱性發(fā)情造成的漏配現(xiàn)象，有利于集中輸精，降低了勞動(dòng)強(qiáng)度，不需要觀察發(fā)情就能定時(shí)進(jìn)行人工授精[10 ]。因此，同期發(fā)情定時(shí)輸精技術(shù)是提高養(yǎng)殖場(chǎng)母牛繁殖效率以及經(jīng)濟(jì)效益的重要保證。

我們使用不同的同期發(fā)情定時(shí)輸精程序，對(duì)荷斯坦奶牛進(jìn)行同期發(fā)情處理，以探討聯(lián)合使用PGF2α和GnRH的定時(shí)輸精效果，完善同期發(fā)情定時(shí)輸精技術(shù)，為奶牛的同期發(fā)情定時(shí)輸精技術(shù)提供參考。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

指示奶牛為荷斯坦奶牛，由甘肅省臨洮縣華加牧業(yè)科技有限責(zé)任公司提供。

試劑①PGF2α，為PGF2α類似物氯前列醇鈉注射液（Cloprostenol Sodium Injection，蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司，規(guī)格為0.2 mg×10支）。②GnRH為人工合成促性腺素釋放激素（Gonadotropin-releasing hormone，蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司，規(guī)格為20 μg×10支，凍干粉針）。

試驗(yàn)儀器包括：CS101-A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）、BCD-539WF海爾電冰箱（青島海爾股份有限公司）、5mL注射器（宣城市江南醫(yī)療器械有限公司）、愛(ài)德士測(cè)孕試劑盒（美國(guó)愛(ài)德士生物科技有限公司）。

1.2? ?試驗(yàn)方法

試驗(yàn)于2015年9月在甘肅省臨洮縣華加牧業(yè)科技有限責(zé)任公司養(yǎng)殖基地進(jìn)行。試驗(yàn)共設(shè)3個(gè)處理，分別為處理A，“4+2法”（4次PGF2α、2次GnRH法）同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理;處理B，“2+4法”（2次PGF2α、4次GnRH法）同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理;處理C，自然發(fā)情，不進(jìn)行同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理（CK）。處理A和處理B各選取產(chǎn)后90 d以上不發(fā)情、以及2次配種仍然不孕且體況評(píng)分在2.5～4.0分的有繁殖障礙的荷斯坦經(jīng)產(chǎn)奶牛20頭，處理C選取自然發(fā)情的奶牛20頭。

試驗(yàn)采用2種不同的同期發(fā)情定時(shí)輸精程序，即試驗(yàn)組Ⅰ程序（4次PGF2α、2次GnRH法，簡(jiǎn)稱“4+2法”）和試驗(yàn)組Ⅱ程序（2次PGF2α、4次GnRH法，簡(jiǎn)稱“2+4法”）。

處理A 同期發(fā)情定時(shí)輸精程序：試驗(yàn)開始的當(dāng)天記為0 d，并且在當(dāng)天10：00時(shí)注射1次PGF2α，14 d后的10：00時(shí)注射1次PGF2α，25 d后的10：00時(shí)注射1次GnRH，30 d后的10：00時(shí)注射1次PGF2α，31 d后的10：00時(shí)注射1次PGF2α，33 d后的10：00時(shí)注射GnRH同時(shí)進(jìn)行人工授精。 處理B同期發(fā)情定時(shí)輸精程序：試驗(yàn)開始的當(dāng)天10：00時(shí)注射1次GnRH，7 d后的? ? ?10：00時(shí)注射1次PGF，10 d后的10：00時(shí)注射1次GnRH，17 d后的10：00時(shí)注射1次GnRH，24 d后的10：00時(shí)注射1次PGF，26 d后的午16：00時(shí)注射GnRH，27 d后的10：00時(shí)進(jìn)行人工授精。

試驗(yàn)每次注射激素均為10：00時(shí)和16：00時(shí)，PGF2α每次注射劑量為0.6 mg，GnRH每次注射劑量為60 μg。嚴(yán)格按照牛場(chǎng)的飼養(yǎng)管理進(jìn)行試驗(yàn)。對(duì)實(shí)施不同的同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理的奶牛進(jìn)行子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分，統(tǒng)計(jì)比較不同處理的同期發(fā)情率、受胎率。

