孫玉祿

摘要：利用搖瓶培養(yǎng)的方式，根據(jù)菌絲生物量、溶液pH和培養(yǎng)液中還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)篩選3個(gè)平菇品種進(jìn)行液體培養(yǎng)的可行性。結(jié)果顯示：平8633菌絲生物量最大，菌球均勻，適應(yīng)性較強(qiáng)，更適合用液體方式制作菌種。

關(guān)鍵詞：平菇；搖瓶培養(yǎng)；菌絲生物量；還原糖

中圖分類號(hào)：S646.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-1463（2018）05-0031-02

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.05.010

Study on Physiological Index Related with Pea Powdery Mildew

Resistance Induced by Erysiphe pisi

LU Jianying

（Gansu Academy of Agricultural Sciences，Gansu Lanzhou 730070）

Abstract：Taking eight different resistance to powdery mildew of pea varieties as the research object， we studied the relevant defence system changes of enzyme activity（SOD， POD， CAT）， chlorophyll content change rule between different varieties and different time after induced by Erysiphe pisi. The results showed that SOD activity were reduced after the first rise after infected as time change， SOD activity of resistant varieties were higher than susceptible cultivars； as time changePOD activity showed a trend of rising， POD activity of resistant varieties were higher than susceptible cultivars after infected； as time change CAT activity of most varieties were reduced after the first increase after infected； All varieties of chlorophyll content decreased after infected， which of resistantvarieties decline less than susceptible cultivars.SOD， POD activity change between varieties were significant difference. The ability of resistance to Powdery mildew of a pea variety is positively correlated with the activity of POD and the content of Chlorophyll.

Key words：Pea；Powdery mildew；Disease resistance；Defense enzyme；SOD；POD；CAT；Chlorophyll

平菇（Pleurtus ostrestus），別稱側(cè)耳，屬擔(dān)子菌亞門、傘菌目、口蘑科、側(cè)耳屬，是我國(guó)栽培最廣泛的食用菌之一，營(yíng)養(yǎng)豐富，肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是我國(guó)食用菌的主導(dǎo)品種。我國(guó)對(duì)平菇的栽培始于20世紀(jì)的70年代[1 ]，隨著食用菌生產(chǎn)機(jī)械化程度的提高，食用菌行業(yè)也逐漸步入了產(chǎn)業(yè)化、專業(yè)化、工廠化大規(guī)模生產(chǎn)的模式。液體菌種具有培養(yǎng)時(shí)間短、接種方便等優(yōu)點(diǎn)，是食用菌制種產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì)。目前關(guān)于開(kāi)展平菇菌種液體培養(yǎng)的技術(shù)報(bào)道有很 多[2 ]，但尚未出現(xiàn)可完全替代固體菌種進(jìn)行平菇栽培的成熟技術(shù)。鑒此，我們利用搖瓶培養(yǎng)的方式，根據(jù)菌絲生物量、溶液pH和培養(yǎng)液中還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)篩選3個(gè)平菇品種（平菇615、平2002-4、平8633）液體培養(yǎng)的可行性，以期為平菇液體菌種工廠化生產(chǎn)過(guò)程控制提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種 平菇615、平2002-4、平8633，由遼寧省微生物科學(xué)研究院提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基；搖瓶培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯20%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、維生素B110 mg、水1 000 mL。

1.2 斜面菌種的活化

將菌種接于PDA斜面培養(yǎng)基上，于25 ℃恒溫培養(yǎng)，長(zhǎng)滿斜面時(shí)作為搖瓶培養(yǎng)的一級(jí)菌種。

1.3 搖瓶菌種的制作與培養(yǎng)

用250 mL三角瓶，培養(yǎng)基裝量50 mL，于121 ℃、0.12 kPa壓力下滅菌30 min、冷卻后每瓶接入 1 cm2大小的斜面菌種，置黑暗處培養(yǎng)24 h。菌塊萌發(fā)后上搖床培養(yǎng)8 d，轉(zhuǎn)速178 r/min，培養(yǎng)溫度25 ℃，每天取1瓶檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)[3 ]。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 菌絲生物量 將三角瓶置于白色背景下觀察菌球大小、數(shù)量、均勻度，然后將溶液置離心機(jī)上離心10 min，轉(zhuǎn)速3 000 r/min。置恒重過(guò)的定性濾紙上過(guò)濾，再置60 ℃烘箱烘干至恒重，計(jì)算干重。

1.4.2 pH 用pH計(jì)測(cè)量。

1.4.3 還原糖 采用3，5-二硝基水楊酸法[4 ]測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)過(guò)程中觀察發(fā)現(xiàn)，平615菌球生長(zhǎng)較快，在第2天即可多點(diǎn)萌生。但菌絲生物量最低；平2002-4菌球大小不一，且培養(yǎng)至第5天時(shí)，培養(yǎng)液稍顯渾濁；平8633菌球較均勻，生物量最高。從圖1可以看出，培養(yǎng)前2 d，菌絲生長(zhǎng)緩慢，第3～6 天快速增長(zhǎng)，隨著培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)的消耗，菌絲生長(zhǎng)速度開(kāi)始下降。

整個(gè)過(guò)程中，溶液的pH一直呈增大趨勢(shì)，可能是由于菌絲分解培養(yǎng)液產(chǎn)生部分堿性物質(zhì)和后期菌球自溶產(chǎn)生堿性物質(zhì)有關(guān)，使培養(yǎng)液的pH略微升高（圖2）。還原糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)于試驗(yàn)前3 d快速增加，第5、6天又幾乎回落到初始水平（圖3）。說(shuō)明第6天以后，培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)利用已接近尾聲，繼續(xù)培養(yǎng)，會(huì)增加菌絲的自溶。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)表明，就供試的3個(gè)平菇品種來(lái)說(shuō)，同等條件下，平8633適應(yīng)性較強(qiáng)，更適合液體方式制作菌種。若計(jì)劃大規(guī)模液體菌種栽培，還需要做后期的栽培出菇對(duì)比試驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證菌種的適應(yīng)性。

平菇液體發(fā)酵培養(yǎng)，可以通過(guò)條件的摸索，找到不同品種的最適液體培養(yǎng)條件。平菇固體制種從母種到原種，再到栽培種，至少需要60 d左右。而液態(tài)深層發(fā)酵培養(yǎng)平菇菌種，則可快速生產(chǎn)菌絲體，縮短生產(chǎn)時(shí)間和成本。液態(tài)發(fā)酵食用菌菌種，不僅可以快速生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)食用菌，還可以進(jìn)一步利用液態(tài)發(fā)酵的食用菌蛋白質(zhì)，改善食用菌生產(chǎn)對(duì)木屑等原料的粗獷利用和對(duì)大自然的破壞。從投資收入與產(chǎn)出的角度來(lái)看，建議使用液體深層發(fā)酵的方法生產(chǎn)平菇，這樣既可節(jié)省成本和時(shí)間，又可以獲得較高的投資收益。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張金霞，陳 強(qiáng)，黃晨陽(yáng)，等. 食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷史、現(xiàn)狀與趨勢(shì)[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2015，34（4）：525-540.

[2] 王 芳，張玉萍，孟麗君. 平菇液體菌種培養(yǎng)條件的研究[J]. 食用菌，2008（6）：21-22.

[3] 賀曉龍，任桂梅，王雪峰，等. 平菇液體培養(yǎng)檢測(cè)指標(biāo)變化的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（3）：208-209.

[4] 王蘭青，高玉千，戚元成，等. 平菇液體菌種搖瓶和發(fā)酵罐生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)模型的比較[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，29（6）：927-930.

（本文責(zé)編： 劉 赟）