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        炮制對(duì)決明子中六種游離蒽醌含量的影響

        2018-09-10 04:37:31戈大春沈多榮王卓君
        世界中醫(yī)藥 2018年7期
        關(guān)鍵詞:決明子炮制

        戈大春 沈多榮 王卓君

        摘要目的:比較炮制對(duì)決明子中主要活性成分游離蒽醌含量的影響。方法:采用高效液相色譜法檢測決明子中6種游離蒽醌類成分的含量,分別為橙黃決明素,大黃酸,決明蒽醌,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚,并比較其炮制前后的含量變化。結(jié)果:炮制后6種游離蒽醌變化情況為,橙黃決明素和大黃酸的含量變化沒有顯著性差異,決明蒽醌的含量升高了25%,大黃素的含量升高了21%,大黃酚的含量降低了15%,大黃素甲醚的含量降低了21%。結(jié)論:炮制對(duì)決明子中主要活性成分游離蒽醌類成分的含量會(huì)產(chǎn)生不同的影響,有些游離蒽醌含量保持不變,有些游離蒽醌含量會(huì)有顯著升高,有些游離蒽醌含量會(huì)明顯降低。

        關(guān)鍵詞決明子;炮制;游離蒽醌;含量變化

        Effects of Processing on the Content of Six Free Anthraquinones in Semen Cassiae

        Ge Dachun, Shen Duorong, Wang Zhuojun

        (Pharmaceutical Preparation Department, Suzhou Wuzhong People′s Hospital, Suzhou 215128, China)

        AbstractObjective:To compare the effects of processing on free anthraquinones which were the main active ingredient in Semen Cassiae. Methods:The content of six free anthraquinones in Semen Cassiae was determined by the highperformance liquid chromatographic method and compares the content changes before and after processing. The six free anthraquinones were aurantioobtusin, rhein, obtusifolin, emodin, chrysophanol and physcion. Results There was no significant difference in the content changes of aurantioobtusin and rhein, and the content of obtusifolin was increased by 25%. The content of emodin was increased by 21%, and the content of chrysophanol was decreased by 15%. The content of physcion was decreased by 21% after processing. Conclusion:Processing has different effects on the content of free anthraquinones. Some free anthraquinones contents remained unchanged while some increased significantly, and some decreased significantly.

        Key WordsSemen Cassiae; Processing; Free anthraquinones; Change in content

        中圖分類號(hào):R283;R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2018.07.050

        決明子為豆科一年生草本植物決明Cassia obtusifolia L或小決明Cassia tora L的干燥成熟種子[1]。決明子在臨床上為常用中藥,具有清肝明目、潤腸通便的功效[23]。決明子又稱“還瞳子”,含有多種維生素和豐富的氨基酸、脂肪、碳水化合物等,臨床實(shí)驗(yàn)證明,喝決明子茶可以清肝明目、防止視力模糊、降血壓、降血脂、減少膽固醇等,對(duì)于防治冠心病、高血壓都有較好的療效[4]。決明子在臨床上應(yīng)用有生決明子和炒決明子之分,其中生決明子長于清肝熱,潤腸燥,具有清熱明目,潤腸通便的功效,用于目赤腫痛,大便秘結(jié);炒決明子則寒瀉之性緩和,有平肝養(yǎng)腎的功效,可用于頭痛、頭暈、青盲內(nèi)障等[56]。因此,經(jīng)過炮制之后的決明子其性質(zhì)發(fā)生了較為明顯的改變,這與其中相關(guān)化學(xué)成分的改變有關(guān),因此,研究炮制前后決明子中有效成分的含量變化可對(duì)揭示決明子炮制之后藥性為何改變提供一定的科學(xué)依據(jù)。