1.3? ?測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1? ? 發(fā)情統(tǒng)計(jì)? ? 試驗(yàn)期間對(duì)不同試驗(yàn)的奶牛進(jìn)行發(fā)情觀察，及時(shí)記錄發(fā)情時(shí)間及次數(shù)，計(jì)算同期發(fā)情率。

1.3.2? ? 評(píng)分記錄? ? 以試驗(yàn)當(dāng)天記為0 d，并在試驗(yàn)前進(jìn)行1次子宮粘液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分，試驗(yàn)期間每隔7 d進(jìn)行子宮粘液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分，并記錄統(tǒng)計(jì)。子宮粘液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分均參照宮艷斌[11 ]的方法。

1.3.3? ? 受胎率? ? 定時(shí)對(duì)配種后的母牛進(jìn)行仔細(xì)的返情觀察，對(duì)未返情的母牛使用愛(ài)德士測(cè)孕試劑盒嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)明的步驟進(jìn)行檢測(cè)，確定受孕母牛數(shù)，計(jì)算受胎率（配種后受孕母牛數(shù)和參配母牛數(shù)的比值）。

1.4? ?數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2010統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，通過(guò)SPSS 19.0 軟件中的單因素方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值與標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?不同處理的發(fā)情率

由表1可以看出，2組試驗(yàn)?zāi)膛０l(fā)情均主要集中在第5次注射激素后，說(shuō)明第5次注射激素后奶牛均會(huì)出現(xiàn)發(fā)情高峰期。處理A的奶牛5次肌肉注射激素后發(fā)情率分別為 25%、35%、5%、15%、80%，處理B的奶牛5次肌肉注射激素后發(fā)情率分別為 0%、30%、15%、5%、90%，兩處理的奶牛均以第5次肌肉注射激素后發(fā)情率最高，分別為80%和90%。

2.2? ?不同處理下子宮粘液和直腸檢測(cè)

由表2可以看出，處理A試驗(yàn)后比試驗(yàn)前子宮黏液評(píng)分高0.55（P < 0.05），直腸檢測(cè)評(píng)分高0.45（P < 0.05），處理B試驗(yàn)后比試驗(yàn)前子宮黏液評(píng)分高0.30（P? < 0.05），直腸檢測(cè)評(píng)分高0.45（P? < 0.05）。從子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分可以看出，兩處理的奶牛卵巢和子宮生理功能均有顯著改善。

2.3? ?受胎率統(tǒng)計(jì)

由表3可以看出，處理A、處理B和對(duì)照的第1個(gè)情期受胎率分別為65%、70%、40%，第2個(gè)情期受胎率分別為57%、66%、42%，總受胎率分別為85%、90%、65%，處理A、處理B第1個(gè)情期受胎率分別比對(duì)照高25、30百分點(diǎn)，總受胎率分別比對(duì)照高20、35百分點(diǎn)，可以看出經(jīng)同期發(fā)情定時(shí)輸精方案處理的奶牛受胎率要遠(yuǎn)高于自然發(fā)情奶牛的受胎率。

3? ?小結(jié)與討論

同期發(fā)情主要是通過(guò)調(diào)節(jié)生殖激素的水平，調(diào)控卵泡的發(fā)育和排卵。定時(shí)輸精技術(shù)是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較為廣泛的一種同期發(fā)情技術(shù)，主要使用GnRH與PGH2α 2種激素， 通過(guò)調(diào)控卵巢的發(fā)育，使處于不同發(fā)育階段的卵泡達(dá)到同時(shí)排卵的作用。這種技術(shù)不需要觀察發(fā)情，即可直接進(jìn)行人工授精，其受胎率一般在50% ～60%[12 ]。PGF2α的合成類似物氯前列醇鈉等，對(duì)母畜繁殖疾病具有治療的作用[13 ]，是同期發(fā)情廣泛使用的一種激素，尤其對(duì)黃體囊腫、持久黃體、子宮內(nèi)膜炎等的治療有較好的效果。本試驗(yàn)也充分說(shuō)明了這一點(diǎn)：4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理、2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理的子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分均顯著提高（P < 0.05）。子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分是對(duì)母畜繁殖機(jī)能以及子宮健康與否的最直觀的評(píng)判依據(jù)，評(píng)分顯著提高也說(shuō)明了同期發(fā)情定時(shí)輸精對(duì)不發(fā)情以及多次配種不孕的具有繁殖障礙的母畜有一定的治療效果。