        決明子中的蒽醌類成分是決明子中一大類代表性藥效成分,具有瀉下和抗氧化等活性。為了探索決明子炮制過程中相關(guān)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的變化規(guī)律,我們選擇了蒽醌類(橙黃決明素,大黃酸,決明蒽醌,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚)成分作為指標(biāo),采用高效液相色譜法,比較炮制前后蒽醌類共6個(gè)指標(biāo)性成分含量變化,為研究炮制對(duì)決明子藥效的改變提供一定的參考和借鑒。

        1儀器與試藥

        11儀器日本島津LC20AT型高效液相色譜儀(DAD檢測器,四元梯度泵,柱恒溫箱,在線脫氣機(jī)),BSA822CW型十萬之一電子天平(德國賽多利斯公司)。

        12試藥橙黃決明素,大黃酸,決明蒽醌,大黃素,大黃酚,大黃素甲醚對(duì)照品均由本實(shí)驗(yàn)室自制,結(jié)構(gòu)經(jīng)UV、NMR、MS、IR鑒定,用高效液相色譜法(HPLC)測定純度均>980%(峰面積歸一化法),乙腈(HPLC級(jí),F(xiàn)isher公司),甲醇(色譜純,F(xiàn)isher公司),水為重蒸水,其余試劑為分析純(北京化學(xué)試劑廠)。

        13分析樣品決明子藥材于2017年購自安徽亳州藥材市場,經(jīng)專家鑒定為豆科植物決明Cassia obtusifolia L的成熟種子,產(chǎn)于河北、安徽。

        決明子飲片由本實(shí)驗(yàn)室自行制備,炮制方法按照《中華人民共和國藥典》2015年版一部中決明子飲片項(xiàng)下規(guī)定操作,取凈決明子,照清炒法(附錄ⅡD)文火炒至微有香氣,取出,放涼,備用。

        2方法與結(jié)果

        21色譜條件Thermo Syncronis C18色譜柱(46 mm×150 mm,5 μm),流動(dòng)相乙腈(A)1%冰乙酸水溶液(B)梯度洗脫(0~60 min,35%~75%A),流速1 mL/min,柱溫30 ℃,檢測波長254 nm,進(jìn)樣量10 μL。

        22對(duì)照品溶液的制備精密稱取橙黃決明素、大黃酸、決明蒽醌、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚適量,置100 mL量瓶中,加75%甲醇溶解,定容至刻度,配置成質(zhì)量濃度分別為12130,6270,5420,689,4914,836 μg/mL的各對(duì)照品貯備液。精密吸取各對(duì)照品貯備液適量,配制成質(zhì)量濃度為10108,5225,2581,919,1092,697 μg/mL的混合對(duì)照品貯備液。

        23供試品溶液的制備取決明子生品及炮制品粉末(過四號(hào)篩)約02 g,精密稱定,置50 mL具塞錐形瓶中,精密加入75%甲醇25 mL稱定質(zhì)量,置水浴上加熱回流1 h,放冷,再稱定質(zhì)量,用75%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,用045 μm微孔濾膜濾過即得,備用。

        24專屬性試驗(yàn)精密量取“22”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液和供試品溶液各適量,按“21”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果,在該色譜條件下,各待測成分間、待測成分與雜質(zhì)峰間均能達(dá)到基線分離,分離度>15,其他成分對(duì)待測成分的測定無干擾,理論塔板數(shù)以橙黃決明素峰計(jì)>6 000。見圖1。

        25線性關(guān)系考察分別精密吸取混合對(duì)照品溶液050、100、200、400、600、800 mL,分別置10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,得到系列濃度的6種成分混合對(duì)照品溶液。進(jìn)樣10 μL,測定峰面積,記錄數(shù)據(jù)。分別以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸分析。見表1。

        26精密度試驗(yàn)吸取對(duì)照品溶液,按“21”項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次,每次10 μL,測定6種化合物的峰面積并計(jì)算RSD值。記錄橙黃決明素、大黃酸、決明蒽醌、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的峰面積,RSD分別為015%,012%,013%,016%,018%,011%(n=6),表明儀器精密度良好。