本試驗(yàn)顯示，2個(gè)同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理的受胎率均比對(duì)照自然發(fā)情牛的受胎率高，且2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理的第1個(gè)情期受胎率最高到達(dá)70%，4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理的第1個(gè)情期受胎率為65%，同時(shí)兩組試驗(yàn)的奶牛同期發(fā)情率也達(dá)到80%以上，激素處理后明顯提高了同期發(fā)情率和受胎率，這些結(jié)果與李啟業(yè)等[14 ]、姚國(guó)良[15 ]、劉念銳等[16 ]研究結(jié)果一致?！?+4法”（2次PGF2α、4次GnRH法）同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理第5次肌肉注射激素后奶牛的發(fā)情率高達(dá)90%。PGF2α處理主要作用是將卵巢中的功能性黃體退化，由于牛的個(gè)體差別，有些牛發(fā)情后5～6 d肌肉注射PGF2α就會(huì)對(duì)溶解黃體起作用，但大多數(shù)牛需要在發(fā)情后7～8 d才會(huì)有相同的效果，因此在母畜發(fā)情晚期處理時(shí)，卵巢中黃體就會(huì)被溶解[17 - 18 ]。母牛在注射激素（GnRH）時(shí)容易啟動(dòng)生殖周期的開始，如果母畜正處于黃體期或卵泡期，再利用激素調(diào)整到生殖周期的開始狀態(tài)，要比處于卵巢靜止的母牛要困難。余長(zhǎng)林等[19 ]研究發(fā)現(xiàn)，利用OVS（GnRH+PG+GnRH） 同期發(fā)情程序的荷斯坦奶牛比自然發(fā)情的奶牛繁殖效率著提高了18.86%，且21 d 妊娠率也顯著提高。曹曉云等[20 ]對(duì)黃牛采用OVS程序進(jìn)行同期發(fā)情試驗(yàn)，得到了80%以上的受胎率，通過(guò)同期發(fā)情處理后任然不孕，推測(cè)可能是母畜生殖機(jī)能未具備完好的生殖條件所致[21 ]。因此，對(duì)于不發(fā)情、多次配種不孕以及生殖有障礙的奶牛，需要用藥物適量多次調(diào)控奶牛的生殖周期，以便啟動(dòng)生殖周期的開始，使奶牛達(dá)到同期發(fā)情的目的。

本試驗(yàn)2種同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理使用的PGF2α和GnRH均可以促進(jìn)子宮復(fù)舊，恢復(fù)其正常功能。4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后奶牛的子宮黏液評(píng)分和直腸檢測(cè)評(píng)分分別較試驗(yàn)前提高了0.55分（P < 0.05）和0.45分（P < 0.05），2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后的奶牛分別較試驗(yàn)前提高了0.30分和0.45分（P < 0.05）;4次PGF2α、2次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理和2次PGF2α、4次GnRH法同期發(fā)情定時(shí)輸精程序處理后奶牛的同期發(fā)情率分別為80%、90%，總受胎率分別比對(duì)照自然發(fā)情牛提高了20、25百分點(diǎn)。以上數(shù)據(jù)均表明，聯(lián)合使用PGF2α和GnRH，通過(guò)2種同期發(fā)情定時(shí)輸精程序均能有效的調(diào)節(jié)卵巢的功能與活性，尤其對(duì)于不發(fā)情、多次配種不孕以及生殖有障礙的奶牛，有效地控制了奶牛的繁殖障礙以及子宮炎癥，且大大提高了奶牛受胎率。

參考文獻(xiàn)：

[1] FOOTE R H.? The history of artificial insemination： Selected notes and notables[J].? J. Anim. Sci.，2002，80（1）：1-10.

[2] PETER A T，VOS P，AMBROSE D J. Postpartum anestrus in dairycattle[J].? Theriogenology，2009，71（9）：1333-1342.