        “21”項(xiàng)下色譜條件測定,外標(biāo)法計(jì)算濃度,計(jì)算RSD值。結(jié)果橙黃決明素、大黃酸、決明蒽醌、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的RSD分別為21%,25%,24%,23%,22%,25%(n=6),表明重復(fù)性良好。

        28穩(wěn)定性試驗(yàn)按“22”項(xiàng)下方法操作制備決明子供試品溶液,在“21”項(xiàng)色譜條件下,分別在0,2,4,8,12,24 h測定。外標(biāo)法計(jì)算6種化合物不同時(shí)間點(diǎn)濃度并與0 h比較,計(jì)算RE值。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。見表2。

        29回收率試驗(yàn)稱取已知含量的決明子樣品6份,每份約500 mg,分別加入精密量取的12130 μg/mL的橙黃決明素070 mL、6270 μg/mL的大黃酸06 mL、5420 μg/mL的決明蒽醌03 mL、689 μg/mL的大黃素04 mL、4914 μg/mL的大黃酚05 mL、836 μg/mL的大黃素甲醚03 mL,按“22”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作,并按“21”項(xiàng)下色譜條件測定,以各化合物濃度計(jì)算回收率。化合物1、2、3、4、5、6的平均回收率在983%~992%之間,RSD<20%。

        210樣品測定結(jié)果取購自安徽亳州藥材市場的決明子生品6份和相應(yīng)的炮制品6份,按照上述“21”“22”項(xiàng)下成分含量測定方法,測定其中的橙黃決明素、大黃酸、決明蒽醌、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量,對(duì)生品和炮制品含量進(jìn)行比較。見表3。

        3討論

        決明子采用高效液相色譜法測定蒽醌準(zhǔn)確、靈敏,高效[78]。本研究表明決明子生品與炮制品比較,其中游離蒽醌橙黃決明素、大黃酸的含量未見明顯變化,說明在炮制過程種,這2種游離蒽醌成分的穩(wěn)定性較好。而決明蒽醌、大黃素的含量在生品基礎(chǔ)上經(jīng)過炮制之后,含量明顯增加,有可能是生品決明子其中所含的蒽醌苷類在炮制過程中分解產(chǎn)生了游離蒽醌苷元所造成的。大黃酚、大黃素甲醚的含量在炮制后明顯下降,說明這2種游離蒽醌在決明子中的穩(wěn)定性較差,在炮制過程種,部分成分被破壞損失,從而造成含量減少。

        對(duì)于橙黃決明素、大黃酸的含量未發(fā)生明顯變化的情況,也有可能是這2種游離蒽醌苷元含量處在一種動(dòng)態(tài)平衡之中,即使在炮制過程中,這種動(dòng)態(tài)平衡也沒有被打破。而另外2種含量變化情況的游離蒽醌,其含量動(dòng)態(tài)平衡在炮制過程中,因?yàn)榧訜岫黄茐?。其中含量減少的原因可能是生成苷元的速率由于炮制受熱而低于苷元分解的速率,而含量增加的原因也可能是生成苷元的速率由于炮制受熱高于了苷元分解的速率。

        不同炮制方法對(duì)決明子活性成分游離蒽醌含量影響的研究較多[912],其結(jié)果多比較不同炮制方法對(duì)蒽醌類成分含量的影響。對(duì)采用清炒法炮制對(duì)6種游離蒽醌含量的影響研究未見報(bào)道。對(duì)于決明子中這類蒽醌苷元由于炮制而導(dǎo)致的含量變化不同的研究結(jié)果,我們也正在對(duì)其變化的本質(zhì)原因進(jìn)行尋找,從而更好地指導(dǎo)中藥炮制過程,使其更加科學(xué)化,能夠在一定程度上更好地確保中藥品質(zhì),提升中藥質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn)

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        (2018-04-16收稿責(zé)任編輯:楊覺雄)

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