[3] 楊曉玲，鐔? ?穎.? 促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑體外受精及胚胎移植促排卵中的應(yīng)用[J].? 中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志，2009，5（6）：31-32.

[4] 章孝榮，王建辰.? 山羊GnRH 和促性腺激素的釋放特點(diǎn)[J].? 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1997，17 （2）：177-179.

[5] JONAS H A，BUGER H G，CUMMINY I A，et al. Radioimmunoassay for luteinizing hormone releasinghormone：its application to the measurement of LHRH in ovine and human plasma[J].? Endocriolony，1975，96：384-391.

[6] 丁建江，劉賢俠，高? ?樹， 等.? 綜合方案治療奶牛屢配不孕的受胎效果比較[J].? 中國(guó)奶牛， 2012（15）：54-56.

[7] WILLIAMSON P，MUNYUA S，MARTIN R，et al. Dynamics of the acute uterine response to infection， endotoxin infusion and physical manipulation of the reproductive tract in the mare[J].? Journal of reproduction and fertility. Supplement，1986，35：317-325.

[8] GUILBAULT L A，THATCHER W W，DROST M，et al.? Source of F series prostaglandins duringthe early postpartum period in cattle [J].? Biol. Reprod. 1984. 31：879-887.

[9] FOOTE R H.? The history of artificial insemination：Selected notes and notables[J].? J. Anim. Sci.，2002，80（1）： 1-10.

[10] 李俊生，桑潤(rùn)滋，馬亞賓.? 生殖激素提高母牛繁殖率的研究進(jìn)展[J].? 河北畜牧獸醫(yī)，2000，16（5）：14.

[11] 宮艷斌.? 奶牛產(chǎn)后子宮保健技術(shù)研究[D].? 銀川：寧夏大學(xué)，2011.

[12] PERRY G A， PERRY B L. GnRH treatment at artificial insemination in beef cattle fails to increase plasma progesterone concentrations or pregnancy rates[J].? Theriogenology， 2009， 71（5）：775-779.

[13] 張永輝，劉繼華.? 淺談如何提高奶牛的繁殖率[J].? 現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2007 （6）：32-34.

[14] 李啟業(yè)，馬占海，阿增仁.? 用GnRH 類似物提高大通奶牛情期受胎率試驗(yàn)[J].? 青海畜牧獸醫(yī)雜志，2007，37（1）：26-27.

[15] 姚國(guó)良.? 定時(shí)輸精程序 （Ovsynch/TAI） 在奶牛繁殖上的應(yīng)用效果[J].? 中國(guó)奶牛， 2008（12）：33-35.

[16] 劉念銳，司? ?永，黃? ?峰，等.? 同期排卵-定時(shí)輸精技術(shù)在牛場(chǎng)的應(yīng)用[J].? ?黑龍江動(dòng)物繁殖，2011（5）：

48-49.

[17] 汪? ?志，劉連超，孫鳳俊，等.? 誘導(dǎo)牛同期發(fā)情技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].? 黑龍江動(dòng)物繁殖，2009，17（3）：13-14.

[18] T W GEARY，R R SALVERSON，J C WHITTIER. Synchronization of ovulation using GnRH or hCG with the CO-Synch protocol in suckled beef cows[J].? Journal of Animal Science.2001，79（10）：2536-2541.

[19] 余長(zhǎng)林，王富才，劉學(xué)洪.? 同期發(fā)情對(duì)奶牛繁殖障礙的治療效果[J].? 中國(guó)牛業(yè)科學(xué)，2015，41（1）：39-41.

[20] 曹曉云，王麗梅，史? ?剛.? 不同方法誘導(dǎo)黃牛同期發(fā)情效果試驗(yàn)[J].? 云南畜牧獸醫(yī)，2007（2）：25-26.

[21] 劉志平，白玉妍，劉? ?露，等.? 使用 PMSG，HCG 調(diào)節(jié)繁殖末期母藍(lán)狐發(fā)情和產(chǎn)仔效果的試驗(yàn)研究[J].? 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2005，9（2）：68-70.

（本文責(zé)編：鄭立龍）